(Link) Nr kat. IR608

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD21
Klon 1F8
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR608
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD21, klon 1F8, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało daje odczyn z komórkami
dendrytycznymi grudek chłonnych i dojrzałymi komórkami B. Jest przydatne w identyfikacji zmian strukturalnych w
siatce włókien komórek dendrytycznych grudek chłonnych, które często występują w chłoniakach złośliwych (1).
Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną,
wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii
choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
Receptor C3d, CR2, receptor EBV (2).
Streszczenie
i informacje ogólne
CD21 to glikoproteina przezbłonowa, która naleŜy do rodziny uzupełniających białek regulujących. Składa się z
CD35, białka wiąŜącego C4, współczynnika H i CD55. Masa cząsteczkowa glikoproteiny CD21 wynosi ok. 145 000, a
masa formy rozpuszczalnej sCD21 wynosi 130 000. Obszar pozakomórkowy składa się z wielu powtarzanych
krótkich fragmentów, które zawierają kilka wyraźnych miejsc wiąŜących ligandy. Wynikiem wiązania określonych
ligandów jest róŜnicowa sygnalizacja transbłonowa za pośrednictwem końcowego łańcucha cytoplazmatycznego, w
którym znajdują się potencjalne miejsca fosforylacji kinazy C i tyrozyny (2, 3).
Ekspresję CD21 wykazują komórki dendrytyczne grudek chłonnych (FDC) i dojrzałe komórki B (3). Komórki FDC
tworzą trójwymiarową sieć w grudkach zawierających komórki B, która wyraźnie określa strukturę podziału
grudkowego (1). W komórkach B tkanek limfoidalnych zachodzi silna ekspresja CD21 w strefie brzeŜnej i
umiarkowana w komórkach B strefy płaszcza. Komórki B ośrodków rozmnaŜania nie wykazały odczynu z
większością CD21 mAbs. Komórki B szpiku kostnego wykazały nieznaczną ekspresję CD21 lub jej brak. Ekspresja
CD21 stopniowo zanika wraz z immunoglobuliną IgD po stymulacji komórek B w fazie spoczynkowej w badaniach in
vitro. CD21 wykryto w kilku typach komórek nabłonkowych. Słabą ekspresja została zaobserwowana w przypadku
komórek ostrych białaczek limfoblastycznych z limfocytami, podzbiorów prawidłowych tymocytów i dojrzałych
komórek T (3).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór azydku sodu o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: 1F8 (4). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Preparat CD21 oczyszczony z ludzkich migdałków do czystości 60% (4).
Swoistość
W testach Western blot immunogenu przeciwciało znakuje prąŜek o masie 145 kDa, co odpowiada CD21. Epitop
rozpoznawany przez przeciwciała znajduje się w zakresie fragmentu wiąŜącego C3d o masie 72 kDa (4).
Przeciwciało znakuje komórki lub linie komórkowe, które wykazują ekspresję CD21 (Raji, NC 37, komórki
migdałków). Nie stwierdzono odczynu w komórkach Jurkat (nie wykazujących odczynu z CD21) (linia komórek T) i
ludzkich erytrocytów (4).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali.
Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(117216-003)
Dako Denmark A/S
IR608/PL/LPF/25.04.08 str. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu.
JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania,
uŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach ok. 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki
uzyskuje się po wstępnej obróbce tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX, Target Retrieval Solution, Low pH
(10x), (Link) (nr. katalogowe K8005).
Odparafinowane skrawki: Zaleca się wstępną obróbkę utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych przy uŜyciu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja
uŜytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX, Target
Retrieval Solution, Low pH (10x), (Link) (nr kat. K8005). Dla aparatów PT Link naleŜy stosować następujące
parametry: temperatura wstępnego ogrzewania: 65 °C; temperatura i czas odmasko wania antygenu: 97 °C przez 20
(±1) minut; ochłodzić do 65 °C. Przepłuka ć skrawki rozcieńczonym buforem o temperaturze pokojowej EnVision
FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8005). Wyjąć magazynek na preparaty aparatu Autostainer ze zbiornika PT
Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w zbiorniku (np. PT Link Rinse Stadion, kod P109), zawierającym rozcieńczony
w temperaturze pokojowej bufor EnVision™ FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (kod K8002). Pozostawić szkiełka
buforze Wash Buffer na 1-5 minut.
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie,
jak i odmaskowanie moŜna wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje moŜna
znaleźć w Instrukcji uŜytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe naleŜy
poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako
Silanized Slides (nr kat. S3003).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002), zastępujący
roztwór High pH Target Retrieval Solution z tego zestawu, roztworem EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution,
Low pH (10x), (Link) (kod K8005). W oprogramowaniu Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i
czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek i odczynników przedstawiono w Instrukcji
uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Autostainer, naleŜy
skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ
przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z róŜnym
nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Mouse,
(Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: W reaktywnych rozrostach tkanki limfoidalnej przeciwciało silnie znakuje komórki FDC ośrodków
rozmnaŜania w 11/11 przypadków — odczyn w jasnych obszarach komórek FDC jest bardziej skoncentrowany,
a odczyn w ciemnych obszarach jest bardziej rozmyty. Przeciwciało znakuje komórki plazmatyczne i wykazuje
zanikające i mniej zgodne znakowanie limfocytów w strefie płaszcza. Komórki wyścielające zatoki i monocytoidalne
komórki B są słabo znakowane (1). W migdałkach komórki dendrytyczne grudek chłonnych w ośrodkach
rozmnaŜania wykazują umiarkowany lub silny odczyn, a podzbiór aktywowanych komórek B w strefie płaszcza
wykazuje odczyn umiarkowany.
Tkanki nieprawidłowe: W 6 przypadkach przewlekłej białaczki limfocytowej z komórek B przeciwciało wykazało słaby
odczyn powierzchni komórek nowotworowych w czterech przypadkach i w czterech przypadkach stwierdzono
dodatni odczyn w komórkach FDC w nielicznych pozostałych ośrodkach rozmnaŜania. W 8/8 przypadków chłoniaka
z komórek płaszcza zaobserwowano odczyn dodatni w luźnych, zmienionych chorobowo i poszerzonych siatkach
komórek FDC o strukturze guzowatej i rozlanej — przypominający odczyn występujący w nieprawidłowych grudkach
pierwotnych. W 11/11 przypadków chłoniaka typu grudkowego w nieprawidłowych grudkach zaobserwowano zwarte,
wyraźnie zarysowane, poszerzone i czasami połączone siatki FDC. W pięciu przypadkach o wysokim stopniu zmian
w obszarach rozlanego chłoniaka z duŜych komórek zostało zaobserwowane luźne i nieregularne znakowanie
komórek FDC. W 7/7 przypadków chłoniaków z komórek B o niskim stopniu typu MALT przeciwciało znakowało
poszerzone siatki komórek FDC. W przypadkach pierwotnych chłoniaków ślinianek i Ŝołądka zaobserwowano zwarty
i zlewający się odczyn. W 5/5 przypadków chłoniaków z komórek T i chłoniaków z komórek B z duŜą zawartością
histiocytów przeciwciało znakowało kilka skompresowanych resztkowych grudek w części peryferyjnej w progresji
zmian chłoniakowych. W 9/9 przypadków angioimmunoblastycznych chłoniaków z komórek T grupy komórek
dendrytycznych z cechami morfologicznymi komórek FDC chłoniaki często obejmowały proliferujące naczynia
(117216-003)
Dako Denmark A/S
IR608/PL/LPF/25.04.08 str. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
występujące za naczyniami włosowatymi. W 4/4 przypadki chłoniaków Hodgkina struktur guzowatych, w komórkach
o typie z przewagą limfocytów przeciwciało znakowało powiększone siatki komórek FDC nakładających się na
poszerzone strefy płaszcza. W 15 przypadkach chłoniaków Hodgkina w formach stwardnienia guzowatego
przeciwciało znakowało wyraźnie określone, czasami nieregularne siatki komórek FDC otaczające komórki guza
o odczynie ujemnym w 11 przypadkach klasy l oraz zaobserwowano nieliczne przypadki znakowania lub jego brak
w 4 przypadkach w chorobach klasy ll (1). W mięsakach komórek dendrytycznych grudek przeciwciało
znakowało komórki nowotworowe w 17/17 przypadków (5). W innym badaniu (6) przeciwciało znakowało komórki
Reed-Sternberga i Hodgkina w 7/37 przypadków stwardnienia guzowatego, 2/41 przypadków form
mieszanokomórkowych i 5/12 przypadków chłoniaka Hodgkina z ograniczeniem liczby limfocytów.
Nie zaobserwowano
odczynu w komórkach guza w 4 przypadkach o typie z przewagą limfocytów.
W 9 przypadkach, w których przeciwciało znakowało komórki Reed-Sternberga i Hodgkina, komórki nie wykazywały
ekspresji innych znaczników skojarzonych z komórkami B i T (6).
Piśmiennictwo
1.
Bagdi E, Krenacs L, Krenacs T, Miller K, Isaacson PG. Follicular dendritic cells in reactive and neoplastic
lymphoid tissues: a reevaluation of staining patterns of CD21, CD23, and CD35 antibodies in paraffin sections
after wet heat-induced epitope retrieval. Appl Immunohistochem Molecul Morphol 2001;9:117-24.
2.
Timens W. CD Guide. CD21. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY,
Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th
International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing
Inc.; 1997. p. 1125.
3.
Timens W. BC5. CD21 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of
the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 140-2.
4.
Petzer AL, Schulz TF, Stauder R, Eigentler A, Myones BL, Dierich MP. Structural and functional analysis of
CR2/EBV receptor by means of monoclonal antibodies and limited tryptic digestion. Immunology 1988;63:47-53.
5.
Chan JKC, Fletcher CDM, Nayler SJ, Cooper K. Follicular dendritic cell sarcoma. Clinicopathologic analysis of
17 cases suggesting a malignant potential higher than currently recognized. Cancer 1997;79:294-313.
6.
Nakamura S, Nagahama M, Kagami Y, Yatabe Y, Takeuchi T, Kojima M, et al. Hodgkin’s disease expressing
follicular dendritic cell marker CD21 without any other B-cell marker. A clinicopathologic study of nine cases. Am
J Surg Pathol 1999;23:363-76.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117216-003)
Dako Denmark A/S
IR608/PL/LPF/25.04.08 str. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17