FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A Klon A103

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
Melan-A
Klon A103
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR633
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human Melan-A, klon A103, Ready-to-Use, (Link), jest przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało jest uŜyteczne w identyfikowaniu
czerniaków (1, 2), a po wykluczeniu czerniaków — w identyfikowaniu raków kory nadnerczy (3, 4). Przeciwciało
stanowi równieŜ uŜyteczny marker guzów typu angiomyolipoma (5). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku
barwienia musi być uzupełniona przez badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i
powinna być przeprowadzana przez doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych
badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
MART-1
Streszczenie
i informacje ogólne
Melan-A — izolowane jako antygen swoisty dla czerniaków — stanowi białko przezbłonowe złoŜone ze 118
aminokwasów, o nieznanej funkcji (1). Gen Melan-A został sklonowany z linii ludzkich komórek czerniaka, a jego
ekspresja w czerniakach została rozpoznana przez autologiczne limfocyty cytotoksyczne T (6). Białko Melan-A
występuje w skórze, siatkówce oraz w większości hodowanych melanocytów i czerniaków. Nie występuje w
znaczącej większości innych zbadanych tkanek i raków (1, 6, 7). Jednak ekspresję Melan-A stwierdzono w guzach
typu angiomyolipoma (5). Razem z Melan-A zidentyfikowano siedem innych antygenów czerniaka: MAGE-1,
MAGE-3, tyrozynaza, gp100, gp75, BAGE-1 i GAGE-1 — wszystkie są rozpoznawane przez autologiczne limfocyty
cytotoksyczne T (1).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: A103. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Rekombinowane białko występujące u E. coli, które odpowiada Melan-A (1).
Swoistość
W testach Western blot lizatów komórek z linii dodatnich pod względem mRNA Melan-A przeciwciało znakowało
dublet o masie 20–22 kDa, a w komórkach ujemnych pod względem mRNA Melan-A przeciwciało nie znakowało
Ŝadnych prąŜków (1).
Analiza immunoprecypitatów linii komórek SK-MEL-13 i SK-MEL-19 dodatnich pod względem Melan-A wykazuje, Ŝe
przeciwciało barwi dublet 20–22 kDa odpowiadający Melan-A, w przypadku komórek ujemnych pod względem
mRNA Melan-A przeciwciało nie barwi Ŝadnych prąŜków (1).
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
(117074-002)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
IR633PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek i materiały
dodatkowe
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Link) (nr kat. K8000). W systemie Autostainer Link
wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Zalecana objętość uŜytego odczynika to 1 x 200 µL lub
2 x 150 µL na preparat. Szczegółowe informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników
przedstawiono w Instrukcji uŜytkownika aparatu Autostainer Link. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym
systemie Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury
inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobów jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. JeŜeli patolog oceniający preparat Ŝyczy sobie
wybarwienia innym natęŜeniu, czasy inkubacji oraz uŜycie szablonów wizualizacji EnVision FLEX/EnVision
FLEX+ mogą zostać zmienione. W celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu, naleŜy
skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Link) (nr kat. K8008).
Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować prawidłową skórę i
czerniaki złośliwe, natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn
reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX
Negative Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała dają odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciało barwi skórę. Nie barwi natomiast tkanek Ŝołądka, płuc, wątroby, śledziony, nerek,
jąder, pęcherza moczowego, sutków, jajników, mięśni gładkich i tkanki tłuszczowej (1, 5). Zgłaszano barwienie
komórek jajników, jąder i kory nadnerczy (2).
Tkanki nieprawidłowe: W przypadku przerzutów czerniaka przeciwciało barwi 16/21 (przypadków) — uzyskano
homogeniczny, cytoplazmatyczny odczyn w >80–90% komórek czerniaka (z wyjątkiem jednej komórki, która
wykazywała odczyn ogniskowy (1). W innym badaniu 10 łagodnych znamion melanocytarnych, 10 czerniaków
pierwotnych i 75 czerniaków przerzutowych przeciwciało dało odczyn z łagodnymi zmianami melanocytarnymi
(10/10), czerniakami pierwotnymi ( 7/10) i przerzutami czerniaka 61/75 (2).
Przeciwciało nie dało odczynu z Ŝadnym ze 111 raków — głównie raków gruczołowych i raków płaskokomórkowych,
40 guzów zarodkowych i 33 róŜnych raków nabłonkowych niezawierających komórek barwnikowych. Przeciwciało
dało odczyn z rakami kory nadnerczy (5/5), pierwotnymi (16/16) i przerzutowymi (13/13) rakami kory nadnerczy,
guzami komórek Sertoliego-Leydiga jąder (4/4), a takŜe z guzami komórek Sertoli-Leydig jajników (3/4) (3). W innym
badaniu, które obejmowało 316 przypadków, do których naleŜało: 21 nowotworów kory nadnerczy, 16 raków
przerzutowych do nadnerczy, 10 guzów chromochłonnych i 269 raków pozanadnerczowych, przeciwciało dało
odczyn z rakami kory nadnerczy (14/14), rakami kory nadnerczy (7/7), rakami przerzutowymi do kory nadnerczy
(0/16) i guzami chromochłonnymi (0/10). Spośród 269 raków pozanadnerczowych przeciwciało dało odczyn z
jednym rakiem surowiczym jajnika (4).
W badaniu 18 guzów typu angiomyolipomas przeciwciało dało odczyn z wszystkimi 18 przypadkami (5). W innym
badaniu przeciwciało dało odczyn z wszystkimi 18 przypadkami guzów typu angiomyolipomas (2).
(117074-002)
Dako Denmark A/S
IR633PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1. Chen Y-T, Stockert E, Jungbluth A, Tsang S, Coplan KA, Scanlan MJ, et al. Serological analysis of
Melan-A(MART-1), a melanocyte-specific protein homogeneously expressed in human melanomas. Proc Natl
Acad Sci 1996;93:5915–9.
2. Jungbluth AA, Busam KJ, Gerald WL, Stockert E, Coplan KA, Iversen K, et al. An anti-Melan-A monoclonal
antibody for the detection of malignant melanoma in paraffin-embedded tissues. Am J Surg Pathol 1998;
22:595–602.
3. Busam KJ, Iversen K, Coplan KA, Old LJ, Stockert E, Chen Y-T, et al. Immunoreactivity for A103, an antibody to
Melan-A (Mart-1), in adrenocortical and other steroid tumors. Am J Surg Pathol 1998;22:57–63.
4. Loy TS, Phillips RW, Linder CL. A103 immunostaining in the diagnosis of adrenal cortical tumors. Arch Pathol
Lab Med 2002;126:170–2.
5. Jungbluth AA, Iversen K, Coplan K, Williamson B, Chen Y-T, Stockert T, et al. Expression of melanocyteassociated markers gp-100 and Melan-A/MART-1 in angiomyolipomas. Virchows Arch 1999;434:429–35.
6. Coulie PG, Brichard V, Van Pel A, Wölfel T, Schneider J, Traversari C, et al. A new gene coding for a
differentiation antigen recognized by autologous cytolytic T lymphocytes on HLA-A2 melanomas. J Exp Med
1994;180:35–42.
7. Kawakami Y, Eliyahu S, Delgado CH, Robbins PF, Rivoltini L, Topalian SL, et al. Cloning of the gene coding for
a shared human melanoma antigen recognized by autologous T cells infiltrating into tumor. Proc Natl Acad Sci
1994;91:3515–9.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(117074-002)
Dako Denmark A/S
IR633PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17