Monoclonal Mouse Anti-Human Neuron-Specific Enolase

Monoclonal Mouse
Anti-Human Neuron-Specific Enolase
Clone BBS/NC/VI-H14
Nr kat. M 0873
Wydanie 20.01.03
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Neuron-Specific Enolase (NSE), Clone BBS/NC/VI-H14, jest
przeznaczone do badań immunocytochemicznych. Przeciwciało znakuje zarówno normalne, jak i nowotworowe
komórki pochodzenia neuronalnego i neuroendokrynnego (1), i chociaż NSE nie jest wyłącznie markerem
neuronalnym, może być stosowane do identyfikacji nerwów obwodowych, guzów neuroendokrynnych i układu
nerwowego, jak np. nerwiaka, glejaka siatkówki, desmoplastycznego czerniaka złośliwego i drobnokomórkowego
raka płuc (2, 3). Identyfikacja różnicująca jest wspomagana przez wyniki panelu przeciwciał. Interpretację
powinien przeprowadzić wykwalifikowany patolog w oparciu o historię choroby pacjenta oraz inne testy
diagnostyczne.
Synonimy antygenu
-enolaza i białko 14-3-2 (4)
Wstęp
Enolazy (hydrolaza 2-fosfo-D-glicerynianowa) są homo- i heterodimerowymi izoenzymami glikolitycznymi,
katalizującymi interkonwersję 2-fosfoglicerynianu i fosfoenolopirogronianu. Trzy podjednostki,  (46 kDa),  (44
kDa) oraz  (46 kDa), stanową elementy budujące cząsteczki enolazy; dotychczas wyróżniono pięć postaci (,
, ,  i ) enzymu (5). Enolazy dzielą się na trzy główne grupy, w zależności od miejsca występowania:
enolazę nie-neuronową (NNE lub ), enolazę mięśniową (MSE lub ) oraz enolazę neurono-swoistą (NSE lub )
(3).
Odczynnik dostarczony
Mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczone w postaci płynnej jako supernatant hodowli komórkowej
oczyszczony przez dializę z 0,05 mol/L Tris/HCL o pH 7,2 i zawierający 15 mmol/L NaN3.
Klon: BBS/NC/VI-H14 (1). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie IgG u myszy: zob. informację podaną na etykiecie fiolki.
Immunogen:
-enolaza oczyszczona, uzyskana z ludzkiego mózgu metodą dysocjacji-ponownego wiązania w kolumnie
chromatograficznej typu chromofocusing (1).
Swoistość
Podczas stosowania techniki „Western-blot” wobec zredukowanej, SDS-zdenaturowanej oczyszczonej ludzkiej enolazy, -enolazy oraz ekstraktów mięśni ludzkich zawierających -enolazę przeciwciało znakuje wyłącznie
podjednostkę  enolazy (1).
Jak wykazano w badaniu immunocytochemicznym, przeciwciało reaguje krzyżowo z białkowym równoważnikiem
NSE świnek morskich (1).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Produkt zawiera materiał pochodzenia zwierzęcego; dlatego należy go traktować jako potencjalnie zakaźny.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8°C. Nie używać po dacie ważności podanej na etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są
przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować te warunki. Nie ma
oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek
pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie
można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje podejrzenie, że przyczyną może być problem z
przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z działem pomocy technicznej naszej firmy.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało można stosować dla znakowania skrawków tkanek utrwalonych w formalinie,
zatopionych w parafinie. Zaleca się wstępne przygotowanie tkanek za pomocą podwyższonej temperatury
podczas odzyskiwania epitopu. Optymalne wyniki uzyskuje się przy użyciu Dako Target Retrieval Solution, nr
kat. S 1700, Dako Target Retrieval Solution o wysokim pH, nr kat. S 3308, 10 mmol/L buforu cytrynianowego o
pH 6,0 lub 10 mmol/L buforu Tris, 1 mmol/L EDTA o pH 9,0. Wstępne przygotowanie tkanek proteinazą K okazało
się niszczące dla epitopu. Nie wolno dopuścić do wyschnięcia skrawków tkanki podczas przygotowania lub
następującej po nim procedury barwienia immunocytochemicznego.
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciało Monoclonal Mouse Anti-Human Neuron-Specific Enolase (NSE), nr kat. M 0873,
można rozcieńczać w zakresie 1:100-1:200 w przypadku stosowania na skrawkach ludzkiej okrężnicy utrwalonych
w formalinie i zatopionych w parafinie, przy zastosowaniu podwyższonej temperatury podczas odzyskiwania
epitopu w Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, przez 20 minut oraz inkubacji w temperaturze pokojowej
z pierwszym przeciwciałem przez 30 minut. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od próbki i
metody przygotowania i powinny być określone przez każde z poszczególnych laboratoriów. Zalecaną kontrolą
(106754-002)
M 0873/PL/HEW/20.01.03 p. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Faks +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
ujemną jest Dako Mouse IgG1, nr kat. X 0931, rozcieńczona do takiego samego stężenia mysiego IgG jak
pierwsze przeciwciało. Jeśli stabilność rozcieńczonego przeciwciała i kontroli ujemnej nie została ustalona
podczas rzeczywistej procedury barwienia, zaleca się, aby rozcieńczać te odczynniki bezpośrednio przed użyciem
lub rozcieńczyć w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S 0809. Kontrolę dodatnią i ujemną należy
wykonać jednocześnie z testem próbki pacjenta.
Wizualizacja: Zaleca się stosowanie zestawu DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 oraz zestawów DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. Należy postępować zgodnie z procedurą załączoną do wybranego
zestawu wizualizacji.
Automatyzacja: Przeciwciało jest odpowiednie do barwienia immunocytochemicznego przy wykorzystaniu
platform automatycznych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują cytoplazmatyczny wzór barwienia. W neuronach znakowanie
występuje zarówno w cytoplazmie, jak i wypustkach.
Tkanki normalne: Przeciwciało znakuje neurony ludzkiej kory mózgowej oraz jądra komórek pnia mózgu (1).
Ponadto przeciwciało znakuje komórki zwojów nerwowych ludzkiego przewodu żołądkowo-jelitowego oraz
rdzenne i bezrdzenne włókna nerwowe (1). W jądrach zdrowych dorosłych przeciwciało wykazuje słabe
immunobarwienie spermatogonii (3).
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakuje guzy pochodzące od neuronów, komórek zwojów nerwowych i nerwów
obwodowych lub je zawierające. Jednak w sposób specyficzny mogą być znakowane również guzy o pochodzeniu
nie-neuronalnym jak, np. oponiaki, rdzeniaki, gwiaździaki, glejaki, oligogwiaździaki, oligodendroglejaki, gruczolaki
przysadki, nerwiaki, wyściółczaki, oponiakomięsaki, glejakomięsaki i przerzuty o zróżnicowanym pochodzeniu, tj.
czerniaki, rak drobnokomórkowy płuca oraz nowotwory niezróżnicowane (1, 4). Ponadto przeciwciało znakuje
guzy pochodzące od gamet, tj. raki in-situ jąder, nasieniaki oraz raki zarodkowe (3).
Piśmiennictwo
1. Soler Federsppiel BS, Cras P, Gheuens J, Andries D, Lowenthal A. Human -enolase: two-site immunoradiometric assay with a single monoclonal antibody. J Neurochem 1987;48:22-8.
2. Anstey A, Cerio R, Ramnarain N, Orchard G, Smith N, Jones EW. Desmoplastic malignant melanoma. An
immunocytochemical study of 25 cases. Am J Dermatopathol 1994;16:14-22.
3. Kang J-L, Meyts ER, Skakkebak NE. Immunoreactive neuron-specific enolase (NSE) is expressed in
testicular carcinoma-in-situ. J Pathol 1996;178:161-5.
4. Cras P, Martin JJ, Gheuens J. -enolase and glial fibrillary acidic protein in nervous system tumors. An
immunohistochemical study using specific monoclonal antibodies. Acta Neuropathol 1988;75:377-84.
5. Shimizu A, Suzuki F, Kato K. Characterization of , ,  and  human enolase isoenzymes, and
preparation of hybrid enolases (,  and ) from homodimeric forms. Biochim Biophys Acta 1983;748:27884.
Objaśnienie symboli
(106754-002)
Numer katalogowy
Zakres temperatur
Urządzenie medyczne do
diagnostyki in vitro
Nr serii
Przed użyciem zapoznać się z
instrukcjami
Termin ważności
Producent
M 0873/PL/HEW/20.01.03 p. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Faks +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17