Polyclonal Rabbit Anti-Human IgA Nr kat. A 0262 Wydanie

Polyclonal Rabbit
Anti-Human IgA
Nr kat. A 0262
Wydanie 01.12.02
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
Polyclonal Rabbit Anti-Human IgA, nr kat. A 0262, jest przeznaczone do immunohistochemii. Nadaje się również
do testów ELISA i immunoblottingu (1).
W immunohistochemii przeciwciało wiąże się z komórkami plazmatycznymi i pokrewnymi komórkami
limfoidalnymi zawierającymi IgA i znajduje zastosowanie w diagnostyce chorych z procesem nowotworowym
wywodzącym się\ z limfocytów B (2-4). Ponadto może być użyte w różnicowaniu nowotworowego rozrostu
monoklonalnego od reaktywnej hiperplazji komórek plazmatycznych (2, 5). Pełna identyfikacja różnicowa wymaga
zastosowania panelu przeciwciał.
Interpretacji wyników może dokonywać osoba wykwalifikowana, w kontekście wywiadu chorobowego i innych
badań diagnostycznych.
Wprowadzenie
Ludzkie immunoglobuliny składają się zasadniczo z dwóch identycznych łańcuchów ciężkich (m.cz. około 50 000)
i
identycznych łańcuchów lekkich (m.cz. około 20 000). Te cztery łańcuchy są powiązane kowalencyjnie
mostkami
dwusiarczkowymi. Łańcuchy lekkie mogą być kappa lub lambda. Pięć klas immunoglobulin: IgA,
IgD, IgE, IgG i IgM różni budowa łańcucha ciężkiego, a IgA i IgM mogą też występować w różnych formach
polimerycznych. Łańcuch ciężki IgA nazywa się łańcuchem alfa. W surowicy około 80% IgA stanowi monomer,
podczas gdy w wydzielinach,
jak ślina, śluz jelitowy czy oskrzelowy, wydzielinie z nosa, pocie, mleku i siarze
dominuje dimeryczna wydzielnicza
IgA (sIgA). Poza czterema łańcuchami lekkimi i czterema łańcuchami alfa
dimeryczna sIgA zawiera jeszcze łańcuch łączący J i fragment wydzielniczy (secretory komponent). Ten fragment
chroni sIgA przed wydzielniczymi proteazami. Masa cząsteczkowa dimerycznej sIgA wynosi 390 000 (6).
Normalna populacja komórek B jest poliklonalna i produkuje szeroki zakres różnych cząsteczek immunoglobulin.
W przeciwieństwie do sytuacji fizjologicznej w większości procesów nowotworowych dochodzi do proliferacji
monoklonalnej komórek wykazujących produkcję jednego tylko typu łańcucha lekkiego, podczas gdy ta sama
komórka może produkować więcej niż jeden łańcuch ciężki. Ograniczona ekspresja immunoglobulin przez linie
komórek nowotworowych sprawia, że do identyfikacji I określenia izotypu takich komórek nadają się przeciwciała
przeciwko łańcuchom lekkim i ciężkim immunoglobulin (7).
Odczynnik dostarczony
Oczyszczona frakcja globulinowa surowicy króliczej, w formie płynnej. Zawiera 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3.
Stężenie białka g/L: patrz etykietka na fiolce. Miano przeciwciał: (SRI): 2 200 mg/L (8).
Różnice w mianie pomiędzy poszczególnymi seriami A 0262 nie przekraczają 10%. Uzyskano to dzięki
doprowadzaniu miana każdej serii do stałej wartości próby referencyjnej, przechowywanej w temp. -80oC.
Immunogen
Immunoglobuliny IgA izolowane z surowicy ludzkiej.
Swoistość
Przeciwciało reaguje z łańcuchem alfa ludzkiej IgA. Ślady zanieczyszczających przeciwciał zostały usunięte przez
adsorbcję w fazie stałej z białkami surowicy ludzkiej.
Swoistość przeciwciała została potwierdzona następująco:
Immunoelektroforeza krzyżowa: W immunoelektroforezie krzyżowej z użyciem 12.5 μL przeciwciała A 0190 na
cm2 żelu po rozdzieleniu 2 μL ludzkiego osocza, po wybarwieniu Coomassie Brilliant Blue pojawia się tylko
precypitacyjny odpowiadający ludzkiej IgA.
ELISA: Nie zaobserwowano znaczącej reakcji w pośrednim teście z użyciem IgG i IgM jako przeciwciał
opłaszczających. W metodzie z podwójnym przeciwciałem nie wykazano reakcji z ludzkim osoczem pozbawionym
IgA.
Przeciwciało może reagować krzyżowo z immunoglobulinami innych gatunków. Jak wykazano w
immunoelektroforezie rakietkowej przeciwciało reaguje krzyżowo z odpowiednimi białkami surowicy krowy, jelenia,
kozy, konia, norki, myszy, tchórza, owcy i świni (9).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych metali.
Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
4. Produkt może być stosowany w różnych technikach i w zestawieniu z różnymi typami próbek i materiałów, a
zatem każde laboratorium powinno ustalić własny system kontroli jakości.
Przechowywanie
Przechowywać w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na opakowaniu. Jeśli produkt był
przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić jakość produktu. Nie ma
wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z próbkami badanymi powinno
się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez zmiany procedur laboratoryjnych
i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy skontaktować się z serwisem technicznym firmy
Dako.
(106745-002)
A 0262/PL/PAH/01.12.02 str. 1/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
IMMUNOCYTOCHEMIA
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: Przeciwciało może być zastosowane do znakowania tkanki utrwalonej w formalinie i
zatopionej w parafinie. Zalecane jest wstępne trawienie tkanki proteinazą K, nr kodu S 3020. Przy odsłonięciu
epitopów przez ogrzewanie najlepsze wyniki uzyskano stosując Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700,
Dako Target Retrieval Solution High pH, nr kat. S 3308, Dako Target Retrieval Solution pH 9,0, nr kat. S 2368, lub
10 mmol/L bufor Tris, 1 mmol/L EDTA, o pH 9,0. Nieco gorsze wyniki uzyskano stosując bufor cytrynianowy, 10
mmol/L, o pH 6,0. Skrawki tkankowe nie powinny wysychać podczas odslaniania epitopów ani podczas barwienia.
Skrawki mrożone i preparaty komórkowe: Przeciwciało nadaje się do barwienia skrawków mrożonych utrwalanych
acetonem (10).
Zalecenia rozcieńczania
Rozcieńczenie: Polyclonal Rabbit Anti-Human IgA, nr kat. A 0262, może być używane w zakresie rozcieńczeń
1:100-1:200, gdy się go używa na skrawki ludzkich migdałków podniebiennych utrwalane formaliną i zatapiane w
parafinie, stosując 20 min. odsłanianie epitopów przez ogrzewanie w Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S
1700, i inkubacjąc 30 min. z pierwszym przeciwciałem w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się
różnić zależnie od próbki i metod jej przygotowania, i powinny zostać dobrane w każdym laboratorium. Zalecaną
kontrolą negatywną jest Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (adsorbowana w fazie stałej), nr kat. X 0936,
rozcieńczona do takiego samego stężenia białka jak roztwór pierwszego przeciwciała. Jeśli nie udowodniono
trwałości przeciwciała w danej metodzie, zaleca się rozcieńczanie go tuż przed użyciem lub rozcieńczanie w Dako
Antibody Diluent, nr kat. S 0809.
Uwidocznienie: Zalecane są zestawy odczynnikowe DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679, oraz zestaw DAKO
EnVision™+/HRP, nr kat. K 4008 i K 4010. Procedura wykonania jest opisana w każdym z zestawów.
Opis wyników
Komórki wyznakowane przeciwciałem wykazują barwienie cytoplazmy i/lub błony komórkowej.
Normalne tkanki: W zamrożonych skrawkach reaktywnych węzłów chłonnych przeciwciało znakuje wiele komórek
plazmatycznych, a także okazyjnie komórki centralne grudek i materiał pozakomórkowy grudek (10).
Tkanki patologiczne: W dwóch badaniach oceniających 33 (3) i 29 (4) zatopione w parafinie tkanki z przypadków
różnych rodzajów nowotworów wywodzących się z komórek plazmatycznych, barwienie przeciwciałem wykazało
dobrą korelację z obecnością monoklonalnej IgA w surowicy lub moczu. Jednoznaczne odróżnienie reaktywnej
hiperplazji i monoklonalnego rozrostu komórek B było możliwe w zestawieniu tego przeciwciała z innymi
przeciwciałami przeciwko immunoglobulinom (2), zwłaszcza przeciwko łańcuchom lekkim (5).
ELISA
Zalecenia rozcieńczania
W metodzie kanapkowej z podwójnym przeciwciałem przeciwko IgA, Ogólna instrukcja “Dako “General
ELISA
Procedure” (Zamówienie nr 30 023) może być zalecona jako wskazówka. Procedura podana poniżej służy do
oznaczenia IgA w surowicy (zakres 2,5 do 100 g/L).
1.
2.
3.
Przeciwciało opłaszczające: Polyclonal Rabbit Anti-Human IgA, nr kat. A 0262, rozcieńczone do stężenia białka
10 mg/L.
Standard: Dako Human Serum Protein Calibrator, nr kat X 0908, rozcieńczony 1:23 400 do 936 000.
Rozcieńczenie próbek: 1:60 000.
Przeciwciało wykrywające: Dako Peroxidase-Conjugated Polyclonal Rabbit Anti-Human IgA, nr kat. P 0216.
Rozcieńczenie: 1:4 000.
Jeśli nie udowodniono trwałości rozcieńczonego odczynnika w tym teście, zaleca się rozcieńczać go tuż przed
użyciem.
Literatura
(106745-002)
1.
Withold W, Reinauer H. An immunoblotting procedure following agarose gel electrophoresis for detection of
Bence Jones proteinuria compared with immunofixation and quantitative light chain determination. Eur J
Clin Chem Clin Biochem 1995;33:135-8.
2.
Taylor CR, Burns J. The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in
formalin-fixed, paraffin-embedded tissues using peroxidase-labelled antibody. J Clin Pathol 1974;27:14-20.
3.
Taylor CR, Mason DY. The immunohistological detection of intracellular immunoglobulin in formalin-paraffin
sections from multiple myeloma and related conditions using the immunoperoxidase technique. Clin exp
Immunol 1974;18:417-29.
4.
Taylor CR, Russell R, Chandor S. An immunohistologic study of multiple myeloma and related conditions,
using an immunoperoxidase method. Am J Clin Pathol 1978;70:612-22.
5.
Beschorner R, Horny H-P, Petrusch UR, Kaiserling E. Frequent expression of haemopoietic and nonhaemopoietic antigens by reactive plasma cells: an immunohistochemical study using formalin-fixed,
paraffin-embedded tissue. Histol Histopathol 1999;14:805-12.
6.
Klein J, Hořejši V. Immunology. 2nd ed. Abingdon (UK): Blackwell Science Ltd; 1999. p. 226-7, 238-46.
7.
Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 217-9.
8.
Becker W. Determination of antisera titres using the single radial immunodiffusion method. Immunochem
1969;6:539-46.
9.
Hau J, Nilsson M, Skovgaard-Jensen H-J, de Souza A, Eriksen E, Wandall LT. Analysis of animal serum
proteins using antisera against human analogous proteins. Scand J Lab Anim Sci 1990;17:3-7.
10.
Harris NL, Poppema S, Data RE. Demonstration of immunoglobulin in malignant lymphomas. Use of an
immunoperoxidase technic on frozen sections. Am J Clin Pathol 1982;78:14-21.
A 0262/PL/PAH/01.12.02 str. 2/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Objaśnienia symboli
(106745-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
A 0262/PL/PAH/01.12.02 str. 3/3
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17