Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
CD31, Endothelial Cell
Klon JC70A
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR610
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD31, Endothelial Cell, klon JC70A, Ready-to-Use, (Link) jest
przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało wstępnie znakuje
komórki śródbłonka i jest przydatne w identyfikacji łagodnych i złośliwych nowotworów pochodzenia naczyniowego,
w tym mięsaków naczyniowych (1, 2). Dodatkowo to przeciwciało jest użyteczne w oznaczaniu naczyń podczas
określania angiogenezy w kilku typach guzów (3–5). Interpretacja kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi
być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
PECAM-1 (cząsteczka adhezyjna płytki/komórki śródbłonka 1) (6)
Streszczenie
i informacje ogólne
CD31 jest jednołańcuchowym białkiem transbłonowym typu 1 o masie cząsteczkowej ok. 135 kDa, należącym do
nadrodziny immunoglobulin. W ludzkiej surowicy zostały wykryte wersje alternatywnych splotów CD31, zawierające
formę wyraźnie pozbawioną domeny transbłonowej, ale z końcowym łańcuchem cytoplazmatycznym (6). CD31
wykazuje wiązanie zarówno w sposób homofilowy jak i heterofilowy. Ligandy heterofilowe składają się z
glikozoaminoglikanów siarczanu heparyny, heparyny i integryny avb3. CD31 odgrywa rolę we wzajemnym
przyleganiu sąsiadujących komórek śródbłonka oraz leukocytów i komórek śródbłonka. Wiązanie CD31 do
powierzchni leukocytów prowadzi do zwiększenia aktywności funkcji integryn leukocytu. Diapedeza leukocytów w
śródbłonku polega na homofilowych interakcjach CD31. Dodatkowo interakcja heterofilowa CD31 odrywa oddzielną
rolę w migracji monocytów w podśródbłonkowej warstwie podstawnej (6).
CD31 podlega ekspresji na wszystkich ciągłych śródbłonkach, w tym tętnic, tętniczek, żyłek, żył i naczyń
włosowatych innych niż zatoki naczyniowej. Nie podlega ekspresji na nieciągłym śródbłonku np. miazgi czerwonej
śledziony. Dodatkowo CD31 podlega rozmytej ekspresji na powierzchniach megakariocytów, płytek krwi, komórkach
szpiku, naturalnych komórkach cytotoksycznych i niektórych podgrupach komórek T oraz prekursorów komórek B (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Materiały wymagane, ale niedostarczone z
zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości,
7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do użycia monoklonalne przeciwciała mysie są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór azydku sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: JC70A (1). Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Preparat z błon komórkowych komórek śledziony pacjenta chorego na białaczkę włochatokomórkową (1).
Swoistość
Przeciwciała Anti-Human CD31, Endothelial Cell, klon JC70A, zostały zdefiniowane jako anty-CD31 podczas
konferencji Fifth International Workshop and Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens
(5. międzynarodowe warsztaty i konferencja na temat antygenów różnicujących ludzkie leukocyty) (7). Badania
rozpoznanego epitpu wykazały, że mieści się on w zakresie domeny pozakomórkowej 1 (6).
W testach Western Blot preparatów z błon komórkowych z komórek śledziony z dużą zawartością antygenu lub z
prawidłowych płytek, przeciwciało znakuje prążki odpowiednio 100 kDa i 130 kDa, które następnie odpowiadają
klasycznemu CD31. Mniejszy prążek 100 kDa zaobserwowano z preparatem śledzionowym może być wynikiem
proteolitycznego rozkładu lub różnic w glikozylacji (1).
Środki ostrożności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(117312-001)
IR610/PL/LPF/07.08.07 s. 1/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Z tego
względu jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu. Optymalne wyniki uzyskuje się w wyniku
wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x), (Link) (nr
kat. K8002/8004).
Odparafinowane skrawki: Zaleca się wstępną obróbkę utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych przy użyciu Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja
użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki tkanek zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target
Retrieval Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8002/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować następujące
parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu: 97°C przez 20
(±1) minut; ochłodzić do 65°C. Przepłukać skrawki rozcieńczonym roztworem o temperaturze pokojowej EnVision
FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8002).
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe należy
poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). W oprogramowaniu
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące
wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer Link.
Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym aparacie Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez patologów z
różnym nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako
w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić się, że działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy użyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat.
K8008). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować okrężnicę i migdałki,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse, (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja odczynu
W komórkach znakowanych przez przeciwciała odczyn występuje przede wszystkim w błonie komórkowej; ponadto
występuje słabszy odczyn cytoplazmatyczny.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: Przeciwciała znakują komórki śródbłonka w różnych tkankach, w tym śródbłonek kapilar
kłębuszków nerkowych i śródbłonek naczyń odżywczych. Ponadto przeciwciała znakują megakariocyty oraz
sporadycznie komórki plazmatyczne w szpiku kostnym (1). W okrężnicy komórki śródbłonka dużych naczyń
wykazują odczyn umiarkowany do silnego, natomiast komórki B strefie płaszcza migdałków wykazują odczyn słaby
do umiarkowanego.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała znakują komórki śródbłonka rozmaitych łagodnych i złośliwych zmian
naczyniowych. W (10/10) (1) i 6/7 (2) przypadków śródbłoniaków krwionośnych nabłonkowatych przeciwciała
znakowały złośliwe komórki śródbłonka naczyń. Ponadto przeciwciała znakowały 17/17 (2) i 3/3 (1) naczyniaki, 3/3
naczyniaki nabłonkowe, 1/1 śródbłoniak naczyń włosowatych (2), 3/3 naczyniakowłókniaki, 2/2 naczyniaki skóry z
rogowaceniem, 1/1 naczyniak pericytarny, 1/1 przyzwojak niechromochłonny, 3/3 śluzaki przedsionkowe i 2/2
wodniaki torbielowate (1). Ponadto przeciwciała znakowały komórki śródbłonka w tkankach nowotworowych z
angiogenezą (3-5). W naczyniakach chłonnych obserwowano wyniki rozbieżne: donoszono o znakowaniu przez
przeciwciało 8/8 (2) i 0/4 (1) przypadków. Podobna rozbieżność występowała w przypadku kłębczaków: przeciwciała
znakowały 2/2 (1) i 0/7 (2) przypadków. Nie zaobserwowano znakowania w jednym przypadku torbieli nabłonkowatej
limfatycznej i odmy tkankowej (1); ujemne wyniki otrzymano również w 30 przypadkach łagodnych i 4 złośliwych
nowotworów osłonek nerwowych, 11 włókniaków skóry, 28 guzowatych włókniakomięsaków skóry, 6 mięśniaków
gładkich, 3 mięśniakomięsaków gładkich, 3 nowotworów wielkokomórkowych z fibroblastów (2), 52 mięsaków
prążkowanokomórkowych, 16 guzów drobnokomórkowych z komórek okrągłych, 11 nerwiaków niedojrzałych, 23
guzów Wilmsa, 20 glejaków siatkówki, 13 nerwiaków esthesioneuroblastoma i 7 złośliwych chłoniaków
drobnokomórkowych nieszczelinowatych. Ponadto komórki wrzecionowate w 17 przypadkach mięsaków Kaposiego
były konsekwentnie niereaktywne (8).
(117312-001)
IR610/PL/LPF/07.08.07 s. 2/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1.
Parums DV, Cordell JL, Micklem K, Heryet AR, Gatter KC, Mason DY. JC70: a new monoclonal antibody that
detects vascular endothelium associated antigen on routinely processed tissue sections. J Clin Pathol
1990;43:752-7.
2.
DeYoung BR, Swanson PE, Argenyi ZB, Ritter JH, Fitsgibbon JF, Stahl DJ, et al. CD31 immunoreactivity in
mesenchymal neoplasms of the skin and subcutis: Report of 145 cases and review of putative immunohistologic
markers of endothelial differentiation. J Cutan Pathol 1995;22:215-22.
3.
Engel CJ, Bennett ST, Chambers AF, Doig GS, Kerkvliet N, O’Malley FP. Tumor angiogenesis predicts
recurrence in invasive colorectal cancer when controlled for Dukes staging. Am J Surg Pathol 1996;20:1260-5.
4.
Fox SB, Leek RD, Bliss J, Mansi JL, Gusterson B, Gatter KC, et al. Association of tumor angiogenesis with
bone marrow micrometastases in breast cancer patients. J Natl Cancer Inst 1997;89:1044-9.
5.
Giatromanolaki A, Koukourakis M, O’Byrne K, Fox S, Whitehouse R, Talbot DC, et al. Prognostic value of
angiogenesis in operable non-small cell lung cancer. J Pathol 1996;179:80-8.
6.
Muller WA. AS9. CD31 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of
the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland
Publishing Inc.; 1997. p. 362-4.
7.
Fornelli CS, George F, Sampol J, van Agthoven AJ. E6.6. Biochemical analysis of endothelial antigens
recognized by workshop mAb. In: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C,
et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th International
Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press;
1995. p. 1791-5.
8.
Nicholson SA, McDermott MB, DeYoung BR, Swanson PE. CD31 immunoreactivity in small round cell tumors.
Appl Immunohistochem Mol Morphol 2000;8:19-24.
Objaśnienie symboli
(117312-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
IR610/PL/LPF/07.08.07 s. 3/3
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17