Monoclonal Mouse Anti-Human CD19 Clone LE-CD19 Nr kat. M7296 Przeznaczenie Do stosowania w diagnostyce in vitro. Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD19, Clone LE-CD19, są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii. Przeciwciała te znakują komórki B w tkankach prawidłowych i nowotworowych. Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego patologa z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych. Streszczenie i informacje ogólne CD19 to glikoproteina transbłonowa o masie cząsteczkowej 120 kDa (Mr = 95 000) (1). CD19 należy do nadrodziny immunoglobulin z dwiema domenami pozakomórkowymi typu C2 (2). Cząsteczki tego białka są niezbędne do transdukcji sygnałów regulujących rozwój, aktywację i różnicowanie limfocytów B (1). Ekspresję CD19, poza komórkami dendrytycznymi grudek chłonnych, wykazują wyłącznie prawidłowe i nowotworowe komórki B. Białko to nie występuje natomiast w komórkach T, monocytach i granulocytach (2). Białko CD19 pojawia się na wczesnym etapie dojrzewania komórek B, prawdopodobnie w późnej fazie prekursorowej, mniej więcej na etapie zmiany konfiguracji ciężkich łańcuchów Ig. Jego ekspresja utrzymuje się następnie we wszystkich fazach dojrzewania komórek B i zanika po terminalnym zróżnicowaniu do komórek plazmatycznych (2). Immunologiczne metody detekcji ekspresji białka CD19 są przydatne ze względu na fakt, że w białaczkach i chłoniakach z komórek B rzadko dochodzi do utraty epitopu (3). Opisano przypadki ekspresji białka CD19 w niektórych komórkach ostrych białaczek mielocytarnych (2). Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody. Dostarczany odczynnik Monoklonalne przeciwciała mysie dostarczane w postaci płynnej jako nadsącz hodowli komórkowej (zawierający płodową surowicę bydlęcą), dializowany wobec roztworu Tris-HCl o stężeniu 0,05 mol/L, pH 7,2 i azydek sodu o stężeniu 0,015 mol/L. Klon: LE-CD19. Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie mysich IgG mg/L: patrz etykieta na fiolce. Immunogen Peptyd syntetyczny składający się z końca C białka CD19 sprzężonego z KLH (hemocyjaniną z Megathura crenulata). Swoistość W testach Western blot lizatów z komórek Raji (chłoniak Burkitta) i komórek Jurkat (T-ALL) w środowisku utleniającym przeciwciała znakowały w komórkach Raji prążek masy 95 kDa, odpowiadającej masie białka CD19, natomiast w przypadku komórek Jurkat nie stwierdzono prążka. W badaniach immunohistochemicznych na skrawkach tkanek utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie przeciwciało nie wykazywało reaktywności krzyżowej z białkiem będącym odpowiednikiem CD19 u krów, koni, myszy, szczurów i świń. Środki ostrożności 1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych Użytkowników. 2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika używać dużych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej. 3. Podobnie jak w przypadku każdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, należy stosować odpowiednie procedury postępowania. 4. Należy stosować właściwe wyposażenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami. 5. Niewykorzystany odczynnik należy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi. Przechowywanie Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na opakowaniu. Jeżeli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane na ulotce dołączanej do opakowania, Użytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako. (114370-002) Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 M7296/PL/CE/24.05.06 p. 1/2 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17 Przygotowanie próbek oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Skrawki parafinowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie. Wymagane jest poddanie odparafinowanych skrawków tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne rezultaty uzyskuje się po wstępnej obróbce przy użyciu odczynników Dako Target Retrieval Solution, pH 9 (nr. kat. S2368/S2367) i Dako Target Retrieval Solution, High pH (nr. kat. S3308/S3307). Odmaskowanie HIER: 15 minut w temperaturze wrzenia. Przed zanurzeniem preparatów należy ogrzać roztwór do odmaskowania antygenu. Po obróbce cieplnej należy pozostawić naczynie z buforem i preparatami na 20 minut, aż ostygnie do temperatury pokojowej. Po zakończeniu procedury HIER delikatnie przepłukać skrawki roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W trakcie przygotowywania i procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003). Skrawki mrożone i rozmazy komórkowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków mrożonych utrwalanych acetonem. Wykonanie odczynu oraz materiały wymagane, ale niedostarczane Rozcieńczenie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human CD19, nr kat. M7296, mogą być używane w zakresie rozcieńczeń od 1:50 do 1:100 na poddanych wstępnej obróbce utrwalanych w formalinie skrawkach zatopionych w parafinie, przy 30-minutowej inkubacji w temperaturze pokojowej. Zaleca się rozcieńczenie przeciwciał odczynnikiem Dako Antibody Diluent (nr kat. S0809). Podane informacje mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Negative Control, Mouse IgG1 (nr kat. X0931) rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile nie potwierdzono stabilności rozcieńczonych przeciwciał i kontroli ujemnej w rzeczywistej procedurze wykonania odczynu, zaleca się rozcieńczenie tych odczynników bezpośrednio przed użyciem. Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. Wizualizacja: zaleca się stosowanie odczynników Dako EnVision™+ System/HRP, Dual Link Rabbit/Mouse (nr kat. K4061), Dako EnVision™+ System/HRP, Rabbit/Mouse (nr kat. K4065), Dako Real™ EnVision™ Detection Kit, Peroxidase/DAB+, Rabbit/Mouse (nr kat. K5007), Dako EnVision™+ System/HRP, Mouse (nr. kat. K4004/K4005). Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z systemem do wizualizacji. Automatyzacja: Przeciwciała dobrze nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer. Interpretacja odczynu Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują ziarnisty wzór odczynu błonowego. Charakterystyka wydajnościowa Tkanki prawidłowe: Przeciwciała dają odczyn w komórkach B tkanek limfoidalnych, takich jak migdałki i tkanki limfoidalne związane z jelitami, jak również w prawidłowych i reaktywnych komórkach B innych badanych tkanek, w tym okrężnicy, nerek, trzustki, gruczołu krokowego i żołądka. Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciała dawały odczyn w nowotworowych komórkach B w 30 przebadanych preparatach chłoniaków z komórek B. Piśmiennictwo 1. Sato S, Tedder TF. CD Guide. CD19. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 1123-4. 2. Sato S, Tedder TF. BC3. CD19 workshop panel report In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 133-5. 3. Leong AS-Y, Copper K, Leong FJW-M. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford University Press; 1999. p. 67-8. Objaśnienie symboli Numer katalogowy Temperatura przechowywania Wyrób medyczny do diagnostyki in vitro Numer serii Sprawdzić w instukcji stosowania Zużyć przed (114370-002) Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 Producent M7296/PL/CE/24.05.06 p. 2/2 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17