Monoclonal Mouse Anti-Human CD235a, Glycophorin A

Monoclonal Mouse Anti-Human CD235a, Glycophorin A Clone JC159
Nr kat. F 0870 FITC-Conjugated
Nr kat. R 7078 RPE-Conjugated
Przeznaczenie
Do diagnostyki in vitro.
F 0870 oraz R 7078 są przeznaczone do użycia w cytometrii przepływowej. Anti-CD235a, JC159 jest
użytecznym narzędziem w cytometrycznym rozdziale krwinek czerwonych z komórek limfoidalnych (1),
zasadniczo CD235a jest używane do identyfikacji erytroleukemii (2). Interpretacja musi być wykonana w
odniesieniu do historii choroby i innych testów diagnostycznych przez wykwalifikowanego patologa.
Synonim antygenu
Sialoglykoproteina, GPA (2, 3).
Wstęp
Glikoforyna A, CD235a jest sialoglikoproteiną znajdującą się w błonie komórkowej krwinek przenoszącą
antygeny M i N. Gen kodujący jest zlokalizowany na chromosomie 4q28-q31 i dzieli homologiczne sekwencje z
genami kodującymi glikoforynę B i glykoforynę E (3). Glikoforyna A jest wydzielana przez erytrocyty poczynając
od morfologicznie rozpoznawalnych prekursorów tuż po fazie CFU-E aż do dojrzałego erytrocyta, ilość
wszystkich komórek jest stała i nie ulega zmianie podczas dalszych faz dojrzewania (1) W większości
przypadków erytroleukemii stwierdzono ekspresję glikoforyny A w patologicznych erytrocytach podczas gdy w
przypadkach ostrej białaczki szpikowej (AML) oraz ostrej białaczki limfoblastycznej ekspresja glikoforyny
występowała bardzo rzadko (2,4).
Odczynnik dostarczony
Przeciwciała Anti-CD235a sprzężone z fluorochromami F 0870 oraz R 7078, są produkowane z oczyszczonych
monoklonalnych mysich przeciwciał. Przeciwciała te dostarczane są w postaci ciekłej w buforze zawierającym
1% albuminy surowicy wołowej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3, pH 7.2. każde opakowanie wystarcza na 100
testów (10 L konjugatu na 106 erytrocytów z normalnej krwi obwodowej człowieka).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie konjugatu mg/L: Patrz etykieta na opakowaniu.
Przeciwciał
o
Nr kat.
Fluorochrom
Kontrola
Negatywna
Nr kat.
F 0870
FITC (Izomer 1 Izocjanianu Fluoresceiny )
X 0927
R 7078
RPE (R-Fytoerytryna )
X 0928
Immunogen
Ekstrakt błon komórkowych komórek białaczki kosmatokomórkowej wyizolowanych z ludzkiej śledziony (2).
Swoistość
Anty-CD235a, JC 159 silnie znakuje normalne komórki erytroidalne
począwszy od erytroblastów aż do dojrzałych krwinek czerwonych (2).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez osoby przygotowane zawodowo.
we wszystkich stadiach różnicowania
2. Produkt zawiera azydek sodowy (NaN3), odczynnik chemiczny silnie toksyczny w czystej postaci. W stężeniu
obecnym w produkcie, chociaż nie klasyfikowanym jako niebezpieczne, azydek sodowy może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, tworząc silnie wybuchowe pochodne lub azydki tych
metali. Przy usuwaniu odpadów przepłukać spływ dużą ilością wody, aby uniknąć tworzenia się azydków.
3. Jak w przypadku każdego materiału biologicznego należy stosować odpowiednie procedury.
Przechowywanie
Przechowywać bez dostępu światła w temp. 2-8oC. Nie używać po upływie daty ważności wskazanej na
opakowaniu. Jeśli produkt był przechowywany w warunkach innych niż wskazane, użytkownik musi sprawdzić
jakość produktu. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu, dlatego równocześnie z
próbkami badanymi powinno się oznaczać wiarygodną kontrolę. Jeżeli uzyskuje się nieoczekiwane wyniki bez
zmiany procedur laboratoryjnych i można podejrzewać, że dzieje się to z winy przeciwciała, należy
skontaktować się z serwisem technicznym firmy Dako.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do próbówki z EDTA jako antykoagulantem.
2.
Wyodrębnić erytrocyty przez wirowanie.
3.
Zmieszać 100 l zawiesiny komórkowej z 10 l fluorochromowego-koniugatu Anti-CD235a.
4.
Użyć niereaktywnego monoklonalnego przeciwciała o identycznym izotypie skoniugowanego z tym samym
fluorochromem jako kontroli negatywnej (patrz tabela).
5.
Inkubować w ciemności w temperaturze 4oC przez 30 minut.
6.
Przemyć dwukrotnie PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie wykonać zawieszenie komórek z każdej z
próbek w medium odpowiednim dla cytometrii przepływowej np. 0.3ml 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w
0.01 mol/L PBS, pH-7.4.
7.
Wykonać analizę na cytometrze przepływowym.
Zaleca się wykonanie kontroli negatywnej i pozytywnej równolegle z przygotowaniem badanych próbek. Należy
także zwrócić uwagę na fakt że, próbki zawierające fluorochromy są nieodporne na światło w czasie całej
procedury przygotowania i analizy.
(108362-002)
F 0870/R 7078/PL/01.11.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Literatura
1.
Loken MR, Shah VO, Dattilio KL, Civin CI. Flow cytometric analysis of human bone marrow: I. Normal
erythroid development. Blood 1987;69:255-63.
2.
Erber WN, McLachlan J, Cordell JL, Turley H, Reid M, Mason DY. A new monoclonal antibody (JC159) that
detects glycophorin A for the diagnosis of erythroleukaemia. Hematol Rev 1991;5:113-20.
3.
van der Schoot CE, Baardman R, Lighthart P, de Jong I, von dem Borne AEK, de Haas M. RC4. CD235a
and CD235b – Glycophorin A and Glycophorin B. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin
C, Clark E, et al., editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th
International Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford
University Press Inc.; 2002. p. 577-9.
4.
Greaves MF, Sieff C, Edwards PAW. Monoclonal antiglycophorin as a probe for erythroleukemias. Blood
1983;61:645-51.
Objaśnienia symboli
(108362-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed silnym światłem
(sprawdź w zasadach
przechowywania)
Producent
Sprawdź w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 0870/R 7078/PL/01.11.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17