Polyclonal Rabbit Anti-S100 Nr kat. Z0311

Polyclonal Rabbit
Anti-S100
Nr kat. Z0311
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała Polyclonal Rabbit Anti-S100 są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii. Przeciwciała te znakują komórki wykazujące ekspresję białek S100 i są
uŜytecznym narzędziem do klasyfikacji nowotworów S100-dodatnich. Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w klasyfikacji róŜnicowej. Interpretacja kliniczna wystąpienia
barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych. Przeciwciała te są przeznaczone do stosowania po pierwotnym
rozpoznaniu w konwencjonalnym badaniu histopatologicznym z zastosowaniem barwników do nieimmunologicznych barwień histochemicznych.
Streszczenie i informacje ogólne
S100 naleŜy do rodziny wysoce złoŜonych wielogenowych białek wiąŜących wapń (Ca2+), o niskich masach cząsteczkowych (Mr między 9000 a 13 000). Rodzina składa się z
19 przedstawicieli, którzy podlegają róŜnej ekspresji w wielu typach komórek. Dlatego S100B (wcześniej S100β) występuje najczęściej w komórkach glejowych ośrodkowego i
obwodowego układu nerwowego, w melanocytach, chondrocytach i adipocytach, podczas gdy S100A1 (wcześniej S100A/S100α) występuje najczęściej w kardiomiocytach,
wolnokurczliwych komórkach mięśni szkieletowych, nabłonku komórek ślinowych i komórkach nerkowych. Ponadto białko S100B występuje w komórkach guza i populacji
neuronów, natomiast białko S100A1 wykryto takŜe w neuronach hipokampa. Białko S100A6 podlega ekspresji w fibroblastach oraz komórkach mięśni gładkich i serca (1).
Przedstawiciele rodziny S100 brali udział w zaleŜnej od jonów Ca
transformacji nowotworowej) i róŜnicowaniu (2).
2+
regulacji róŜnych wewnątrzkomórkowych procesów, np. fosforylacji białka, proliferacji komórek (w tym
Dostarczony odczynnik
Frakcja oczyszczonej immunoglobuliny z króliczej surowicy odpornościowej, dostarczona w postaci ciekłej. W 0,1 mol/L NaCl, 15 mmol/L NaN3, pH 7,2.
StęŜenie białka w g/L: Patrz etykieta na fiolce.
RóŜnica w mianie przeciwciał pomiędzy poszczególnymi partiami wynosi mniej niŜ 10%, co zmierzono z zastosowaniem techniki pojedynczej immunodyfuzji radialnej. Taką
niewielką róŜnicę otrzymuje się poprzez dostosowanie miana przeciwciał kaŜdej partii do miana preparatu referencyjnego przechowywanego w temperaturze -80 C.
Immunogen
Białko S100 wyizolowane z mózgu bydlęcego.
Swoistość
Przeciwciała poddano absorpcji w fazie stałej z białkami osocza ludzkiego i białkami surowicy bydlęcej.
W badaniach metodą immunoelektroforezy krzyŜowej przy uŜyciu 50 µL przeciwciał na cm 2 Ŝelu nie zaobserwowano reakcji z 2 µL osocza ludzkiego i 2 µL surowicy bydlęcej.
W przypadku ekstraktów z mózgu ludzkiego i bydlęcego przeciwciała wykazują jeden odrębny podwójny pik (S100). Barwienie: błękit Coomassie Brilliant Blue.
W testach pośrednich ELISA nie obserwuje się reakcji przeciwciał z ludzkim osoczem ani surowicą bydlęcą.
W badaniach metodą Western blot oczyszczonych rekombinowanych ludzkich białek S100 przeciwciała silnie znakują białko S100B, słabo — białko S100A1 i bardzo słabo —
białko S100A6. Nie zaobserwowano reakcji w przypadku pozostałych testowanych białek: S100, S100A2, S100A3 ani S100A4 (3).
Jak przedstawiono w badaniach immunohistochemicznych na tkankach utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie, przeciwciała wykazują reaktywność krzyŜową z
białkowym odpowiednikiem S100 u kotów, koni, myszy, szczurów i świń. Dodatkowo przeciwciała silnie reagują z ludzkim i bydlęcym białkiem S100.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Azydek sodu, zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest
sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków metali.
Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydków metali w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór usuwać zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie naleŜy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki są przechowywane w warunkach
innych niŜ podane, uŜytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie ma wyraźnych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać kontrole pozytywne i negatywne. W przypadku uzyskania nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna
wyjaśnić róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, i gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie. Zaleca się cieplne odmaskowanie
antygenu w roztworze Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700, lub z zastosowaniem buforu cytrynianowego 10 mmol/L, pH 6,0. W trakcie przygotowywania oraz
podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny wyschnąć.
Skrawki mroŜakowe i preparaty komórkowe: w przypadku skrawków mroŜakowych wysoce rozpuszczalne cząstki białka S100 wykazują tendencje do nieprawidłowej
dystrybucji lub wypłukiwania z tkanki.
Procedura barwienia
Rozcieńczenie: przeciwciała Polyclonal Rabbit Anti-S100, nr kat. Z0311, mogą być stosowane w rozcieńczeniu 1:400 na skrawkach utrwalonych w formalinie i zatopionych w
parafinie z zastosowaniem trwającego 20 minut cieplnego odmaskowania antygenu w roztworze Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S1700, i inkubacji z przeciwciałem
pierwotnym przez 30 minut w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania i powinny być
określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Rabbit Immunoglobulin Fraction (Solid-Phase Absorbed), nr kat. X0936,
rozcieńczony do takiego samego stęŜenia białek, co przeciwciało pierwotne. Dopóki nie została ustalona stabilność produktu w danym systemie, zaleca się jego
rozcieńczenie bezpośrednio przed uŜyciem lub rozcieńczenie w rozcieńczalniku Dako Antibody Diluent, nr kat. S0809.
Wizualizacja: zaleca się stosowanie zestawu Dako EnVision™+/HRP, nr kat. K4008 i K4010.
Automatyzacja: przeciwciała nadają się do wykonywania odczynów immunohistochemicznych w systemach zautomatyzowanych, takich jak Dako Autostainer.
Charakterystyka działania
Komórki znakowane przeciwciałem wykazują odczyn ograniczony do cytoplazmy.
Tkanki prawidłowe: znakowanie przeciwciałami stwierdzono w przypadku niektórych komórek Langerhansa i melanocytów skóry, komórek międzypalczastych retikulum
węzłów chłonnych, komórek retikularnych nabłonka rdzenia grasicy, chondrocytów tkanki chrzęstnej, adypocytów z niektórych biopsji, komórek mięśniowo-nabłonkowych
gruczołów ślinowych i sutka, komórek gwiaździstych grudek przysadki, komórek Schwanna oraz komórek glejowych tkanki nerwowej. Słaby odczyn zaobserwowano w
(107665-005)
Z0311/PL/SSM/2014.03 s. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Dania | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17
przypadku komórek nabłonka gruczołów sutkowych i potowych. Nie stwierdzono reakcji z przeciwciałami w przypadku prawidłowych hepatocytów, nabłonka przewodów
Ŝółciowych, nabłonka pęcherzyka Ŝółciowego, przełyku, Ŝołądka, nabłonka jelita cienkiego i grubego, nabłonka nerkowego ani w komórkach dróg moczowych i
śródbłonka (4).
Tkanki nieprawidłowe: przeciwciała znakowały 31/31 przypadków (100%) czerniaka złośliwego skóry, 23/24 (96%) przypadki czerniaka przerzutowego, w tym 10
bezbarwnikowych, 6/6 desmoplastycznych i 1/1 przypadek śluzowatego czerniaka złośliwego. We wszystkich 30 przypadkach zmian łagodnych i 15 przypadkach znamion
dysplastycznych zaobserwowano powszechnie jednorodne znakowanie przeciwciałami (5). W innym badaniu pierwotnych czerniaków złośliwych (6) reakcję z przeciwciałami
stwierdzono w 67/67 (100%) przypadków, w tym w 5/5 przypadków guzów wrzecionowatokomórkowych i desmoplastycznych. W 27 przypadkach histocytozy komórek
Langerhansa przeciwciała znakowały 88,5% przypadków, uwzględniając choroby zlokalizowane oraz rozsiane (7). Z 30 zbadanych przypadków chrzęstniaków zarodkowych
wszystkie wykazały silną reakcję chondroblastów z przeciwciałem (8). W przypadku typowych nerwiaków osłonkowych ze zmianami łagodnymi odczyn zaobserwowano w
12/12 przypadków oraz 2/4 przypadki złośliwych nerwiaków osłonkowych. Natomiast w 6/6 przypadków włókniakonerwiaków wykazano słabą ekspresję białka S100 z
wyjątkiem niektórych wyizolowanych komórek oraz niektórych wydłuŜonych wypustek komórkowych, które wykazały odczyn wyraźnie dodatni (1). NaleŜy zwrócić uwagę, Ŝe
ekspresję białka S100 wykazano w 15 na 133 przypadki pierwotnych niebarwnikowych nowotworów skóry, tj. w 7/16 przypadków raków ekrynowych, 2/8 przypadków
przerzutowych nowotworów trzewnych, 2/2 przypadki złośliwych nerwiaków osłonkowych i 4/5 przypadków mięśniakomięsaków gładkokomórkowych (6). Przeciwciała
znakowały 24/25 (84%) przypadków gruczolakoraków jajników, 12/15 (80%) ślinianek, 28/36 (78%) endometrium, 15/23 (65%) nerek, 12/20 (60%) sutka, 7/28 (25%)
okręŜnicy/odbytu, 2/10 (20%) Ŝołądka i 2/27 (7%) płuc. Nie odnotowano wystąpienia odczynu w przypadku gruczolakoraków przełyku, pęcherzyka Ŝółciowego, trzustki ani
stercza. Większość pierwotnych nowotworów z ekspresją białka S100 wykazywało takŜe dodatni odczyn w ogniskach przerzutowych (9). Przeciwciała znakowały 7/60 (12%)
przypadków mięśniakomięsaków prąŜkowanokomórkowych. Nowotwory z ekspresją białka S100 wykazywały równieŜ odczyn z wimentyną i desminą (10).
Piśmiennictwo
1.
Gould VE, Moll R, Moll I, Lee I, Schwechheimer K, Franke WW. The intermediate filament complement of the spectrum of nerve sheath neoplasms. Lab Invest
1986;55:463-74.
2.
Donato R. Functional roles of S100 proteins, calcium-binding proteins of the EF-hand type (review). Biochim Biophys Acta 1999;1450:191-231.
3.
Ilg EC, Schäfer BW, Heizmann CW. Expression pattern of S100 calcium-binding proteins in human tumors. Int J Cancer 1996;68:325-32.
4.
Vanstapel M-J, Gatter KC, de Wolf-Peeters C, Mason DY, Desmet VD. New sites of human S-100 immunoreactivity detected with monoclonal antibodies. Am J Clin
Pathol 1986;85:160-8.
5.
Orchard GE. Comparison of immunohistochemical labeling of melanocyte differentiation antibodies melan-A, tyrosinase and HMB 45 with NKIC3 and S100 protein in the
evaluation of benign naevi and malignant melanoma. Histochem J 2000;32:475-81.
6.
Wick MR, Swanson PE, Rocamora A. Recognition of malignant melanoma by monoclonal antibody HMB-45. An immunohistochemical study of 200 paraffin-embedded
cutaneous tumors. J Cutan Pathol 1988;15:201-7.
7.
Ye F, Huang S-W, Dong H-J. Histiocytosis X. S-100 protein, peanut agglutinin, and transmission electron microscopy study. Am J Clin Pathol 1990;94:627-31.
8.
Edel G, Ueda Y, Nakanishi J, Brinker KH, Roessner A, Blasius S, et al. Chondroblastoma in bone. A clinical, radiological, light and immunohistochemical study. Virchows
Arch A Pathol Anat 1992;421:355-66.
9.
Herrera GA, Turbat-Herrera EA, Lott RL. S-100 protein expression by primary and metastatic adenocarcinomas. Am J Clin Pathol 1988;89:168-76.
10. Coindre J-M, de Mascarel A, Trojani M, de Mascarel I, Pages A. Immunohistochemical study of rhabdo-myosarcoma. Unexpected staining with S100 protein and
cytokeratin. J Pathol 1988;155:127-32.
Objaśnienia symboli
Numer katalogowy
Ograniczenie temperatury
Wyrób medyczny do diagnostyki
in vitro
Numer partii
Sprawdzić w instrukcji obsługi
ZuŜyć przed
(107665-005)
Producent
Z0311/PL/SSM/2014.03 s. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Dania | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | Nr CVR 33 21 13 17