ce-ivd spec template

Monoclonal Mouse
Anti-Human
Mast Cell Tryptase
Clone AA1
Nr kat. M 7052
Wydanie 18.12.02
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Mast Cell Tryptase, Clone AA1, są przeznaczone do stosowania w badaniach immunocytochemicznych. Przeciwciało
wybarwia ludzkie komórki tuczne i jest przydatnym narzędziem do rozpoznawania silnie atypowych lub niedojrzałych komórek tucznych (MC) w białaczce z komórek
tucznych oraz do wykrywania niewielkich, nawet najmniejszych ogniskowych nacieków w procedurach klasyfikacji histopatologicznej u pacjentów z potwierdzoną
mastocytozą skórną (1). Wyniki panelu przeciwciał są pomocne w diagnostyce różnicowej. Interpretacja wyniku musi być przeprowadzona przez wykwalifikowanego
patologa, z uwzględnieniem kontekstu klinicznego oraz wyników innych metod diagnostycznych.
Wprowadzenie
Tryptazy ludzkich komórek tucznych (EC 3.4.21.59) obejmują rodzinę zbliżonych do trypsyny, obojętnych proteaz serynowych, wykazujących ekspresję głównie
w komórkach tucznych (2). W swojej aktywnej enzymatycznie postaci, tryptaza komórek tucznych występuje w niekowaletnie związanym tetramerze o masie 132 kDa
(2, 3). Tryptaza komórek tucznych ma zdolność degradacji wazoaktywnego peptydu jelitowego oraz aktywacji prekalikreiny, jak również wytwarzania kinin,
stanowiących ważne mediatory bronchokonstrykcji i nadwrażliwości dróg oddechowych, będących ważnymi elementami w chorobach alergicznych dróg oddechowych
(2). Tryptaza komórek tucznych wywiera również wpływ mitogenny na komórki mięśni gładkich ludzkich dróg oddechowych oraz ludzkie fibroblasty płuc i skóry.
Hiperplazja obydwu mięśni gładkich oraz zmiany włókniste mogą prowadzić do pogrubienia ściany dróg oddechowych i trwałego zmniejszenia ich średnicy (2).
Komórki tuczne są aktywowane wieloma bodźcami, w tym poprzez antygeny, nadtlenki, białka dopełniacza, neuropeptydy i lipoproteiny, prowadzącej do ich aktywacji i
degranulacji. Degranulacja komórek tucznych i tym samym uwolnienie tryptazy komórek tucznych, podobnie jak histaminy leukotrienów i cytokin do otaczających
tkanek, stanowi punkt zwrotny odpowiedzi zapalnej i wydaje się grać ważną rolę w obronie gospodarza przed patogenami (4). Komórki tuczne grają istotną rolę w
patogenezie tak odmiennych chorób, jak miażdżyca tętnic, astma, zapalenie stawów, włóknienie dróg żółciowych, nowotwory i zwłóknienie płuc (4, 5).
Identyfikacja komórek tucznych metodą wybarwienia tkanek przeciwciałami swoistymi dla tryptazy ludzkich komórek tucznych, okazała się przydatną metodą
w identyfikacji ogniskowych i rozsianych nacieków z komórek tucznych (MC) oraz pierwotnych chorób MC i mastocytozy. Dowiedzenie obecności tryptazy komórek
tucznych ma podstawowe znaczenie w identyfikacji wysoce atypowych lub małoziarnistych lub nawet niemetachromatycznych komórek tucznych, szczególnie
w białaczce z komórek tucznych oraz do detekcji niewielkich, a nawet najmniejszych nacieków z tych komórek (1).
Odczynnik dostarczony
Monoklonalne mysie przeciwciała w postaci ciekłej jako nadsącz hodowli tkankowej w buforze Tris/HCl o stężeniu 0,05 mol/L, o pH 7,2, zawierajcym NaN3 w stężeniu
15 mmol/L.
Klon: AA1 (3). Izotyp: IgG1, kappa.
Stężenie mysich IgG: patrz: informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen
Tryptaza komórek tucznych izolowana z ludzkich płuc (3).
Swoistość
W teście Western blot wyciągu z ludzkich płuc bogatego w tryptazę, w warunkach redukujących, przeciwciało barwi prążek około 32,5 kDa odpowiadający tryptazie
ludzkich komórek tucznych (3).
W pośredniej metodzie ELISA, przeciwciało reaguje z oczyszczoną tryptazą z ludzkich komórek tucznych (3).
Związanie antygenu przez tryptazę komórek tucznych nie wpływa na aktywność enzymu (3).
Potraktowanie tryptazy komórek tucznych nadjodanem nie wywiera wpływu na barwienie przeciwciałem co wskazuje, że epitopy węglowodanowe nie biorą udziału w
rozpoznawaniu przeciwciała. Na rozpoznawanie przeciwciała nie ma również wpływu heparyna (3).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek (NaN3) w czystej postaci. Stężenie NaN3 występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne.
Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Po usunięciu
spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, należy stosować właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 C. Nie należy używać odczynników po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeżeli odczynniki są przechowywane
w warunkach innych niż podane, użytkownik powinien zweryfikować te warunki. Nie ma jednoznacznych oznak niestabilności produktu. Dlatego, równolegle
z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów, należy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego
nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, należy skontaktować się z działem wsparcia technicznego
firmy Dako.
Przygotowanie próbek
Skrawki zatapiane w parafinie: Przeciwciało może służyć do barwienia utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie lub odczynniku Carnoy, jakkolwiek
komórki tuczne lepiej zachowują swoją strukturę przy utrwalaniu w formalinie (6). Wymagane jest poddanie preparatów tkankowych cieplnemu odmaskowaniu
antygenu. W przypadku tkanek utrwalonych w formalinie optymalne wyniki uzyskuje się stosując Dako Target Retrieval Solution, nr kat. S 1700, Dako Target Retrieval
Solution, High pH, nr kat. S 3308, bufor cytrynianowy 10 mmol/L, pH 6,0 lub bufor Tris 10 mmol/L, 1 mmol/L EDTA, pH 9,0. Wstępne potraktowanie preparatów
tkankowych proteinazą K (6) lub trypsyną jest mniej skuteczne. W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunocytochemicznego skrawki nie
powinny wyschnąć.
Skrawki mrożakowe i preparaty tkankowe: Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania skrawków utrwalanych odczynnikiem Carnoy lub acetonem/
metanolem oraz preparatów komórkowych (3).
(121837-002)
M 7052/PL/SUA/18.12.02 str. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
Rozcieńczanie: Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Mast Cell Tryptase, nr kat. M 7052, mogą być używane w zakresie rozcieńczeń 1:100-1:200 do skrawków
tkanek utrwalanych w formalinie i zatopianych w parafinie, po obróbce wstępnej w postaci 20-minutowego cieplnego odmaskowania antygenu w roztworze Dako Target
Retrieval Solution, nr kat. S 1700 i 30-minutowej inkubacji z przeciwciałem pierwotnym w temperaturze pokojowej. Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od
rodzaju materiału i sposobu jego przygotowania, i powinny być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Zalecana kontrola ujemna to odczynnik Dako Mouse IgG1,
na kat. X 0931, rozcieńczony do tego samego stężenia mysich IgG, co przeciwciało pierwotne. O ile przy użyciu procedury wykonania odczynu nie ustalono, że przeciwciało
rozcieńczone i kontrola ujemna są stabilne, zaleca się rozcieńczenie odczynników bezpośrednio przed użyciem lub rozcieńczenie w roztworze Dako Antibody Diluent, nr kat.
S 0809. Równolegle z próbkami pobranymi od pacjentów należy analizować kontrole dodatnie i ujemne.
Wizualizacja: Zaleca się zestaw DAKO LSAB™+/HRP, nr kat. K 0679 i zestawy DAKO EnVision™+/HRP, nr kat. K 4004 i K 4006. W przypadku skrawków
mrożakowych i preparatów komórkowych, jeśli problemem jest odczyn wywoływany przez endogenną peroksydazę, odpowiednim rozwiąz aniem jest
zastosowanie zestawu Dako APAAP, nr kat. K0670. Postępować zgodnie z procedurą dostarczoną z zestawem do wizualizacji.
Ograniczenia specyficzne dla produktu
W przypadku próbek utrwalonych w odczynniku Carnoy, w jednym badaniu stwierdzono nieswoiste barwienie kolagenu (7), lecz nie zostało to później
potwierdzone (6).
Charakterystyka działania
Komórki barwione przez przeciwciało wykazują wysoce swoisty wzór ziarnistego barwienia cytoplazmatycznego, odpowiadający lokalizacji ziarnistości wydzielniczych
w komórkach tucznych (3).
Tkanki normalne: Przeciwciało swoiście wybarwia komórki tuczne (MC) w wielu ludzkich tkankach, w tym płucach, migdałku, okrężnicy, śluzówce żołądka i skórze,
podczas gdy jedynie nieliczne komórki MC udaje się wykryć w przysadce (6). Przeciwciało nie wybarwia bazofili, eozynofili, neutrofili, monocytów ani limfocytów,
i podobnie żadnego wybarwienia nie zaobserwowano w keratynocytach (3).
Tkanki patologiczne: W badaniu obejmującym ponad 150 przypadków różnych chorób MC wykazano, że w szpiku kostnym w większości stanów normalnych i
2
reaktywnych wybarwiono <4 MC/mm komórek MC, podczas gdy w zespołach mielodysplazji barwienie uzyskano w >5 lecz <100 przypadkach. Ponad 100 komórek
MC/mm2 wykryto w nowotworach MC oraz w przypadkach o dużo większej liczbie komórek (maksimum 2655 MC/mm2) (1). W badaniu obejmującym 7 pacjentów
z sezonowym alergicznym zapaleniem spojówek, przeciwciało wykazało średnią gęstość MC w obrębie zrębu spojówki, równą 106/mm 2 w porównaniu do 57,4/mm2 u
8 osób zdrowych. Komórki pozytywne pod względem śródnabłonkowej tryptazy wykryto również u osób alergicznych, podczas gdy u osób zdrowych komórek tych nie
wykryto (7). W obszarze wokół przegrodowych przewodów żółciowych wątroby, liczba komórek MC wybarwionych przeciwciałem w 45 przypadkach marskich wątrób
wyniosła średnio 59,0 MC/mm2; liczba ta była znacząco wyższa niż w przypadku 71 wątrób zdrowych, dla których średnia gęstość komórek wyniosła 39,4 MC/mm2 (5).
Piśmiennictwo
1. Horny H-P, Valent P. Diagnosis of mastocytosis: general histopathological aspects, morphological criteria, and immunohistochemical findings. Leuk Res
2001:25;543-51.
2. Abraham WM. Tryptase: potential role in airway inflammation and remodelling. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2002;282:L193-L196.
3. Walls AF, Bennett AR, McBride HM, Glennie MJ, Holgate ST, Church MK. Production and characterization of monoclonal antibodies specific for human mast cell
tryptase. Clin Exp Allergy 1990;20:581-9.
4. Krishnaswamy G, Kelley J, Johnson D, Youngberg D, Stone W, Huang S-K, et al. The human mast cell: functions in physiology and disease. Front Biosci
2001;6:d1109-27.
5. Koda W, Harada K, Tsuneyama K, Kono N, Sasaki M, Matsui O, et al. Evidence of the participation of peribiliary mast cells in regulation of the peribiliary vascular
plexus along the intrahepatic biliary tree. Lab Invest 2000;80:1007-17.
6. Walls AF, Jones DB, Williams JH, Church MK, Holgate ST. Immunohistochemical identification of mast cells in formaldehyde-fixed tissue using monoclonal
antibodies specific for tryptase. J Pathol 1990:162:119-26.
7. Morgan SJ, Williams JH, Walls AF, Church MK, Holgate ST, McGill JI. Mast cell numbers and staining characteristics in the normal and allergic human conjunctiva.
J Allergy Clin Immunol 1991;87:111-6.
Objaśnienie symboli
(121837-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Zużyć przed
Producent
M 7052/PL/SUA/18.12.02 str. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17