Monoclonal Mouse

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD4
Klon 4B12
Ready-to-Use
(Link)
Nr kat. IR649
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human CD4, klon 4B12, Ready-to-Use (Link) jest przeznaczone do
stosowania w immunohistochemii w aparatach Autostainer Link. Przeciwciało to znakuje tymocyty i pomocnicze
limfocyty T (1) i przydatne jest w identyfikacji chłoniaków anaplastycznych z dużych komórek (2). Przeciwciała
przeciwko CD4 mogą być także przydatne do identyfikacji ziarniaków grzybiastych oraz nieokreślonego chłoniaka
obwodowych komórek T (3–5). Interpretacja kliniczna wystąpienia lub braku barwienia musi być uzupełniona przez
badania morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Podsumowanie
i wyjaśnienie
CD4 to glikoproteina o masie 55 kDa z pięcioma zewnętrznymi domenami typu immunoglobulinowego, domeną
transmembranową i wysoce konserwatywną domeną wewnątrzkomórkową. CD4 działa jako koreceptor w aktywacji
komórek T ograniczonej do klasy II układu zgodności tkankowej i może zwiększać adhezję komórkową (1).
Cząsteczka CD4 działa również jako receptor ludzkiego wirusa upośledzenia odporności na komórkach T i
monocytach/makrofagach (4).
CD4 ulega ekspresji podczas rozwoju komórek T, ale nie występuje w niedojrzałych tymocytach (3). Białko to ulega
ekspresji w pomocniczych limfocytach T, około 80–90% dojrzałych tymocytów i 55–65% dojrzałych obwodowych
komórek T. Występuje również w podgrupie supresorowych lub cytotoksycznych komórek T. CD4 ulega także
ekspresji w monocytach/makrofagach, komórkach Langerhansa oraz innych komórkach dendrytycznych, ale nie
występuje w komórkach B (1).
CD4 odgrywa ważną rolę w immunofenotypowaniu reaktywnych limfocytów oraz zaburzeń limfoproliferatywnych.
Większość chłoniaków z obwodowych komórek T wywodzi się z podgrupy pomocniczych limfocytów T, w związku z
czym większość, choć nie wszystkie, pograsicznych nowotworów komórek T jest CD4-dodatnia (1).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem,
3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie
problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia metody.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do użycia mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i azydek sodu o stężeniu 0,015 mol/L.
Klon: 4B12. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Rekombinowane białko fuzyjne odpowiadające zewnętrznej domenie cząsteczki CD4.
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł‚ biologicznych, należy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą należy nosić odpowiednie osobiste wyposażenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi rozporządzeniami.
Przechowywanie
(118073-001)
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosować po upływie terminu ważności podanego na fiolce. Jeśli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi zweryfikować takie
warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem
próbek pochodzących od pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. W wypadku nieoczekiwanego
wyniku odczynu, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem
z przeciwciałem, należy się skontaktować z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
IR649/PL/SSM/15.04.08 str. 1/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przygotowanie
próbek
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe należy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie preparatów cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Optymalne wyniki uzyskuje się w
wyniku wstępnej obróbki tkanek przy użyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (10x),
(Link) (nr kat. K8002/8004).
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, które zostały odparafinowane, zalecany jest odczynnik Dako PT Link (nr kat. PT100/PT101).
Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja użytkownika aparatu PT Link.
Postępować według procedury wstępnej obróbki zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval
Solution, High pH (10x), (Link) (nr kat. K8002/K8004). Dla aparatów PT Link należy stosować następujące
parametry: Temperatura wstępnego ogrzewania: 65°C; temperatura i czas odmaskowania antygenu: 97°C przez
20 (±1) minut, ochłodzić do 65°C. Usunąć statywy na szkiełka aparatu Autostainer wraz ze szkiełkami ze zbiornika
aparatu PT Link i natychmiast zanurzyć szkiełka w słoju/zbiorniku (np. PT Link Rinse Station, nr kat. PT109)
wypełnionym rozcieńczonym buforem EnVision FLEX Wash Buffer (10x), (Link) (nr kat. K8002) o temperaturze
pokojowej. Zostawić szkiełka w buforze Wash Buffer na 1–5 minut.
Skrawki zatapiane w parafinie: W celu odmiennego przygotowania próbek zarówno odparafinowanie, jak i
odmaskowanie można wykonać w aparacie PT Link z zastosowaniem zmienionej procedury. Informacje można
znaleźć w Instrukcji użytkownika aparatu PT Link. Po zakończeniu wykonywania odczynu skrawki tkankowe należy
poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą środka do trwałego zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek Dako Silanized Slides (nr kat. S3003).
Procedura barwienia
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym system wizualizacji jest EnVision FLEX+, Mouse, High pH, (Link) (nr kat. K8002). W systemie
Autostainer Link wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe informacje dotyczące
wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Instrukcji użytkownika aparatu Autostainer Link.
Jeśli protokoły nie są dostępne w używanym systemie Autostainer, należy skontaktować się z działem wsparcia
technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji należy również przeprowadzać w temperaturze pokojowej.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zależności od rodzaju materiału i sposobów jego przygotowania i powinny
być określone indywidualnie w każdym laboratorium. Aby możliwe było wykonanie oceny przez patologów z różnym
nasileniem odczynu preparatów, należy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako w celu
uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. Należy upewnić się, że działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe – w tym celu należy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną przy użyciu EnVision FLEX Hematoxylin, (Link) (nr kat. K8008).
Zaleca się stosowanie niewodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów należy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z użyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki i wątrobę,
natomiast we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak
opisany dla tej tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative
Control, Mouse (Link) (nr kat. IR750).
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciała wykazują odczyn błonowy.
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki normalne: Stłoczone i izolowane pomocnicze komórki T w migdałkach wykazują odczyn z zakresu od
umiarkowanego do silnego. W wątrobie komórki Kupffera i nabłonka sinusoid wykazują odczyn słaby do
umiarkowanego.
Tkanki patologiczne: Przeciwciało znakowało 1/1 ziarniaka grzybiastego i 2/2 chłoniaki z obwodowych komórek T. W
badaniu 75 pacjentów pediatrycznych przeciwciało znakowało 22/51 anaplastycznych chłoniaków z dużych komórek (2).
Piśmiennictwo
1.
Leong AS-Y, Cooper K and Leong FJW-K. CD4. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London:
Greenwich Medical Media; 2003. p. 65-66.
2.
D’Amore SEG, Menin A, Bonoldi E, Bevilacqua P, et al. Anaplastic large cell lymphomas: A study of 75 pediatric
patients. Pediatr Dev Pathol 2007;10:181-91.
3.
Dabbs DJ. Ed. Diagnostic Immunohistochemistry. 2nd edition, Elsevier Inc; 2006. p. 141-50
4.
Williamson SLH, Steward M, Milton I, Parr A, et al. New monoclonal antibodies to the cell antigens CD4 and
CD8. Am J Pathol 1998;152:1421-26.
5.
Zettl A, Rüdiger T, Konrad M-A, Chott A et al. Genomic profiling of peripheral T-cell lymphoma, unspecified, and
anaplastic large T-cell lymphoma delineates novel recurrent chromosomal alterations. Am J Pathol
2004;164:1837-48.
Objaśnienie symboli
(118073-001)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
IR649/PL/SSM/15.04.08 str. 2/2
Dako Denmark A/S | Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17