FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Lambda Light Chains

FLEX
Polyclonal Rabbit
Anti-Human
Lambda Light Chains
Ready-to-Use
(Dako Autostainer/Autostainer Plus)
Nr kat. IS507
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Przeciwciała FLEX Polyclonal Rabbit Anti-Human Lambda Light Chains, Ready-to-Use, (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w aparatach Dako
Autostainer/Autostainer Plus. Przeciwciała te są przydatne w identyfikacji komórek plazmatycznych i pokrewnych
komórek limfoidalnych zawierających łańcuchy lekkie typu lambda. Są uŜytecznym narzędziem do klasyfikacji
pacjentów z gammopatią monoklonalną (2) i amyloidozą (3, 4). Dodatkowo przeciwciała mogą być wykorzystane do
róŜnicowania nowotworowych, monoklonalnych proliferacji z reaktywnego rozrostu komórek B (5-7). Interpretacja
kliniczna dodatniego lub ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie
odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez doświadczonego patologa w kontekście historii choroby
pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Streszczenie
i informacje ogólne
Ludzkie immunoglobuliny składają się głównie z dwóch identycznych łańcuchów cięŜkich (masa cząsteczkowa ok.
50 000) i dwóch identycznych łańcuchów lekkich (masa cząsteczkowa ok. 20 000). Cztery łańcuchy są związane
wiązaniami kowalencyjnymi za pomocą wiązań dwusiarczkowych. Łańcuchy lekkie są typu kappa lub lambda. Pięć
immunoglobulin, IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, róŜni się w zaleŜności od łańcuchów cięŜkich. Immunoglobuliny IgA i IgM
występują takŜe w formach polimerycznych (8).
W jednej komórce B wytwarzane są łańcuchy lekkie tylko jednego typu: albo lambda, albo kappa. W populacji
poliklonalnej stosunek komórek B typu kappa do lambda wynosi 2:1. Występowanie mieszaniny typów komórek
łańcuchów lekkich kappa i lambda sugeruje poliklonalność i reaktywną lub nienowotworową proliferację komórek B (9).
Choroby takie jak szpiczak mnogi i chłoniak z komórek B są charakteryzowane przez proliferację monoklonalnych
nowotworowych komórek plazmatycznych wytwarzających tylko jeden typ łańcuchów lekkich. Dzięki temu wykazanie
populacji komórek ograniczonych łańcuchami lekkimi kappa lub lambda jest uŜyteczne w diagnozie
histopatologicznej tych chorób (4). Podstawowa amyloidoza AL (amyloidowy łańcuch lekki) jest takŜe zaburzeniem
komórek plazmatycznych, w którym wykazanie monotypowego lekkiego łańcucha kappa lub lambda w złogach
amyloidowych jest istotne pod kątem diagnostycznym i odróŜnia tę chorobę od amyloidozy AA, w której nie
występuje zjawisko odkładania się łańcuchów lekkich immunoglobulin (3).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące
części instrukcji do systemu detekcji IHC: 1) Zasada przeprowadzenia odczynu, 2) Niezbędne materiały
niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie preparatu, 5) Wykonanie barwienia, 6) Kontrola
jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku barwienia, 9) Ograniczenia metody.
Dostarczany
odczynnik
Gotowe do uŜycia królicze przeciwciała poliklonalne są dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym białko
stabilizujące i roztwór NaN3 o stęŜeniu 0,015 mol/L.
Immunogen
Poliklonalne łańcuchy lekkie typu lambda izolowane z puli prawidłowej ludzkiej surowicy.
Swoistość
Przeciwciała reagują z niezwiązanymi łańcuchami lambda oraz z łańcuchami lambda w nienaruszonych
cząsteczkach immunoglobulin. Ślady zanieczyszczeń przeciwciałami usunięto przez absorpcję w fazie stałej z
innymi białkami ludzkiego osocza.
Testy swoistości; barwienie błękitem Coomassie Brilliant Blue:
Podwójna immunodyfuzja: Nie stwierdzono reakcji z łańcuchami kappa ani gamma przy uŜyciu 15 µL stęŜonego
przeciwciała z 15 µL IgG typu kappa.
Immunoelektroforeza krzyŜowa: Zaobserwowano tylko osady związane z łańcuchami lambda przy uŜyciu stęŜenia
przeciwciała 12,5 µL na cm2 Ŝelu w badaniach z 2 µL ludzkiego osocza lub 2 µL puli stęŜonego moczu pacjentów z
białkomoczem cewkowym.
Środki ostroŜności
1. Odczynniki przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3
występujące w produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub
miedzią, wchodzącymi w skład instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy
usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się
azydków w instalacji kanalizacyjnej.
3. Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować
odpowiednie procedury postępowania.
4. NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź
oczami.
5. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
(116652-003)
Dako Denmark A/S
IS507/PL/MNI/2009.12.04 s. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8°C. Nie stosowa ć po upływie terminu waŜności podanego na opakowaniu. JeŜeli
odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, uŜytkownik
powinien je zweryfikować. Nie ma jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności produktu. Z tego względu
jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjentów, naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić róŜnicami w procedurach
laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie
próbek oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków zatapianych w parafinie.
Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o wymiarach około 4 µm.
Wymagane jest poddanie cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER) z uŜyciem Dako PT Link (nr kat.
PT100/PT101). Szczegółowe instrukcje zawiera Instrukcja uŜytkownika aparatu PT Link. Optymalne wyniki uzyskuje
się w wyniku wstępnej obróbki tkanek przy uŜyciu roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH
(50x) (nr kat. K8000/K8004).
Skrawki zatapiane w parafinie: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecana jest procedura 3 w 1 z uŜyciem odczynnika Dako PT Link. Postępować według procedury
wstępnej obróbki tkanek, zamieszczonej w ulotce roztworu EnVision FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x)
(nr kat. K8000/K8004). Uwaga: Po przeprowadzeniu barwienia skrawki muszą być odwodnione, oczyszczone
zakryte za pomocą środka do trwałego zatapiania.
Odparafinowane skrawki: Do obróbki wstępnej utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych, zalecane jest uŜycie odczynnika Dako PT Link i przeprowadzenie procedury opisane dla skrawków
parafinowych. Po zakończeniu barwienia szkiełka naleŜy zatopić w wodnym lub trwałym środku do zatapiania.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Wykonanie odczynu
oraz materiały
wymagane, ale
niedostarczane
Zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat.
K8010). Oprogramowanie aparatów Dako Autostainer/Autostainer Plus zawiera wstępnie zaprogramowane etapy
odczynu i czas barwienia, które są aktywne podczas korzystania z następujących protokołów:
Protokół wzorcowy: FLEXRTU2 (dawka odczynnika 200 µL) lub FLEXRTU3 (dawka odczynnika 300 µL)
Autoprogram: Lambda (bez barwienia kontrastowego) lub LambdaH (z barwieniem kontrastowym)
Dla etapu „Auxiliary” naleŜy ustawić opcję „rinse buffer” w programach barwienia ≤10 szkiełek. Przy programach z
więcej niŜ 10 szkiełkami, etap „Auxiliary” naleŜy ustawić na „none”. Zapewnia to porównywalne czasy płukania.
Wszystkie procedury inkubacji naleŜy równieŜ przeprowadzać w temperaturze pokojowej. Szczegółowe informacje
zawiera instrukcja obsługi odpowiedniego aparatu. Jeśli protokoły nie są dostępne w uŜywanym aparacie Dako
Autostainer, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako.
Optymalne warunki mogą się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału oraz sposobu jego przygotowania i
powinny być określone indywidualnie w kaŜdym laboratorium. Aby moŜliwe było wykonanie oceny przez patologów z
róŜnym nasileniem odczynu preparatów, naleŜy skontaktować się z działem obsługi/obsługą techniczną firmy Dako
w celu uzyskania informacji dotyczącej zmiany programowania protokołu. NaleŜy upewnić się, Ŝe działanie
zmodyfikowanego protokołu jest prawidłowe — w tym celu naleŜy ocenić, czy odczyn jest taki jak opisany w części
„Charakterystyka wydajnościowa”.
Zalecane jest barwienie kontrastowe hematoksyliną za pomocą EnVision FLEX Hematoxylin (Dako
Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. K8018). Zaleca się stosowanie bezwodnego, trwałego środka do zatapiania.
Równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby
kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Dodatnia kontrola tkankowa powinna obejmować migdałki, natomiast
we wszystkich dodatnich preparatach komórki/struktury powinny wskazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej
tkanki w części „Charakterystyka wydajnościowa”. Zalecana kontrola ujemna to FLEX Negative Control, Rabbit
(Dako Autostainer/Autostainer Plus) (nr kat. IS600).
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciw łańcuchom lekkim lambda mogą wykazywać ziarnisty odczyn cytoplazmatyczny, odczyn
błonowy i/lub okołojądrowy (10-12).
Charakterystyka
wydajnościowa
Tkanki prawidłowe: W preparatach prawidłowych migdałków przeciwciało znakuje komórki plazmatyczne, komórki
ośrodka grudek chłonnych i komórki strefy płaszcza, wykazując odczyn poliklonalny z wyraźnym rozróŜnieniem
komórek dających odczyn dodatni i ujemny. W migdałkach ok. 40-50% komórek B strefy płaszcza wykazuje odczyn
błonowy słaby do umiarkowanego, natomiast immunoblasty i komórki plazmatyczne w ośrodkach rozmnaŜania takŜe
wykazują umiarkowany lub silny odczyn cytoplazmatyczny. Odczyn limfocytów z komórek B powinien być ujemny lub
słaby w ośrodkach rozmnaŜania. MoŜe pojawić się niewielki odczyn tła w surowicy, tkance łącznej i komórkach
nabłonka.
Tkanki nieprawidłowe: W reaktywnych węzłach chłonnych został wykazany charakterystyczny wzór odczynu z
przeciwciałami przeciwko łańcuchom lambda Dako i trudny do odróŜnienia wzór z przeciwciałami przeciwko
łańcuchom kappa wyraźnie wykazującym poliklonalność komórek B w zaburzeniach (6). W szpiczakach mnogich,
zmienionych chorobowo komórki plazmatyczne były monotypowe oraz wykazywały odczyn dodatni w przypadku
łańcuchów kappa lub lambda (5). W 113 przypadkach chłoniaków z utrwalonych w formalinie komórek B i komórek
nieziarniczych, w tym kilku niewielkich preparatach biopsyjnych rdzenia z niezwykle ograniczoną tkanką,
zaobserwowano ekspresję łańcuchów lekkich monotypowych w 91 (81%) z tych przypadków ze 100% swoistością
przy uŜyciu przeciwciał przeciwko łańcuchom lekkim kappa lub lambda Dako (7). W 23 przypadkach zaburzeń
odkładania się łańcuchów lekkich (LCDD) przeciwciało przeciwko kappa Dako znakowało preparaty nerek
monotypowo w 17 przypadkach, natomiast 5 przypadków wykazało odczyn dodatni wyłącznie z przeciwciałami
przeciwko lambda Dako (3).
(116652-003)
Dako Denmark A/S
IS507/PL/MNI/2009.12.04 s. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17
Piśmiennictwo
1. Withold W, Reinauer H. An immunoblotting procedure following agarose gel electrophoresis for detection of
Bence Jones proteinuria compared with immunofixationand quantitative light chain determination. Eur J Clin
Chem Clin Biochem 1995;33:135-8.
2. Peterson LC, Brown BA, Crosson JT, Mladenovic J. Application of the immunoperoxidase technic to bone marrow
trephine biopsies in the classification of patients with monoclonal gammopathies. Am J Clin Pathol 1986;85:68893.
3. Strøm EH, Fogazzi GB, Banfi G, Pozzi C, Mihatsch MJ. Light chain deposition disease of the kidney.
Morphological aspects in 24 patients. Virchows Arch 1994;425:271-80.
4. Jessup E. Antigen retrieval techniques for the demonstration of immunoglobulin light chains in formalin-fixed,
paraffin-wax embedded sections. UK NEQAS immunocytochemistry news. Winter 1994/95; Issue 4:12-6.
5. Taylor CR, Burns J. The demonstration of plasma cells and other immunoglobulin-containing cells in formalinfixed, paraffin-embedded tissues using peroxidase-labelled antibody. J Clin Path 1974;27:14-20.
6. Harris NL, Poppema S, Data RE. Demonstration of immunoglobulin in malignant lymphomas. Use of an
immunoperoxidase technic on frozen sections. Am J Clin Pathol 1982;78:14-21.
7. Marshall-Taylor CE, Cartun RW, Mandich D, DiGuiseppe JA. Immunohistochemical detection of immunoglobulin
light chain expression in B-cell non-Hodgkin lymphomas using formalin-fixed, paraffin-embedded tissues and a
heat-induced epitope retrieval technique. Appl Immunohistochem Mol Morphol 2002;10:258-62.
8. Klein J, Hořejši V. Immunology. 2nd ed. Abingdon (UK): Blackwell Science Ltd; 1999. p. 226-7.
9. Leong ASY, Cooper K, Leong FJWA. Manual of diagnostic antibodies for immunohistology. London: Oxford
University Press; 1999. p. 218.
10. Norton AJ, Isaacson PG. Detailed phenotypic analysis of B-cell lymphoma using a panel of antibodies reactive in
routinely fixed wax-embedded tissue. Amer J Pathol 1987; 128(2):225
11. Mann RB, Jaffe ES, Bernard CW. Malignant lymphomas – a conceptual understanding of morphologic diversity.
Amer J Pathol 1979; 94(1):105
12. Pangalis GA, Nathwani BN, Rappaport H. Detection of cytoplasmic immunoglobulin in well-differentiated
lymphoproliferative diseases by the immunoperoxidase method. Cancer 1980; 45:1334
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
ZuŜyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Zawartość wystarcza na <n>
testów
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(116652-003)
Dako Denmark A/S
IS507/PL/MNI/2009.12.04 s. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Fax +45 44 85 95 95 | CVR No. 33 21 13 17