Monoclonal Mouse Anti-Human CD56/RPE Klon MOC

Monoclonal Mouse
Anti-Human CD56/RPE
Klon MOC-1
nr kat. R 7127
Wydanie z 01.01.03
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
R 7127 jest przeznaczony do stosowania w cytometrii przepływowej. CD56 stanowi prototypowy marker
ludzkich komórek NK (ang. Natural Killer) i jest również obecny na podzestawie CD4 dodatnich oraz CD8
dodatnich limfocytów T krwi obwodowej (1). Interpretację wyników barwienia przy użyciu przeciwciał wobec
CD56 powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań w oparciu o historię
choroby pacjenta oraz inne testy diagnostyczne.
Synonim antygenu
Cząsteczka N-CAM (ang. Neural Cell Adhesion Molecule, N-CAM), Leu-19, NKH1 (1).
Wstęp
Cząsteczka CD56 jest glikoproteiną błonową, która posiada wiele izoform generowanych przez alternatywne
składanie pojedynczego genu zlokalizowanego na chromosomie 11 (2). Rdzenny polipeptyd jest izoformą o
masie cząsteczkowej 140 kDa, która może być w różny sposób glikozylowana tworząc dojrzałe cząsteczki.
Główną izoformą występującą w limfocytach NK i T jest białko zakotwiczone transmembranowo o masie
cząsteczkowej 140 kDa. W tkankach antigen CD56 jest znajdowany w możdżku oraz korze mózgu oraz w
miejscach połączeń nerwowo-mięśniowych. Cząsteczka ta jest identyczna z izoformą cząsteczki N-CAM o
masie cząsteczkowej 140 kDa (1, 3).
Dodatkowo, CD56 jest również obecny w niektórych białaczkach z dużych ziarnistych limfocytów,
małokomórkowych rakach płuca, nowotworach wywodzących się z tkanki nerwowej, szpiczakach oraz w
białaczkach szpikowych (1).
Odczynnik dostarczony
R 7127 jest oczyszczonym mysim przeciwciałem monoklonalnym sprzężonym z R-fikoerytryną (ang. R-phycoerythrin, RPE). Koniugat jest dostarczany w postaci płynnej w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy
bydlęcej (BSA) oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL koniugatu
przeznaczone jest dla maksymalnie 105 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgG1, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: Partrz informacja podana na etykiecie fiolki.
Immunogen
Komórki linii komórkowej niskiego przejścia (przejścia 3-6) pochodzące z wysięku opłucnowego pacjenta
chorującego na małokomórkowego raka płuc (4).
Swoistość
Przeciwciało przeciw-CD56, MOC-1 włączono do programu Szóstych Międzynarodowych Warsztatów i
Konferencji: Ludzkie antygeny różnicowania leukocytów (International Workshop and Conference on Leucocyte
Differentiation Antigens), a badania przeprowadzone przez liczne laboratoria potwierdziły jego reaktywność z
antygenem CD56 (2).
Epitop rozpoznawany przez przeciwciało przeciw-CD56, MOC-1 jest oporne na wytrawianie neuraminydynazą
oraz wrażliwe na działanie temperatury oraz proteaz (4).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych należy stosować
właściwe procedury postępowania.
Przechowywanie
Przechowywać w ciemnym miejscu w temp. 2-8C. Nie używać po upłynięciu daty ważności podanej na
etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niż podane powyżej, użytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi
nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje
podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem
Pomocy Technicznej naszej firmy.
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez odwirowanie na podłożu rozdzielającym. Alternatywnie po
wykonaniu czynności opisanych w punkcie 6 zhemolizować krwinki czerwone.
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste roztworem RPMI 1640 lub PBS o pH 7,2-7,4.
4.
W jednej probówce należy zmieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L R 7127.
5.
W innej probówce należy zmieszać 100 L zawiesiny komórek z odpowiednią objętością, np. 10 L,
odczynnika kontroli ujemnej. Zalecanym odczynnikiem kontroli ujemnej dla R 7127 jest Dako nr kat. X
0928.
(107663-002)
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark
R 7127/PL/OKJ/01.01.03 p. 1/2
· Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
6.
Inkubować w ciemności w temp. 4 C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać roztworem PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie zawiesić komórki w każdej z
probówek w płynie odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w 0,3 mL 1% paraformaldehydzie
(utrwalacz) w 0,01 mol/L PBS o pH 7,4.
8.
Analizować na cytometrze przepływowym.
Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas każdego testu
odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromu są wrażliwe na
działanie światła, dlatego podczas procedury barwienia i do chwili wykonania analizy należy chronić próbki
przed działaniem światła.
Piśmiennictwo
1.
Poggi A. CD56. CD Guide. In: Mason D, André P, Bensussan A, Buckley C, Civin C, Clark E, et al.,
editors. Leucocyte typing VII. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 7th International
Workshop and Conference; 2000 Jun 19-23; Harrogate, United Kingdom. New York: Oxford University
Press Inc.; 2002. p. 805-806.
2.
Costa P. NK4. CD56 workshop panel report. In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert
SM, Mason DY, Miyasaka M, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10-14; Kobe, Japan. New
York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 271-2
3.
Lanier LL, Testi R, Bindl J, Phillips JH. Identity of Leu-19 (CD56) leukocyte differentiation antigen and
neural cell adhesion molecule. J Exp Med 1989;169: 2233-8.
4.
de Leij L, Poppema S, Nulend JK, ter Haar A, Schwander E, Ebbens F, et al. Neuroendocrine
differentiation antigen on human lung carcinoma and Kulchitski cells. Cancer Res 1985;45:2192-2200.
Objaśnienia symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
(107663-002)
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark
R 7127/PL/OKJ/01.01.03 p. 2/2
· Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17