ce-ivd spec template

advertisement
Monoclonal Mouse
Anti-Human CD57/FITC
Clone TB01
Nr kat. F 7270
Wydanie z 24.02.2004
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
F 7270 jest przeznaczony do stosowania w cytometrii przepływowej. Przeciwciało jest przeznaczone do
wykrywania komórek wykazujących obecność CD57. CD57 był pierwotnie znany jako marker limfocytów typu
natural killer (NK), ale jego obecność nie dotyczy jedynie limfocytów NK i jest wykazywana w przypadku
komórek różnych linii (1). Przeciwciała przeciw CD57 są przydatne w ocenie chorób limfoproliferacyjnych,
szczególnie białaczki z limfocytów ziarnistych linii T (large granular lymphocyte leukaemia), gdy używane są
wraz z szeregiem innych przeciwciał (2-4). Interpretację wyników na podstawie historii choroby pacjenta oraz
innych testów diagnostycznych powinien przeprowadzić pracownik uprawniony do wykonywania takich badań.
Synonimy antygenu
HNK-1, Leu-7 (1, 2).
Wstęp
CD57 jest antygenem węglowodanowym obecnym na różnych komórkach, zarówno związanych z hemopoezą,
jak i komórkach pochodzenia neuroektodermalnego (3). Ważny składnik węglowodanowy może odpowiadać za
różne masy cząsteczkowe przypisywane CD57 po dokonaniu immunoprecypitacji tej cząsteczki z różnych
źródeł komórkowych (1). W mózgu cząsteczka CD57 jest związana z glikoproteiną mieliny (MAG, myelinassociated glycoprotein), NCAM i innymi białkami (5). We krwi białka związane z tym antygenem nie zostały
szczegółowo opisane.
CD57 jest obecny w podgrupach limfocytów NK, limfocytów CD8-dodatnich oraz w małym odsetku limfocytów T
CD4-dodatnich/CD45R0-dodatnich (1, 2). Natomiast antygen CD57 jest nieobecny na erytrocytach,
granulocytach, monocytach, płytkach krwi, limfocytach krwi ze sznura pępowinowego, niedojrzałych
tymocytach w stanie spoczynku lub pobudzonych (1, 5). W przypadku tkanek nowotworowych antygen CD57
jest w różnym stopniu obecny w komórkach białaczki z limfocytów ziarnistych linii T (4). Ponadto, obecność
antygenu CD57 wykazano w komórkach mięsaka Ewinga, czerniaka, nerwiaka zarodkowego (neuroblastoma),
nowotworów pochodzenia neuroektodermalnego, nerwiakowłókniaków i nowotworów drobnokomórkowych płuc
(2, 3).
Odczynnik dostarczony
Koniugat anty-CD57, F 7270, został wyprodukowany z oczyszczonego mysiego przeciwciała monoklonalnego.
Koniugat jest dostarczany w postaci płynnej, w buforze zawierającym 1% albuminę surowicy bydlęcej (BSA)
oraz 15 mmol/L NaN3 o pH 7,2. Każda fiolka zawiera 100 testów (10 µL koniugatu przeznaczone jest dla
maksymalnie 106 leukocytów z normalnej ludzkiej krwi obwodowej).
Izotyp: IgM, kappa. Stężenie koniugatu mg/L: patrz informacja podana na etykiecie fiolki.
Przeciwciało
nr kat.
Fluorochrom
Kontrola ujemna nr
kat.
F 7270
FITC (Fluorescein Isothiocyanate Isomer 1)
X 0934
Immunogen
Pula komórek linii ludzkiego nerwiaka zarodkowego (6).
Swoistość/reaktywność
Przeciwciało anty-CD57, TB01, zostało włączone do programu Szóstego Międzynarodowego Warsztatu i
Konferencji na temat Ludzkich Antygenów Różnicowania Leukocytów (Sixth International Workshop and
Conference on Human Leucocyte Differentiation Antigens). Badania przeprowadzone przez liczne laboratoria
potwierdziły reaktywność tego przeciwciała z antygenem CD57 (1).
Przeciwciało to rozpoznaje epitop węglowodanowy CD57 obecny na kilku cząsteczkach powierzchniowych. W
układzie nerwowym epitop ten jest szczególnie liczny w glikoproteinie mieliny (MAG) (1). Epitop dla
przeciwciała TB01 wykazuje wrażliwość na neuraminidazę i bromelainę, ale jest oporny na trypsynę (1).
Środki ostrożności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Produkt zawiera azydek sodu (NaN3), substancję chemiczną silnie toksyczną w czystej postaci. Azydek
sodu, zastosowany w produkcie w stężeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, może reagować
z elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych
azydków metali. Po usunięciu spłukać dużą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w
kanalizacji.
3. Produkt zawiera materiał pochodzenia zwierzęcego, dlatego należy go traktować jako potencjalnie zakaźny.
Przechowywanie
(108712-002)
Przechowywać w ciemnym miejscu w temperaturze 2–8°C. Nie używać po upływie daty ważności podanej na
etykiecie fiolki. Jeśli odczynniki są przechowywane w innych warunkach niż podane powyżej, użytkownik musi
zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na utratę stabilności produktu. Dlatego
jednocześnie z badaniem próbek pacjenta należy wykonywać kontrole dodatnie i ujemne. Jeśli wystąpi
nieoczekiwany wzór barwienia, którego nie można wyjaśnić różnicami w procedurach laboratoryjnych i istnieje
podejrzenie, że przyczyną może być problem z przeciwciałem, należy niezwłocznie skontaktować się z Działem
Pomocy Technicznej naszej firmy.
F 7270/PL/OKJ/24.02.04 str. 1/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Procedura barwienia
1.
Pobrać krew żylną do probówki z antykoagulantem.
2.
Wyizolować komórki jednojądrzaste przez odwirowanie na podłożu rozdzielającym. Alternatywnie po
wykonaniu czynności opisanych w punkcie 6 zhemolizować krwinki czerwone.
3.
Dwukrotnie przepłukać komórki jednojądrzaste roztworem RPMI 1640 lub PBS o pH 7,2-7,4.
4.
Wymieszać 100 L zawiesiny komórek z 10 L przeciwciała anty-CD57 skoniugowanego z fluorochromem.
5.
Jako kontrolę ujemną zastosować niereaktywne przeciwciało monoklonalne tego samego izotopu,
skoniugowane z tym samym fluorochromem (zob. tabela).
6.
Inkubować w ciemności w temperaturze 4°C przez 30 minut.
7.
Dwukrotnie przepłukać roztworem PBS zawierającym 2% BSA. Ponownie przygotować zawiesinę komórek
w płynie odpowiednim dla analizy cytometrycznej, np. w 0,3 mL 1% paraformaldehydu (utrwalacz) w 0,01
mol/L PBS o pH 7,4.
8.
Analizować w cytometrze przepływowym.
Dla zapewnienia kontroli odczynników i przygotowania próbek zalecane jest stosowanie podczas każdego testu
odpowiednich próbek kontroli dodatniej i ujemnej. Należy pamiętać, że koniugaty fluorochromu są wrażliwe na
działanie światła, dlatego też próbki należy chronić przed działaniem światła podczas procedury barwienia i do
chwili wykonania analizy.
Piśmiennictwo
1.
Funaro A, Malavasi F. NK5. CD57 workshop panel report. W: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne
AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M., et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation
antigens. Proceedings of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10–14; Kobe, Japan.
New York, London: Garland Publishing Inc.; 1997. p. 274-6.
2.
Poggi A, CD guide In: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM, Mason DY, Miyasaka M.,
et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 6th International
Workshop and Conference; 1996 Nov 10–14; Kobe, Japan. New York, London: Garland Publishing Inc.;
1997. p. 1156.
3.
Funaro A, Cafforio P, Horenstein A, Magrini E, Ardeleanu C, Guena et al. Human CD57, a link molecule
between leucocytes and neural cells. W: Schlossman SF, Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T,
Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell differentiation antigens. Proceedings of the 5th
International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7; Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford
University Press; 1995. Volume 2. p. 1435-6.
4.
Macey MG, McCarthy DA, Newland AC. W: Kishimoto T, Kikutani H, von dem Borne AEG, Goyert SM,
Mason DY, Miyasaka, et al., editors. Leucocyte typing VI. White cell differentiation antigens. Proceedings
of the 6th International Workshop and Conference; 1996 Nov 10–14; Kobe, Japan. New York, London:
Garland Publishing Inc.; 1997. p.276-7
5.
Schubert J, Lanier LL, Schmidt RE. N17 Cluster report: CD57. W: Knapp W, Dörken B, Gilks WR, Rieber
EP, Schmidt RE, Stein H, et al., editors. Leucocyte typing IV. White cell differentiation antigens.
Proceedings of the 4th International Workshop and Conference; 1989 Feb 21–25; Vienna, Austria. Oxford,
New York, Tokyo: Oxford University Press; 1989. p.711-14
6.
Funaro A, Cafforio P, Horenstein A, Magrini E, Ardeleanu C, Guena et al. NK3.6 Epitope analysis of
human CD57 by means of a panel of newly generated high affinity murine mAb. W: Schlossman SF,
Boumsell L, Gilks W, Harlan JM, Kishimoto T, Morimoto C, et al., editors. Leucocyte typing V. White cell
differentiation antigens. Proceedings of the 5th International Workshop and Conference; 1993 Nov 3-7;
Boston, USA. Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press; 1995. Volume 2. p. 1412-14.
Objaśnienia symboli
(108712-002)
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Zużyć przed
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Chronić przed światłem
Producent
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
Numer serii
F 7270/PL/OKJ/24.02.04 str. 2/2
Dako Denmark A/S · Produktionsvej 42 · DK-2600 Glostrup · Denmark · Tel. +45 44 85 95 00 · Fax +45 44 85 95 95 · CVR No. 33 21 13 17
Download