FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific

FLEX
Monoclonal Mouse
Anti-Human
B-Cell-Specific Activator Protein
Klon DAK-Pax5
Ready-to-Use
(Dako Omnis)
Nr kat. GA650
Przeznaczenie
Do badań diagnostycznych in vitro.
Przeciwciało FLEX Monoclonal Mouse Anti-Human B-Cell-Specific Activator Protein, Clone DAK-Pax5, Ready-toUse (Dako Omnis), jest przeznaczone do stosowania w immunohistochemii w urządzeniu Dako Omnis. Przeciwciała
dla proteiny aktywacyjnej komórek typu B (BSAP) mogą być stosowane do identyfikacji późnych, wczesnych i
dojrzałych komórek typu B oraz do klasyfikacji chłoniaków (1-4). W połączeniu z panelem przeciwciał są one bardzo
przydatne w identyfikacji róŜnicowania klasycznej choroby Hodgkina od chłoniaków aplastycznych duŜych komórek
typu T i null(1, 3). Interpretacja kliniczna wystąpienia barwienia lub jego braku musi być uzupełniona o badania
morfologiczne z wykorzystaniem odpowiednich prób kontrolnych i powinna być przeprowadzana przez
doświadczonego patologa z uwzględnieniem historii choroby pacjenta i innych badań diagnostycznych.
Synonimy antygenu
BSAP, Pax5, NF-HB, Sα-BP, NFSµ-B1, LR1 oraz EBB-1 (2, 4).
Podsumowanie
i wyjaśnienie
BSAP, znana takŜe jako paired box protein 5 (Pax5), jest czynnikiem transkrypcyjnym ulegającym ekspresji w
komórkach typu B. BSAP naleŜy do rodziny genów PAX kodujących czynniki transkrypcyjne uczestniczące w
rozwoju komórek B. BSAP ulega ekspresji w późnych, wczesnych i dojrzałych komórkach B, nie ulega natomiast
ekspresji w komórkach plazmatycznych (3, 4). Ukierunkowane zakłócenie genu BSAP u myszy blokuje rozwój
komórek typu B w późnym etapie, co sugeruje udział BSAP w kontrolowaniu rozwoju tych komórek (2). Podczas
embriogenezy BSAP ulega przejściowej ekspresji w rozwijającym sie układzie nerwowym. Później ekspresję
BSAP wykrywa się w wątrobie płodu, gdzie skorelowany jest z początkiem limfopoezy B. Dlatego BSAP moŜe
odgrywać waŜną rolę nie tylko w rozwoju komórek typu B, ale równieŜ w rozwoju systemu nerwowego (1, 3, 5).
W immunohistochemii odróŜnienie klasycznego chłoniaka Hodgkina (CHL) od chłoniaka aplastycznego duŜych
komórek typu T i null (1) moŜe być trudne. W przypadku CHL, gen BSAP ulega ekspresji w komórkach Hodgkina i
Reeda-Sternberga (komórki HRS), natomiast komórki HRS w większości nie wykazują obecności antygenów
komórek B, takich jak CD19 czy CD20 (6). BSAP jest markerem pomocnym w diagnozowaniu nieziarniczego
chłoniaka komórek B, chłoniaka Hodgkina i nowotworów neuroendokrynnych (1-4, 6-8), pomimo jego ekspresji w
grupie złośliwych raków nabłonkowych.(7).
Patrz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub instrukcje do
systemu detekcji IHC.
Odczynnik
dostarczony
Gotowe do uŜycia mysie przeciwciało monoklonalne jest dostarczane w postaci ciekłej w buforze zawierającym
białko stabilizujące i azydek sodu w stęŜeniu 0,015 mol/L.
Klon: DAK-Pax5. Izotyp: IgG1, kappa.
Immunogen
Syntetyczny 17-meryczny peptyd z sekwencji C-końcowej hamującej domeny proteiny.
Swoistość
W testach Western blot lizatu z komórek śledziony myszy przeciwciało znakuje proteinę o masie 55 kDa protein
odpowiadającą BSAP.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. Azydek sodu,
zastosowany w produkcie w stęŜeniu, które nie jest sklasyfikowane jako niebezpieczne, moŜe reagować z
elementami kanalizacji wykonanymi z ołowiu i miedzi, powodując nagromadzenie silnie wybuchowych azydków
metali. Po usunięciu spłukać duŜą ilością wody, aby zapobiec nagromadzeniu się azydku metalu w kanalizacji.
3.
Podobnie jak w przypadku wszelkich materiałów pochodzących ze źródeł biologicznych, naleŜy stosować
właściwe procedury postępowania.
4. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
5. Niewykorzystany roztwór utylizować zgodnie z rozporządzeniami lokalnymi, wojewódzkimi i krajowymi.
Przechowywanie
(123461-001)
Dako Denmark A/S
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C. Przechowywa ć z zamknietą pokrywką. Nie naleŜy uŜywać odczynników po
upływie terminu waŜności podanego na fiolce. Stabilność systemu wynosi 80 godzin. Pozostała stabilność systemu
jest kontrolowana przez oprogramowanie Dako Omnis. Jeśli odczynniki są przechowywane w warunkach innych niŜ
podane powyŜej, uŜytkownik musi zweryfikować takie warunki. Nie ma oczywistych oznak wskazujących na
niestabilność produktu. Dlatego jednocześnie z badaniem próbek pochodzących od pacjenta naleŜy wykonywać
kontrole pozytywne i negatywne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z
działem wsparcia technicznego firmy Dako.
P02251PL_001_GA650/2012.12 p. 1/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR nr 33 21 13 17
Skrócona instrukcja
uŜytkownika
Krok
Utrwalanie/zatapia
nie
Utrwalane formaliną, zatapiane w parafinie
Comments (Komentarze)
Odparafinowanie
Obróbka wstępna
EnVision™ FLEX, High pH (nr kat. GV804)
HIER 30 min
Przeciwciało
Produkt gotowy do uŜycia
Inkubacja 20 min
Kontrola
negatywna
FLEX Negative Control, Mouse (nr kat.
GA750)
Inkubacja 20 min
Wizualizacja
EnVision™ FLEX (nr kat. GV800) +
EnVision™ FLEX+ Mouse LINKER (nr kat.
GV821)
Block: 3 min; Link: 10 min; Polymer: 20
min; Chromogen: 5 min
Barwnik
kontrastowy
Hematoxylin (nr kat. GC808)
Inkubacja 3 min
Tkanka kontrolna
Migdałki
Odczyn jądrowy
Szkiełka
FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020)
Zaleca się stosowanie w celu uzyskania
lepszego przylegania skrawków
tkankowych do szkiełek
Zatapianie
preparatu
Wymagane niewodne, trwałe zatapianie
preparatów
Po przeprowadzeniu barwienia, skrawki
muszą być odwodnione, oczyszczone i
zakryte za pomocą środka do trwałego
zatapiania
Oprzyrządowanie
Dako Omnis
Odczynniki znajdują się w fiolkach
dostosowanych do urządzenia
*UŜytkownik jest zobowiązany przeczytać ulotki dostarczane do opakowań, które zawierają dokładne instrukcje przeprowadzania
procedury barwienia i postępowania z produktem.
Przygotowanie
próbek
Skrawki parafinowe: przeciwciała mogą być wykorzystane do znakowania utrwalonych formaliną skrawków
zatapianych w parafinie. Preparaty tkankowe naleŜy pociąć na skrawki o grubości 4 µm.
Obróbka wstępna: wymagane jest poddanie utrwalonych w formalinie i zatopionych w parafinie skrawków
tkankowych cieplnemu odmaskowaniu antygenu (HIER). Zaleca się przeprowadzenie na tkankach HIER z
zastosowaniem odczynnika EnVision™ FLEX Target Retrieval Solution, High pH (50x) (Dako Omnis), nr kat.
GV804. Procesy odparafinowania, odparowania i odmaskowania antygenu przeprowadza się w urządzeniu Dako
Omnis. Informacje moŜna znaleźć w Podstawowym podręczniku uŜytkownika Dako Omnis.
W trakcie przygotowywania oraz podczas procedury znakowania immunohistochemicznego skrawki nie powinny
wyschnąć. W celu uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych zaleca się stosowanie
szkiełek FLEX IHC Microscope Slides (nr kat. K8020).
Procedura barwienia
Program: w systemie Dako Omnis wstępnie zaprogramowano etapy odczynu i czasy inkubacji. Szczegółowe
informacje dotyczące wkładania szkiełek mikroskopowych i odczynników przedstawiono w Podstawowym
podręczniku uŜytkownika urządzenia Dako Omnis. Jeśli protokoły są niedostępne w uŜywanym urządzeniu Dako
Omnis, naleŜy skontaktować się z działem wsparcia technicznego firmy Dako. Wszystkie procedury inkubacji
przeprowadza się w temperaturze 32 °C w urz ądzeniu dako Omnis.
Wizualizacja: zalecanym systemem wizualizacji jest EnVision FLEX, High pH (Dako Omnis), nr kat. GV800 łącznie z
EnVision FLEX+ Mouse LINKER (Dako Omnis), nr kat. GV821. Wizualizacja odbywa się w Dako Omnis.
Barwienie kontrastowe: zaleca się stosowanie barwnika Hematoxylin (Dako Omnis), nr kat. GC808. Barwienie
kontrastowe odbywa sie w Dako Omnis.
Zatapianie: po barwieniu w Dako Omnis skrawki naleŜy poddać odwodnieniu, oczyszczeniu i nakryć za pomocą
środka do trwałego zatapiania.
Próby kontrolne: równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od pacjentów naleŜy wykonywać pozytywne i
negatywne próby kontrolne z uŜyciem identycznego protokołu. Tkankowa kontrola pozytywna powinna obejmować
midgałki a komórki/struktury powinny wykazywać odczyn reakcji taki jak opisany dla tej tkanki w części
„Charakterystyka wydajnościowa". Zalecana kontrola ujemna to FLEX Universal Negative Control, Mouse (Dako
Omnis), nr kat. GA750.
Interpretacja
wybarwienia
Komórki znakowane przez przeciwciało wykazują odczyn jądrowy.
Charakterystyka
działania
Tkanki prawidłowe: W migdałkach komórki B strefy płaszcza i ośrodka rozmnaŜania wykazują odczyn umiarkowany
do silnego. Komórki B ośrodków rozmnaŜania mogą równieŜ wykazywać odczyn słaby do umiarkowanego w reakcji
barwienia cytoplazmatycznego. Prawidłowe tkanki limfoidalne (węzły chłonne i śledziona) wykazują silny odczyn
jądrowy komórek B grudek chłonnych i strefy płaszcza, ale limfocyty strefy T, komórki plazmy, komórki śródbłonka i
makrofagi dają wyniki ujemne. W blaszce właściwej okręŜnicy obserwuje się odczyn słaby. Torebka Bowmana nerek
wykazuje odczyn tła.
Tkanki nieprawidłowe: Przeciwciało wyznakowało klasyczne chłoniaki Hodgkina (97/158), chłoniaki rozlane z duŜych
limfocytów B (127/127), chłoniaki typu grudkowego (41/41), chłoniaki z komórek płaszcza (66/66), chłoniaki strefy
brzeŜnej (11/11), atypowe chłoniaki Burkitt’a (5/5), chłoniaki Burkitt’a (30/30), przewlekłe białaczki
limfocytowe/chłoniaki limfocytarne z małych komórek (76/76), chłoniaki śródpiersia z duzych limfocytów B (22/22),
białaczki/chłoniaki limfoblastyczne z prekursorowych komórek B (6/6); chłoniaki z komórek B z duŜą zawartością
komórek T (6/6), białaczki włochatokomórkowe (6marginal zone lymphomas/6), raki neuroendokrynne (4/16),
węzłowe chłoniaki strefy brzeŜnej (12/12), stwardnienia guzowate choroby Hodgkina z przewagą limfocytów (6/6),
potransplantacyjne zaburzenia limfoproliferacyjne (23/30) i anaplastyczne chłoniaki wielkokomórkowe (1/18), raki
nerek (1/26), raki pęcherza moczowego (1/16) raki stercza (7/21), raki Ŝołądka (1/14), raki jelita grubego (4/81), raki
szyjki macicy (3/19), raki macicy (3/18) oraz raki jajników (4/13). Nie stwierdzono znakowania w przypadku 6 ostrych
białaczek szpikowych, 45 angioimmunoblastycznych chłoniaków z komórek T, 27 anaplastycznych chłoniaków
(123461-001)
Dako Denmark A/S
P02251PL_001_GA650/2012.12 p. 2/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR nr 33 21 13 17
wielkokomórkowych z ekspresją białka ALK, 6 przewlekłych białaczek szpikowych, 1 chłoniaka z pozawęzłowych
komórek NK/T typu nosowego, 1 chłoniaka T-komórkowego wątrobowo-śledzionowego, 5 ziarniaków grzybiastych,
157 niesklasyfikowanych chłoniaków z obwodowych komórek T (PTCL/U), 6 szpiczaków mnogich, 1
potransplatacyjny PTCL/U, 6 białaczek/chłoniaków limfoblastycznych z prekursorowych komórek T, 1 chłoniaka
podskórnego z komórek T, 22 raków trzustki, 27 raków wątroby, 46 mięsaków, 13 czerniaków, 10 grasiczaków, 10
rdzeniaków, 10 gwiaździaków I/II, 10 glejaków, 100 raków płuc, and 21 raków jąder.
Piśmiennictwo
1.
Browne P, Petrosyan K, Hernandez A, Chan JA. The B-cell transcription factors BSAP, Oct-2, and BOB.1 and
the pan-B-cell markers CD20, CD22 and CD79a are useful in the differential diagnosis of classic Hodgkin
lymphoma. Am J Clin Pathol 2003;120:767-77.
2.
Krenacs L, Himmelmann AW, Quintanilla-Martinez L, Fest T, Riva A, Wellmann A, et al. Transcription factor Bcell-specific activator protein (BSAP) is differentially expressed in B cells and in subsets of B-cell lymphomas.
Blood 1998;92:1308-16.
3.
Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, Brunning RD, Delabie J. The value of anti-pax-5 immunostaining in
routinely fixed and paraffin-embedded sections: a novel pan pre-B and B-cell marker. Am J Surg Pathol
2002;26:1343-50.
4.
Zhang X, Lin Z, Kim I. Pax5 expression in non-Hodgkin’s lymphomas and acute leukemias. J Korean Med Sci
2003;18:804-8.
5.
Nutt SL, Thévenin C, Busslinger M. Essential functions of Pax-5 (BSAP) in pro-B cell development [review].
Immunobiology 1997;198:227-35.
6.
Foss HD, Reusch R, Demel G, Lenz G, Anagnostopoulos I, Hummel M, Stein H. Frequent expression of the Bcell-specific activator protein in Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin’s disease provides further evidence
for its B-cell origin. Blood 1999;94:3108-13.
7.
Mhawech-Fauceglia P, Saxena R, Zhnag S, Terracciano L, Sauter G, Chadhuri A, Herrmann FR, Penetrante R.
Pax-5 immunoexpression in various types of benign and malignant tumours: a high-throughput tissue
microarray analysis. J Clin Pathol 2007:60:709-14.
8.
Feldman AL, Dogan A. Diagnostic uses of Pax5 immunohistochemistry [review]. Adv Anat Pathol 2007:14:32334.
Objaśnienie symboli
Numer katalogowy
Temperatura przechowywania
Wyrób medyczny do
diagnostyki in vitro
Numer serii
Sprawdzić w instrukcji
stosowania
ZuŜyć przed
(123461-001)
Dako Denmark A/S
Producent
P02251PL_001_GA650/2012.12 p. 3/3
| Produktionsvej 42 | DK-2600 Glostrup | Denmark | Tel. +45 44 85 95 00 | Faks +45 44 85 95 95 | CVR nr 33 21 13 17