ćwiczenie 3 - Dorota Papciak
advertisement
ĆWICZENIE 3 REAKCJE CHARAKTERYSTYCZNE AMINOKWASÓW I BIAŁEK Celem ćwiczenia jest zapoznanie się z charakterystycznymi reakcjami aminokwasów i białek przy zastosowaniu jako materiału ćwiczeniowego czystych roztworów tych związków. Reakcje te umożliwiają odróżnianie aminokwasów i białek od innych związków organicznych, białek od wolnych aminokwasów, wykrycie aminokwasów zawierających atomy siarki oraz aminokwasów aromatycznych. Należy także dokonać identyfikacji otrzymanej próbki aminokwasu. Sprzęt i odczynniki: statyw z probówkami, pipety 1% r-ry aminokwasów: alanina, leucyna, cystyna, tyrozyna, tryptofan, wodny r-r białka, alkohol etylowy, nieznany aminokwas 0,1% acetonowy r-r ninhydryny, 0,5% r-r siarczanu miedziowego, 6n NaOH, stęż. kwas azotowy, stęż. kwas siarkowy, odczynnik Millona, 2% r-r octanu ołowiawego Wykonanie ćwiczenia: Dla wymienionych powyżej roztworów aminokwasów i białka wykonać szereg reakcji charakterystycznych wg schematu zamieszczonego poniżej. Wyniki zamieścić w tabelach: ZWIĄZEK REAKCJA Próba ninhydrynowa WYNIK WNIOSEK zw. organiczny alanina leucyna cystyna cysteina tryptofan tyrozyna białko nieznana próbka Próba biuretowa Próba ksantoproteinowa Próba Millona Próba z octanem ołowiu WYNIKI DOŚWIADCZEŃ Z BADANĄ PRÓBKĄ: PRÓBA Próba ninhydrynowa Próba biuretowa Próba ksantoproteinowa Próba Millona Próba z octanem ołowiu Nieznanym aminokwasem jest WYNIK WNIOSEK PRÓBA NINHYDRYNOWA - odróżnianie aminokwasów i białek od innych związków organicznych Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych roztworów, dodać po 1 ml r-r ninhydryny i ogrzewać przez 3 min w łaźni wodnej. Powinno pojawić się fioletowe zabarwienie (aminokwas) lub niebieskie (białko). PRÓBA BIURETOWA - odróżnianie białek od wolnych aminokwasów Do probówek wprowadzić po 1 ml badanych roztworów dodać po 2 ml 6n NaOH oraz po 1 kropli 0,5 % r-ru siarczanu miedzi dobrze wymieszać i dodać jeszcze raz 0,5 ml r-ru miedzi. W obecności białka pojawia się fioletowe zabarwienie, a aminokwasy dają barwę jasnoniebieską. PRÓBA KSANTOPROTEINOWA - wykrywanie aminokwasów aromatycznych Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych r-rów, dodać po 1 ml stęż kwasu azotowego i ogrzewać na łaźni wodnej przez 5 min. Po ochłodzeniu dodać małymi porcjami, ciągle mieszając 3 ml 6n NaOH. W obecności aminokwasu aromatycznego pojawia się czerwone zabarwienie. PRÓBA MILLONA - wykrywanie tyrozyny Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych r-rów, dodać 4 krople odczynnika Miliona i ogrzewać ostrożnie do wrzenia nad płomieniem palnika. W obecności tyrozyny powinno pojawić się ceglastoczerwone zabarwienie. WYKRYWANIE AMINOKWASÓW ZAWIERAJĄCYCH SIARKĘ (próba z octanem ołowiu) Do probówek odmierzyć po 1 ml badanych r-rów, dodać po 2 ml 6n NaOH oraz 1,0 ml r-ru octanu ołowiu i ogrzewać przez 5 min w łaźni wodnej. W obecności aminokwasu zawierającego siarkę pojawi się brunatno czarny osad lub szare zmętnienie. START Wykonaj próbę ninhydronową inny związek NIE Czy próba pozytywna? TAK aminokwas lub białko Wykonaj próbę biuretową NIE Czy próba pozytywna? TAK białko aminokwas Wykonaj próbę ksantoproteinową Czy próba pozytywna? TAK NIE aminokwas niearomatyczny aminokwas aromatyczny Wykonaj reakcję z octanem ołowiu Wykonaj próbę Millona Wykonaj próbę Adamkiewicza NIE Czy próba pozytywna? Czy próba pozytywna? TAK TAK Czy próba pozytywna? TAK tryptofan tyrozyna cystyna cysteina NIE inny aminokwas
