KRUUSE Ehrlichia Quick
advertisement
KRUUSE Ehrlichia Quick Szybki test na wykrywanie przeciwciał Ehrlichia w krwi pełnej, surowicy, lub w plazmie. Instrukcja obsługi KRUUSE Ehrlichia Quick jest stosowany do szybkiego oznaczania obecności przeciwciał swoistych przeciw Ehrlichia canis w surowicy, plazmie, lub krwi pełnej psów. Ehrlichia canis Erlichioza monocytarna psów (CME) jest chorobą wektorową przenoszoną przez kleszcze. Patogen Ehrlichia canis (E. canis) jest riketsją (Gram-ujemną, pałeczkowatą bakterią wewnątrzkomórkową) i jest przenoszona przez brązowego kleszcza psiego Rhipicephalus sanguineus (R. sanguineus). Choroba występuje u psów, szczególnie w południowej Europie. Po trwającym 8 do 20 dni okresie inkubacji, przebieg choroby można podzielić na trzy fazy. W pierwszej fazie ostrej objawy kliniczne są nie patognomoniczne i raczej łagodne z niespecyficznymi objawami klinicznymi, jak zmęczenie, gorączka, opuchnięte węzły chłonne, anoreksja i duszność. Patogen zakaża limfocyty i monocyty. Druga faza subkliniczna może trwać od kilku miesięcy do kilku lat i charakteryzuje się uporczywością patogenów przy zwiększonej produkcji przeciwciał. Psy takie wyglądają na klinicznie zdrowe. Trzecią fazą jest chroniczna CME charakteryzująca się złożonymi objawami klinicznymi w wyniku pojawiania patogenów w różnych organach, oraz ciągłej produkcji przeciwciał. Skutkować to może kompleksem immunologicznym glomerulopatii, artropatiami, powiększeniem śledziony, lub symptomami neurologicznymi. Utrzymują się również objawy nieswoiste, takie jak gorączka, anoreksja i apatia. Każdy test serologiczny na przeciwciała przeciw Ehrlichia canis należy zawsze interpretować w kontekście bieżących objawów klinicznych. Wykrycie przeciwciał jest możliwe po siódmym dniu od zakażenia i wskazuje na przebyty kontakt z patogenem. Jednakże serokonwersja może czasem zająć do czterech tygodni. Lecz nawet psy, u których zatrzymano infekcję we wczesnym stadium, przez szereg miesięcy mogą mieć niskie miano i są serologicznie ujemne. Stąd też zalecane są badania okresowe. KRUUSE Ehrlichia Quick jest dla lekarzy weterynarii użytecznym narzędziem dokładnego i szybkiego wykrywania zakażenia Ehrlichia canis we wczesnym stadium rozwoju choroby, dając możliwość wdrożenia właściwego leczenia i prewencji. Obecność czerwonej linii w obszarze linii testowej wskazuje na dodatni wynik testu. Gdy próbka nie zawiera przeciwciał Ehrlichia canis, to w obszarze testowym linia się nie tworzy. Dodatkowo, czerwona linia musi się utworzyć w obszarze linii kontrolnej, niezależnie od obecności przeciwciał Ehrlichia canis w próbce. Linia kontrolna jest elementem kontroli wewnętrznej i wskazuje, że do paska testowego doprowadzono poprawną ilość płynu, oraz że nastąpiło poprawne nasączenie membrany. Przechowywanie i Data przydatności Testy KRUUSE Ehrlichia Quick muszą być przechowywane w temperaturze pokojowej (2°C do 30°C). OSTRZEŻENIA • • • • • • • • • • • • Wyłącznie do użytku weterynaryjnego i profesjonalnego Do jednorazowego użytku Użyć kasetkę w przeciągu 10 minut od otwarcia torebki Należy podać właściwą ilość próbki Nie podawać roztworu próbki na pole reakcyjne Unikać reakcji krzyżowych stosując nową probówkę dla każdej próbki Nie dotykać pola reakcyjnego Stosować wyłącznie oryginalny bufor, dostarczany wraz z zestawem Materiał próbki może być zakaźny. Zachować ostrożność przy utylizacji Nie używać kasetek po upływie daty przydatności Nie używać testu z uszkodzonym opakowaniem Po upływie wskazanego czasu odczytu traktować wyniki jako nieważne Reagenty, Materiały, Instrumenty I. Zawartość: • 5 kasetek testowych z pipetą i woreczkiem osuszającym • 5 probówek testowych • 1 buteleczka 2.5 ml odczynnika buforującego • 1 instrukcja obsługi II. Dodatkowy niezbędny sprzęt • Timer Kasetka testowa Pasek testowy znajduje się wewnątrz plastikowej obudowy. Z prawej strony umieszczone jest oczko wlewu próbki. Pole reakcyjne znajduje się pośrodku kasetki testowej. W polu reakcyjnym znajduje się obszar testowy i obszar kontrolny. Oznakowanie obok pola reakcyjnego wskazuje odpowiednio obydwa te obszary – kontrolny (C) i testowy (T). Oczko wlewu próbki krwi Obszar testowy i kontrolny pola reakcyjnego Przygotowanie próbki KRUUSE Ehrlichia Quick służy do badania krwi pełnej, surowicy, lub osocza. OSTROŻNIE: Próbki i inne materiały należy traktować jako materiały zakaźne Ogólne zalecenia odnośnie próbek krwi: • • • • Dla uniknięcia hemolizy oddzielić surowicę, lub osocze z krwi najszybciej jak jest to możliwe Krew heparynizowaną lub EDTA można stosować do oddzielenia osocza Stosować wyłącznie próbki czyste, nie zhemolizowane Stosowanie krwi pełnej może zmniejszyć czułość wyniku testu Wyjaśnienie procesu przeprowadzania testu Szybki test KRUUSE Ehrlichia Quick jest testem immunologicznym typu Sandwich służącym do profesjonalnych zastosowań weterynaryjnych. Do znakowania stosuje się przeciwciała swoiste przechwytujące przeciwciała Ehrlichia canis z próbki krwi i w ten sposób wizualizujące czynnik. KRUUSE Ehrlichia Quick jest bardzo czułym testem immunologicznym w poręcznej kasetce testowej, zawierającej membranę. Test KRUUSE Ehrlichia Quick składa się z podłoża próbki, podłoża koniugacyjnego zawierającego znakowane złotem antygeny swoiste dla Ehrlichia canis, membrany pokrytej na obszarze linii testowej unieruchomionymi antygenami przechwytującymi swoistymi dla Ehrlichia canis oraz przeciwciałami kontrolnymi unieruchomionymi na obszarze linii kontrolnej, i ostatecznie z podłoża adsorpcyjnego odbierającego płyn doprowadzony do kasetki testowej. Po wprowadzeniu na pasek testowy, przeciwciała Ehrlichia canis z próbki reagują z oznakowanymi złotem antygenami w podłożu koniugacyjnym. Następnie płyn migruje w górę paska na zasadzie podciągania kapilarnego. W rejonie linii testowej oznakowane złotem kompleksy immunologiczne Ehrlichia canis są przechwytywane przez nieruchome reagenty przechwytujące, tworząc w ten sposób czerwoną linię. www.kruuse.com Test powinien być wykonany natychmiast po pobraniu próbki. Nie pozostawiać przez dłuży czas próbek w temperaturze pokojowej. Próbki surowicy, lub osocza można przechowywać w 2-8° C do 3-ch dni. Dla długoterminowego przechowywania próbki należy trzymać poniżej -20°C. Próbki krwi pełnej pobrane przez wkłucie dożylne należy przechowywać w temperaturze 2-8°C, jeżeli test ma być wykonany w przeciągu 2 dni od pobrania. Nie zamrażać próbek krwi pełnej. Przed wykonaniem testu doprowadzić próbki do temperatury pokojowej. Próbki zamrożone muszą kompletnie odtajać i przed wykonaniem testu muszą być dokładnie wymieszane. Próbek nie wolno wielokrotnie zamrażać i odmrażać. Próbki przeznaczone do wysyłki muszą być pakowane zgodnie z obowiązującymi przepisami dotyczącymi przewozu czynników etiologicznych. labsolutions Procedura testowa dla surowicy i osocza 1. Pobrać próbkę krwi i przygotować próbkę surowicy, lub osocza. Otworzyć torebkę; wyjąć pipetę i pobrać nią próbkę materiału. Wprowadzić pipetą do oczka wlewu próbki jedną kroplę surowicy, lub osocza. Odczekać kilka sekund, aż próbka całkowicie się wchłonie. 2. Otworzyć bufor i dodać do oczka wlewu 2 krople bufora. Wynik ujemny: Test jest ujemny, gdy w polu reakcyjnym widoczna jest jedynie linia kontrolna (C). W próbce materiału nie wykryto przeciwciał Ehrlichia canis. Jeżeli po upływie 1,5 minuty płyn niezbyt dobrze migruje w górę paska, dodać do oczka wlewu kolejną kroplę bufora. 3. Odczytać wyniki w ciągu 5-10 minut od rozpoczęcia testu. 1. 2. Procedura testowa dla krwi pełnej 1. Pobrać próbkę krwi. Otworzyć torebkę; wyjąć pipetę, pobrać nią próbkę materiału oraz wprowadzić pipetą do probówki jedną kroplę krwi. Otworzyć bufor i dodać do probówki 3 krople bufora. 2. Zamknąć probówkę i łagodnie nią wstrząsnąć. Otworzyć ponownie probówkę i pobrać pipetą materiał próbki. Powoli wprowadzić pipetą 2 krople materiału do oczka wlewu próbki (wprowadzić do oczka pierwszą kroplę, odczekać kilka sekund, aż się ona wchłonie i wtedy dodać drugą kroplę). Jeżeli po upływie 1,5 minuty płyn nie przemieszcza się dobrze w górę paska, dodać do oczka wlewu kolejną kroplę bufora. 3. Odczytać wyniki w ciągu 5-10 minut od rozpoczęcia testu. Wynik nieważny: Test jest nieważny, gdy po jego wykonaniu nie widać linii kontrolnej. Oznacza to, że test mógł nie być poprawnie przeprowadzony, test mógł być przeterminowany, lub też, że po otwarciu torebki test był zbyt długo wyeksponowany na działanie zewnętrznego powietrza. Jeżeli to nastąpi, test należy wykonać ponownie. UWAGA: Wynik testu musi być odczytany w przeciągu 10 minut od rozpoczęcia testu. Po tym czasie test, oraz wyniki testu należy traktować jako nieważne. Uwagi: Wynik testu należy zawsze oceniać łącznie z odpowiedzią anamnestyczną i w kontekście klinicznym. Wyniki testów uzyskane z próbek krwi pełnej i nie korelujące z obrazem klinicznym, należy powtórzyć z próbką osocza, lub surowicy. Wszystkie wątpliwe wyniki testów należy powtórzyć po ok. 4 tygodniach. Utylizacja Zalecana jest bezpieczna utylizacja. Materiał próbek oraz kasetki powinny zostać zebrane do szczelnego plastikowego woreczka. Charakterystyka sprawności testu Przeciwciała Ehrlichia canis IFAT Ujemny Dodatni Ogółem KRUUSE Ehrlichia Ujemny Quick Dodatni 48 1 49 3 20 23 Ogółem 51 21 72 1. Czułość: 94,12% Specyficzność: 95,24% Literatura 2. Ocena testu Wynik testu można odczytać 5-10 minut od jego rozpoczęcia. Uwaga: Wykrycie przeciwciał w materiale próbki nie jest możliwe przed upływem 3-4 tygodni od zakażenia. Selbitz HJ Truyen U (2011): 16.3.4.Gattung Ehrlichia in: Mayr A., M. Rolle (Hrsg.): Medizinische Mikrobiologie, Infektions- und Seuchenlehre. Enke Verlag, Stuttgart, 9. Auflage. Bauer C,Brahm R, Daugschies A, Kietzmann M, Kohn B, Moritz A, Schnieder T, Wendland B (2011): Empfehlung zur Bekämpfung von durch Vektoren übertragenen Krankheiten bei Hunden und Katzen. Kleintierpraxis 56 (7): 373-385 Naucke T J, Lorentz S, Menn B, Mencke N (2011); Prävalenz von durch Ektoparasiten übertragenen Infektionskrankheiten (CVBDs) bei Import- und Reisebegleitenden Hunden in Deutschland und Prävention von CVBDs. Tieräztliche Umschau 66: 311-317 Stosowane symbole Używać tylko jeden raz Wynik dodatni: Test jest dodatni, gdy w polu reakcyjnym widoczna jest linia kontrolna (C) oraz linia testowa (T ). W próbce badanego materiału wykryte zostały przeciwciała przeciwko antygenom Ehrlichia canis. Pojawienie się bladej linii ciągle świadczy o dodatnim wyniku testu. Nasycenie koloru czerwonego w obszarze testowym zależy od stężenia przeciwciał Ehrlichia canis w materiale próbki. ∑ Dokładnie zapoznać się z instrukcją obsługi Zawartość +30°C Temperatura przechowywania +4°C Numer partii Data przydatności
