Ćwiczenie 11

Ćwiczenie 3
T: Zasady doboru badań laboratoryjnych w chorobach sercowo-naczyniowych
Zagadnienia teoretyczne:
Profile badań laboratoryjnych w ocenie ryzyka choroby niedokrwiennej serca (czynniki
ryzyka miażdżycy). Profil lipidowy (cholesterol, LDL, HDL, TG); homocysteina. Profil
koagulologiczny (fibrynogen, D-Dimery, PAI-1). Profile badań laboratoryjnych w ostrych
zespołach wieńcowych (białkowe markery sercowe): markery stanu zapalnego w naczyniu
wieńcowym: cytokiny prozapalne (IL-6, alfa-TNF); markery destabilizacji blaszki
miażdżycowej (MPO); markery niestabilności/uszkodzenia blaszki miażdżycowej: markery
uszkodzenia blaszki (ciążowe białko osocza PAPP-A), białka ostrej fazy (CRP)markery
niedokrwienia/niedotlenienia (IMA, FFAu); markery martwicy kardiomiocytów - wczesne
(mioglobina, izoformy CK-MB, łańcuchy lekkie miozyny), późne (CK-MB mass, troponiny
sercowe); markery przeciążenia/dysfunkcji komór serca - peptydy natriuretyczne głównie
typu B (BNP, NT-proBNP). Badania laboratoryjne w diagnostyce nadciśnienia tętniczego
(nadciśnienie pierwotne i wtórne - różnicowanie): panel badań podstawowych (morfologia
krwi, badanie ogólne moczu, jonogram (Na, K), kreatynina, profil lipidowy, glukoza na
czczo).
Ćwiczenie praktyczne:
Oznaczanie CRP. Oznaczanie aktywność kinazy kreatynowej (CK całk., CK-MB mass).
Oznaczanie troponin.
A. Oznaczanie CRP
Aparatura i sprzęt laboratoryjny:
 spektrofotometr, probówki Eppendorf, łaźnia wodna, pipety automatyczne
Materiał badany i odczynniki:
 surowica badana
 odczynnik R.1 Diluent (BIO-BAS)
 odczynnik R.2 Lateks
 CRP-kalibrator - 55 mg/L
Wykonanie:
 doprowadzić odczynnik roboczy do 37°C, opisać probówki, odmierzyć dokładnie
odpowiednie objętości roztworów – jak podano w poniższej tabeli:
Próba
badana
Kalibrator
1
Surowica badana
Kalibrator
Odczynnik roboczy
5 L
-
-
5 L
1000 L
1000 L
Dokładnie wymieszać i odczytać natychmiast absorbancję próby badanej i kalibratora
(=540 nm) wobec wody dest. i wykonać kolejny odczyt po 2 min. od momentu
dodania próbki.
Obliczenia:
 obliczyć stężenie wapnia ze wzoru:
 - próbki
CRP [mg/L] =
∙ stężenie kalibratora
(2 - kalibratora
B. Oznaczanie aktywności kinazy kreatynowej w surowicy krwi metodą kinetyczną
(test optyczny z reakcją pomocniczą i wskaźnikową)
Aparatura i sprzęt laboratoryjny:
 spektrofotometr, probówki Eppendorf, pipety automatyczne
Materiał badany i odczynniki:
 surowica badana
 odczynnik roboczy do oznaczania CK (BioMaxima)
Wykonanie:
 do probówki odmierzyć 1 mL odczynnika roboczego, a następnie 0,04 mL surowicy
badanej
 dokładnie wymieszać, inkubować 3 minuty w temperaturze pokojowej
 po 3 minutach zmierzyć absorbancję wobec powietrza (λ=340 nm)
 powtórzyć pomiar po kolejnych 1, 2 i 3 minutach
Obliczenia:
 obliczyć średnią zmianę absorbancji na minutę (A/min)
 obliczyć aktywność CK ze wzoru:
CK [U/L] = A/min x 4127
C. Oznaczanie aktywności izoenzymu CK-MB kinazy kreatynowej metodą
kinetyczną.
Aparatura i sprzęt laboratoryjny:
 spektrofotometr SPECOL 11
2
 probówki Eppendorf
 pipety automatyczne o pojemności 1 cm3, 0,1 cm3
Materiał badany i odczynniki:
 surowica badana
 odczynnik roboczy do oznaczania CK-MB (BioMaxima)
Wykonanie:
 do probówki odmierzyć 1 mL odczynnika roboczego, a następnie 0,04 mL surowicy
badanej
 dokładnie wymieszać, inkubować 3 minuty w temperaturze pokojowej
 po 3 minutach zmierzyć absorbancję wobec powietrza (λ=340 nm)
 powtórzyć pomiar po kolejnych 1, 2 i 3 minutach
Obliczenia:
 obliczyć średnią zmianę absorbancji na minutę (A/min)
 obliczyć aktywność CK-MB ze wzoru:
CK [U/L] = A/min ∙ 8254
D. Oznaczanie troponin
Materiał badany i odczynniki:
 surowica badana
 test gabControl Troponina I (gabmed)
Wykonanie:
 wyjąć kasetkę testową z torebki
 przy użyciu jednorazowego zakraplacza pobrać próbkę aż do kreski Fill Line (ok. 80
µl) i dodać pobrana próbkę do otworu (S) w kasetce
 odczytać wynik w 15 minucie
3