Powłoki skórne = skóra + tkanka podskórna + twory skórne (gruczoły, włosy, paznokcie) Funkcje: • ochronna • termoregulacja • gospodarka wodno-jonowa • funkcja zmysłowa • synteza witaminy D Powłoki skórne n sw Warstwy skóry: • naskórek (nabłonek) • skóra właściwa (tkanka łączna wiotka + włóknista) -------------------------------------------• tkanka podskórna = tkanka tłuszczowa + tkanka łączna wiotka Naskórek to nabłonek wielowarstwowy płaski rogowaciejący tp Keratynocyty w naskórku układają się w warstwy w. zrogowaciała w. jasna w. ziarnista w. kolczysta 3 1 w. podstawna Komórki naskórka: 1. keratynocyty (90%) 2. melanocyty 3. komórki Langerhansa 4. komórki Merkla Proces rogowacenia obejmuje: • stopniową zmianę kształtu komórek (walcowate → wielokątne → płaskie) 2 4 Główna populacja komórek, keratynocyty, migrują od podstawy naskórka do jego powierzchni, przekształcając się po drodze w martwe płytki keratynowe (rogowacenie). Ten proces jest skoordynowany, co prowadzi do wyodrębnienia się w naskórku warstw odpowiadających kolejnym etapom rogowacenia. Warstwa podstawna • zawiera komórki macierzyste zdolne do podziałów i różnicowania • produkcja czynników wzrostu (EGF) i cytokin, synteza witaminy D3 • łączy się z grubą błoną podstawną • gromadzenie w cytoplazmie filamentów pośrednich (cytokeratynowych) • modyfikację błony komórkowej • nietypową apoptozę (bez rozpadu komórek na ciałka apoptotyczne) • eliminację jądra i organelli Warstwa kolczysta • wypustki keratynocytów połączone desmosomami • wzrost liczby filamentów pośrednich • produkcja inwolukryny • produkcja cytokin i czynników wzrostu, synteza witaminy D3 1 Warstwa ziarnista • ziarna F (keratohialinowe) – filagryna • ziarna L – lorykryna • keratynosomy (ciałka blaszkowate) – lipidy wydzielane do przestrzeni miedzykomórkowej Warstwa zrogowaciała: martwe, sztywne płytki (korneocyty) wypełnione pęczkami filamentów pośrednich i otoczone tzw. otoczką zrogowaciałą (błona komórkowa + podbłonowa warstwa białek) • wczesne cechy apoptozy • warstwa zwarta • warstwa złuszczająca się Warstwa jasna • keratynocyty obumierają • zanikają jądra i organelle • pozostaje cytoplazma z licznymi pęczkami filamentów pośrednich połączonych filagryną i z pogrubiałą błoną komórkową • odporna mechanicznie • nieprzepuszczalna dla wody (przestrzenie miedzykomórkowe uszczelnione lipidami z keratynosomów) Melanocyty Komórki Langerhansa • zlokalizowane w warstwie kolczystej • długie „dendrytyczne” wypustki • ziarna Birbecka • pochodzenie szpikowe • należą do komórek prezentujących antygen (są to „młode” komórki dendrytyczne) • pochodzenie z neuroektodermy • zlokalizowane w warstwie podstawnej • syntetyzują melaninę w melanosomach (ziarnach melaniny) • przekazują ziarna melaniny keratynocytom warstwy kolczystej • melanina chroni żywe komórki naskórka przed szkodliwym wpływem UV Komórki Merkla • zlokalizowane w warstwie podstawnej • w cytoplazmie drobne ziarenka zawierające neuropeptydy • kontaktują się z zakończeniami nerwowymi • są mechanoreceptorami Skóra właściwa: • warstwa brodawkowa - tkanka łączna wiotka, liczne komórki - pętle kapilarów, włókna nerwowe i mechanoreceptory - szeregi brodawek tworzą listewki skórne • warstwa siateczkowa - tkanka łączna włóknista bogata w włókna sprężyste - zawiera gruczoły i/lub ich przewody, korzenie włosów, mechanoreceptory, włókna nerwowe i naczynia splot podbrodawkowy splot skórny 2 Włosy naskórek skóra właściwa tkanka podskórna Tkanka podskórna: - tkanka tłuszczowa i tkanka łączna wiotka - zawiera gruczoły, korzenie włosów, naczynia, mechanoreceptory Struktury związane z korzeniami włosów: • gruczoły łojowe • gruczoły zapachowe • mięśnie wyprostne Włosy i gruczoły rozwijają się z wpukleń naskórka w skórę właściwą i tkankę podskórną, są tworami nabłonkowymi W trakcie wzrostu włos ulega rogowaceniu Korzeń włosa Cebulka włosa (dolna część korzenia) - łącznotkankowa brodawka włosa z kapilarami, otoczona przez - macierz (komórki namnażające się: keratynocyty, melanocyty) mięsień wyprostny macierz Włos właściwy (rogowacieje, keratyna twarda) - rdzeń - kora - powłoczka Pochewka wewnętrzna (rogowacieje, keratyna miękka) - powłoczka - warstwa Henlego - warstwa Huxleya Pochewka zewnętrzna (wpuklenie naskórka, nie rogowacieje); pochewki tworzą mieszek włosa część część Torebka włosa (tkanka łączna) zrogowaciała niezrogowaciała brodawka Cykl (życiowy) włosa Mięsień wyprostny włosa • pęczek komórek mięśniowych gładkich • przytwierdzony do torebki włosa i do górnej warstwy skóry właściwej • unerwienie autonomiczne • skurcz powoduje wyprostowanie włosa („gęsia skórka”) oraz wyciśnięcie wydzieliny gruczołów łojowych m. wyprostny Anagen: faza wzrostu włosa (4 miesiące – 6 lat) Katagen: faza inwolucji – cebulka włosa traci kontakt z brodawką, włos przestaje rosnąć i obumiera Telogen: faza spoczynkowa – formuje się nowa brodawka włosa, indukując wytworzenie się nowej cebulki Anagen: nowy włos rośnie, stary wypada 3 Gruczoły skóry Ekrynowy gruczoł potowy (cewkowy prosty) • ekrynowe gruczoły potowe • apokrynowe gruczoły potowe • gruczoły łojowe • gruczoły mlekowe gruczoł łojowy Odcinek wydzielniczy: • kłębkowato zwinięty, na granicy skóry właściwej i tkanki podskórnej • walcowate komórki wydzielnicze (jasne i ciemne) • komórki mioepitelialne • blaszka podstawna Komórki jasne: transport jonów Komórki ciemne: produkcja białek ekrynowy gruczoł potowy apokrynowy gruczoł potowy Ekrynowy (merokrynowy) sposób wydzielania (= egzocytoza) Wydzielina: woda, jony (Na, K, Cl), niewielka ilość białek (glikoproteidów), śladowe ilości mocznika, kwasu moczowego, amoniaku Apokrynowy gruczoł potowy Przewód wyprowadzający: • nabłonek dwuwarstwowy sześcienny • wąskie światło • częściowa resorbcja jonów Na+, K+, Cl• wydzielanie związków azotowych (morfologicznie podobny do ekrynowego gruczołu potowego, ale większy i o większej średnicy) • odcinek wydzielniczy: - walcowate/sześcienne komórki wydzielnicze, ekrynowy + apokrynowy sposób wydzielania - komórki mioepitelialne - blaszka podstawna Ujście: spiralny kanał w naskórku • przewód: nabłonek dwu/trójwarstwowy sześcienny, połączony z mieszkiem włosa Wydzielina: woda, kwasy tłuszczowe, lipidy, cukry, białka (u zwierząt feromony) korzeń włosa przewód wydzielina nieotoczona błoną wydzielanie apokrynowe Gruczoł łojowy (pęcherzykowy rozgałęziony) • odcinek wydzielniczy: wielowarstwowy układ komórek produkujących wydzielinę (lipidy), a następnie degenerujących i rozpadających się (holokrynowy sposób wydzielania), otoczony blaszką podstawną • krótki przewód (nabłonek wielowarstwowy płaski) połączony z mieszkiem włosa Wydzielina: lipidy i szczątki komórek komórki degenerujące komórki dzielące się 4 Unerwienie skóry receptory zmysłowe skóry: - wolne zakończenia nerwowe Wolne zakończenia nerwowe - ciałka zmysłowe Lokalizacja: naskórek (żywe warstwy), skóra właściwa, wokół korzeni włosów Wrażliwe na: dotyk, ucisk, ból, temperaturę Ciałko Merkla (komórka Merkla + zakończenie) nerwowe) Lokalizacja: naskórek Wrażliwe na: delikatny dotyk, różnicowanie tępy/ostry, gładki/szorstki (np. odczyt alfabetu Brailla) Ciałko Meissnera (zakończenia nerwowe otoczone przez lemnocyty - zmodyfikowane komórki Schwanna, całość objęta łącznotkankową torebką) Lokalizacja: brodawki skórne Wrażliwe na: dotyk, przesuwanie naskórka względem skóry Ciałko Paciniego (zakończenie nerwowe otoczone wieloma koncentrycznymi warstwami spłaszczonych lemnocytów i fibroblastów, pomiędzy nimi płyn) Lokalizacja: tkanka podskórna, również torebki stawowe, okostna, krezka, niektóre narządy Kolbka Krausego (zakończenia nerwowe otoczone łącznotkankową torebką) Lokalizacja: skóra właściwa (szczególnie liczne w narządach płciowych), niektóre błony śluzowe, spojówki Wrażliwa na: dotyk Ciałko Ruffiniego (zakończenia nerwowe otoczone łącznotkankową torebką) Lokalizacja: skóra właściwa, torebki stawowe, ozębna Wrażliwe na: rozciąganie Wrażliwe na: ucisk, drgania o wysokiej częstotliwości Typy skóry TECHNIKI SPECJALNE Skóra dłoni i stóp („gruba”): • gruby naskórek z wyraźnymi warstwami • gruba warstwa zrogowaciała naskórka • wysokie, regularne brodawki, wyraźne listewki • obecne tylko gruczoły potowe • brak korzeni włosów i związanych z nimi struktur Skóra powłok („cienka”): • cienki naskórek z niewyraźnymi warstwami • brak wyraźnej warstwy jasnej i niekiedy ziarnistej • cienka warstwa zrogowaciała naskórka • niższe i mniej regularne brodawki • obecne wszystkie typy gruczołów skóry • obecne korzenie włosów i struktury z nimi związane • znakowanie lektynami • hybrydyzacja in situ • genetyczne znakowanie białkami fluoryzującymi • autoradiografia 5 Wykrywanie reszt cukrowcowych przy użyciu lektyn Lektyny - glikoproteidy izolowane z roślin i niektórych bezkręgowców - swoiście wiążą się z konkretnymi resztami cukrowcowymi Uwidocznienie lektyn: • bezpośrednie znakowanie lektyny (np. fluorochromem) • immunohistochemiczne wykrycie lektyny • zastosowanie reakcji awidyna-biotyna (biotynylowane lektyny) REAKCJA Z LEKTYNĄ: substancja wykrywana (reszta cukrowcowa) + znakowana lektyna = KOMPLEKS HYBRYDOCYTOCHEMIA (hybrydyzacja in situ) wykrywa odcinki DNA lub RNA o określonej sekwencji nukleotydów Sonda: odcinek DNA lub RNA o komplementarnej sekwencji nukleotydów w stosunku do wykrywanego in situ fragmentu DNA lub RNA Rodzaje sond: • sondy DNA • sondy RNA Sondy znakuje się • znacznikami antygenowymi (+ reakcja immunohistochemiczna) • biotyną (+ reakcja z awidyną) • izotopami promieniotwórczymi (+ autoradiografia) Reakcja hybrydocytochemiczna: substancja wykrywana (sekwencja w DNA, RNA) + swoista znakowana sonda DNA, RNA = KOMPLEKS. Etapy hybrydyzacji in situ: 1. Permeabilizacja błon komórkowych (enzymy proteolityczne, detergenty) 2. Denaturacja kwasów nukleinowych w preparacie 3. Hybrydyzacja Zastosowanie hybrydyzacji in situ • lokalizacja genów • badanie ekspresji genów (wykrywanie określonego mRNA) • wykrywanie obcego materiału genetycznego (np. wirusa) w komórkach 6 Powielany odcinek DNA Genetyczne znakowanie białek białkami fluoryzującymi umożliwia ich obserwację w żywych komórkach (mikroskopia w czasie rzeczywistym) Denaturacja DNA Zwiększenie ilości wykrywanych odcinków kwasów nukleinowych (wzmocnienie reakcji): PCR in situ I cykl: Dołączenie „startera” Białka fluoryzujące – np. GFP (green fluorescent protein, białko o zielonej fluorescencji) 2 odc. PCR = łańcuchowa reakcja polimerazy (wielokrotne powielenie określonych odcinków DNA II cykl: lub RNA) 4 odc. Polimeraza syntetyzuje odcinek komplementarny III cykl: 8 odc. AUTORADIOGRAFIA wykrywa w preparacie izotopy promieniotwórcze, wykorzystując wrażliwość emulsji światłoczułej (fotograficznej) na promieniowanie beta • przyłączenie genu GFP do genu kodującego wykrywane białko (metodami inżynierii genetycznej) • komórka syntetyzuje białko z przyłączonym GFP (białko fuzyjne) • białko fuzyjne zachowuje się w komórce tak jak białko bez znacznika • przemieszczanie się białka fuzyjnego w żywej komórce można obserwować przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego Stosowane izotopy: 3H, 14C, 35S, 125I, 32P Substancje znakowane izotopami wprowadzamy do żywych komórek i tkanek, albo stosujemy jako odczynniki (np. sondy) Etapy autoradiografii • wykonanie preparatu mikroskopowego • nałożenie emulsji (w ciemni) • ekspozycja (w ciemni) • wywołanie i utrwalenie autoradiogramu • zabarwienie preparatu Zdolność rozdzielcza Tło 7