redukcja błękitu nitrotetrazoliowego

Ćwiczenie 1A.
ĆWICZENIE 1A .
Odczyt wykonanych badań:
Dr n.med. Iwona Wojciechowska Koszko
1. Poziom składowych dopełniacza
Składowa
C3
C4
C1q inhi.
Wartość w mm.
Temat:
Stężenie
Interpretacja
Zakres stężeń głównych składników dopełniacza w surowicy
Składowa
Zakres stężeń
C1q
11-21 mg/dl
C3
80-180 mg/dl
C4
15-40 mg/dl
C5
7-17 mg/dl
PROPERDYNA
1,0-2,0 mg/dl
CZYNNIK B
17,5-27,5 mg/dl
Odpowiedź nieswoista – ocena procesu fagocytozy i układu
dopełniacza.
Praktyczne wykonanie:
1.Ocena ilościowa składowych dopełniacza wg Manciniego
(immunodyfuzja radialna)
2.Test fagocytozy neutrofilów i NBT wg Parkera i wsp. (redukcja
błękitu nitrotetrazoliowego)
Wstęp:
Immunodyfuzja radialna wg Manciniego
Pojedyncza immunodyfuzja radialna wg Manciniego służy do oznaczania ilościowego
rozpuszczalnych antygenów takich jak: immunoglobuliny, składowe dopełniacza i inne białka w
surowicy lub płynach ustrojowych. W metodzie tej stosuje się żel agarozowy zawierający określenie
stężenie przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciw określonemu antygenowi. W żelu
wycina się dołki, do których dodaje się surowicę pacjenta zawierającą poszukiwany antygen
(białko). W trakcie inkubacji w temp. pokojowej antygeny dyfundują w żelu tworząc z zawartymi w
żelu swoistymi przeciwciałami, kompleksy immunologiczne. W strefie równowagi (ekwiwalencji)
powstają nierozpuszczalne kompleksy, które uwidaczniają się w postaci pierścienia
precypitacyjnego. Średnica pierścienia jest wprost proporcjonalna do stężenia białka – antygenu w
badanej surowicy .
Interpretacja testu: Obniżenie w surowicy stężenia składowych dopełniacza - C3,C4, C5 możemy
obserwować w przebiegu chorób o podłożu autoimmunizacyjnym oraz w przebiegu chorób
nowotworowych. Podwyższenie poziomu składowych występuje w przebiegu ostrego i przewlekłego
zakażenia, chorób zapalnych oraz fizjologicznie w przebiegu ciąży.
Krótka interpretacja:
2. Fagocytoza
Procent komórek fagocytujących:
Indeks fagocytarny:
NBT spontaniczne:
NBT wzbudzone:
Test fagocytarny
Służy do oceny etapu pochłaniania przez neutrofile w warunkach - in vitro zabitych komórek
bakteryjnych - S. aureus, grzybiczych – C.albicans lub cząstek mineralnych – lateks.
Interpretacja testuWartości podwyższone występują w ostrych zakażeniach bakteryjnych, zaś
obniżone w niedoborach układu fagocytarnego lub przewlekłych zakażeniach bakteryjnych.
Krótka interpretacja:
Zaliczenie ćwiczeń
Data
Ocena
Podpis
Test redukcji NBT
W trakcie fagocytozy dochodzi do wzrostu aktywności metabolicznej związanej z konsumpcją tlenu
w obrębie komórki neutrofilowej (aktywacja mechanizmu zabijania zależnego od tlenu). W
przebiegu tego proces wzrasta poziom nukleotydów NADPH, które pod wpływem oksydazy NADPH
zostają zredukowane do anionu nadtlenkowego, kationu wodorowego oraz kationu NADP. Oksydaza
NADPH ma również zdolność do redukcji pochłoniętego przez neutrofile barwnika – błękitu
nitrotetazaliowego - NBT do formazanu. Kryształki formazanowe odkładają się w cytoplazmie
komórek fagocytujących w postaci ciemnoniebieskich złogów.
Interpretacja testu: Wartości niższe od normy lub ujemne mogą świadczyć o przewlekłej chorobie
ziarniniakowej, wrodzonej agammaglobulinemii, SLE i występują u pacjentów leczonych
kortykosteroidami. Wartości wyższe od normy mogą wystąpić w przebiegu zakażeń bakteryjnych tj:
S. pneumoniae, H. influenzae, N. meningitidis, E.coli i C.albicans. W przebiegu zakażeń wirusowych
odsetek komórek dodatnich może pozostać w normie.