Konstruowanie drzew filogenetycznych Magda Mielczarek Katedra Genetyki Uniwersytet Przyrodniczy we Wrocławiu Drzewa filogenetyczne • • • • ukorzenione i nieukorzenione binarność konstrukcji topologia (sposób rozgałęziana się drzewa) długość gałęzi, a czas ewolucji Drzewo ukorzenione korzeń gałąź Drzewo nieukorzenione A C węzeł liść A B C D B D Metody konstrukcji drzew Oparte na odległościach pomiędzy sekwencjami Konwertowanie znaków na odległości ewolucyjne Metody odległościowe Oparte bezpośrednio na znakach sekwencji Zliczanie mutacji zgromadzonych w sekwencjach Metody oparte na znakach Metody konstrukcji drzew Metoda średnich połączeń (Unweighted pair group method with arithemtic mean, UPGMA) Metoda przyłączania sąsiadów (Neighbor- joining, NJ) Metody odległościowe Metoda parsymonii (Parsimony) Metoda największej wiarygodności (Maximum likelihood) Metody oparte na znakach i inne… Metoda średnich połączeń • • • • najprostsza z metod algorytm analizy skupisk, redukcja macierzy odległości drzewa ukorzenione ograniczenie – hipoteza zegara molekularnego Metody odległościowe Metoda przyłączania sąsiadów • algorytm analizy skupisk • pary sekwencji o najmniejszej odległości = sąsiedzi • drzewa nieukorzenione • dopuszczenie założenia różnej szybkości ewolucji Metody odległościowe Oprogramowanie - PHYLIP http://mobyle.pasteur.fr/cgi-bin/portal.py?form=neighbor Metoda parsymonii EWOLUCJA PRZEBIEGA NAJKRÓTSZĄ Z MOŻLIWYCH DRÓG! • • • • • stworzenie wszystkich możliwych topologii i wybór tej, która zakłada najmniejszą liczbę mutacji uwzględnienie tempa ewolucji różnych rodzajów mutacji wykorzystanie pozycji informatywnych drzewa nieukorzenione przyciąganie się długich gałęzi Metody oparte na znakach Oprogramowanie - PAUP PAUP – www.paup.csit.fsu.edu/ Metoda największej wiarygodności • wybór hipotezy oparty na wartościach o największym prawdopodobieństwie • wyszukanie każdej możliwej topologii i uwzględnienie każdej pozycji w przyrównaniu • wykorzystanie informacji zawartej w całej sekwencji, a nie tylko w pozycjach informatywnych • wykorzystanie modeli sybstytucyjnych • brak efektu przyciągania długich gałęzi • czasochłonna Metody oparte na znakach Oprogramowanie - Treefinder www.treefinder.de Oprogramowanie - PHYLIP PHYLIP - www.phylip.com/ Oprogramowanie - MEGA MEGA - www.megasoftware.net/ Tworzenie drzewa – instrukcja krok po kroku • Wybór i zgromadzenie sekwencji do budowy drzewa • Przyrównanie sekwencji (alignment) • Konstrukcja drzewa za pomocą jednej z kilku metod • Przedstawienie drzewa w formie odpowiedniej dla odbiorców Wybór sekwencji Wybór sekwencji Zależny od problemu! • Filogeneza konkretnych organizmów (wybór dowolnego genu) • Ewolucja konkretnego genu (sekwencje pochodzące od wielu gatunków) • Wybór markera - ewolucja ani zbyt szybka, ani zbyt powolna, regiony zmienne, regiony konserwatywne ? Shields F.G. 2000. Phylogeny of mitochondrial DNA variation in brown bears and polar bears. Molecular Phylogenetics and Evolution 15:319-326. Sekwencje homologiczne Homoplazja Homologia ortologi (specjacja) paralogi (duplikacja) Basic Local Alignment Search Tool Sekwencje nuklotydowe – format FASTA Format zapisu : FASTA, EMBL, NEXUS, CGC, NBRF, itd… Nastąpiła konieczność zmiany nazwy w nagłówku każdej z sekwencji napiszmy program! Nowy identyfikator sekwencji Przyrównanie sekwencji (alignment) Przyrównanie – seaview, clustal Przyrównane sekwencje Stwierdzone różnice między sekwencjami świadczą o mutacjach, które zaszły po rozdzieleniu się sekwencji od wspólnego przodka Tworzenie drzewa na przykładzie programu Treefinder Tworzymy drzewo filogenetyczne! Ćwiczenia Wykonywane wspólnie • Bioedit (www.mbio.ncsu.edu/bioedit/bioedit.html) • Treefinder (www.treefinder.de) Wykonywane samodzielnie • Lista zadań PB_5 Literatura: Książki: Hall G.B. 2008. Łatwe drzewa filogenetyczne. Poradnik użytkownika. Wydawnictwa Uniwersytetu Warszawskiego. Warszawa Higgs P. , Attwood T. K. 2011. Bioinformatyka i ewolucja molekularna. Wydawnictwo Naukowe PWN. Warszawa Xiong J. 2006. Podstawy bioinformatyki. Wydawnictwa Uniwersytetu Warszawskiego. Warszawa Artykuły: Rogalla D., Rogalla M. 2007. Konstrukcja drzew filogenetycznych – podstawy teoretyczne. Shields F.G. 2000. Phylogeny of mitochondrial DNA variation in brown bears and polar bears. Molecular Phylogenetics and Evolution 15:319-326