Mikrobiologia, zdrowie i higiena zwierząt przeznaczonych lub wykorzystywanych w procedurach. Zasady bezpieczeństwa pracy ze zwierzętami. Mgr inż. Katarzyna Guła Dr hab. Krzysztof Pyrć prof. UJ Dobrostan Współcześnie tworzone definicje dobrostanu, oparte są na podstawowych 5 wolnościach Kodeksu Rady Europy i Komitetu dobrostanu Zwierząt: • wolne od głodu i pragnienia, •dyskomfortu, bólu, •urazów i chorób, •strachu i stresu, •wolne w wyrażaniu normalnego behawioru Dobrostan Stan zdrowia psychicznego i fizycznego spełniany w warunkach harmonii ustroju ze środowiskiem (Hughes, 1989) ● Zespół warunków pokrywających potrzeby biologiczne ustroju umożliwiające ujawnienie pełni możliwości genetycznych (Sainsbury, 1984) ● Stan ustroju, w którym zwierzę daje sobie radę z niekorzystnymi warunkami środowiskowymi ● (Broom i Johnson, 2000) Dobrostan Status zwierzęcia i jakość jego bytu, na który składa się zaspokojenie wszystkich potrzeb, nie tylko w zakresie pokarmowym, dobrej opieki zdrowotnej, odpowiednich pomieszczeń hodowlanych, lecz i jego wymagań wynikających z potrzeb psychicznych, objawiających się właściwym, charakterystycznym dla danego gatunku behawiorem (Kołacz, 1999) ● Jakie zwierzęta wybrać? Rosnące wymagania dotyczące laboratoryjnych używanych w doświadczalnych ● zwierząt badaniach Zasady GLP (Good Laboratory Practice), do których powinniśmy zacząć się stosować chcąc aby nasze wyniki badań były uznawane w świecie ● polskie przepisy prawne - doprowadziły do konieczności podjęcia zdecydowanych działań w kierunku ujednolicenia i poprawy jakości genetycznej i zdrowotnej hodowanych w Polsce zwierząt laboratoryjnych ● Jakie zwierzęta wybrać? • do badań i testów należy używać zwierząt pochodzących z uprawnionych hodowli (Rozdział 4 ustawy z dnia 15 stycznia 2015 r. o ochronie zwierząt wykorzystywanych do celów naukowych lub edukacyjnych) • zgodnie z wymaganiami międzynarodowymi doświadczenia o charakterze biomedycznym powinny być wykonywane na zwierzętach kategorii SPF (Specified Pathogen Free). Jakie zwierzęta wybrać? Zwierzęta laboratoryjne nie tylko te, u których występują łatwo wykrywalne objawy choroby ale również bezobjawowi nosiciele zakażeń patogennych, według współcześnie obowiązujących zasad nie nadają się do doświadczeń, szczególnie do doświadczeń biomedycznych. Bezobjawowe zakażenia mikroorganizmami chorobotwórczymi mogą znacznie skomplikować interpretację wyników badań lub je wręcz zafałszować. Jakie zwierzęta wybrać? Mając na celu wyeliminowanie takich zagrożeń opracowano w latach pięćdziesiątych przy współudziale organizacji międzynarodowych •WHO - World Health Organization, •FAO - Food and Agriculture Organization, •ILAR - Institute for Laboratory Animal Resources, •ICLAS - International Council for Laboratory Animal Science) następującą kategoryzację zwierząt laboratoryjnych: Status higieniczny zwierząt ● Konwencjonalne (CV) ● SPF ● Gnotobiotyczne Zwierzęta konwencjonalne ● Nieokreślony status higieniczny Hodowle bez zabezpieczeń antybakteryjnych, bez bariery sanitarnej ● ● Tylko podstawowe zasady higieny i czystości ● Okresowa dezynfekcja pomieszczeń Standardowa izolacja budynku zwierzętarni od zewnętrznych czynników zakaźnych ● Zwierzęta konwencjonalne Zapłodnienie i poród odbywa się w sposób naturalny ● Zwierzęta są pojone i karmione dostępnymi na rynku standardowymi paszami do woli ● Wyniki doświadczeń uzyskane na takich zwierzętach są zawsze niepewne i ich wartość naukowa może być kwestionowana, często nie udaje się ich powtórzyć ani też nie mogą być poddane dyskusji i porównywane z wynikami uzyskanymi w innych ośrodkach naukowobadawczych ● Zwierzęta SPF • Termin SPF został zaproponowany i rekomendowany w 1958 r przez Institiute for Laboratory Animal Resource. • Zwierzęta SPF stanowią pewien ekosystem składający się z makroorganizmu (zwierzę) i licznych mikroogranizmów z których tylko nieliczne zostały wyeliminowane. Zwierzęta SPF Samo określenie SPF jest pustym terminem, musi mu zawsze towarzyszyć dokładny wykaz: -mikroorganizmów, od których zwierzęta są uwolnione -stosowanych metod diagnostycznych -nazwy ośrodków wykonywane w których -częstości ich wykonywania badania są Zwierzęta SPF SPF – Specific Pathogen Free ● Brak u nich specyficznej, niepożądanej mikroflory chorobotwórczej ● Wysokie standardy higieniczne hodowli (śluzy, sterylność paszy, wody, powietrza, ubioru obsługi, klatek, narzędzi ściółki) ● Zwierzęta SPF muszą być chronione przez efektywną barierę higieniczną. ● Dobre warunki higieniczne pozwalają w zamkniętych hodowlach SPF utrzymać przez wiele lat ich wysoki poziom zdrowotny. ● Zwierzęta SPF Zwierzęta SPF żyją dłużej aniżeli zwierzęta pozornie zdrowe - noszące zakażenia utajone, a ich zdolności reprodukcyjne są podwyższone. ● Czynniki odpowiedzialne za ich śmiertelność zmieniają się podobnie jak w społeczeństwie ludzkim - zwiększa się umieralność spowodowana chorobami nowotworowymi występującymi głównie u starszych zwierząt. ● Zwierzęta SPF – jak uzyskać? Zasiedlając zwierzęta początkowo GF zestawem tlenowych i beztlenowych mikroorganizmów, a następnie utrzymując je poza izolatorem w pokojach hodowlanych wyposażonych w odpowiednie bariery techniczne i higieniczne ● Stosując środki terapeutyczne lub długotrwałe utrzymywanie w kontrolowanych warunkach wyższego standardu higienicznego (za barierą) z równoczesną regularnie prowadzoną ich kontrolą mikrobiologiczną i selekcją ● Zwierzęta gnotobiotyczne Germ free (GF) - wolne od wszystkich wykrywalnych mikoorganizmów i pasożytów. Monobionty – zwierzęta GF celowo zasiedlone jednym określonym rodzajem mikroorganizów ● Dibionty - zwierzęta GF celowo zasiedlone dwoma określonymi rodzajami mikroorganizów ● Polibionty - zwierzęta GF celowo zasiedlone wieloma określonymi rodzajami mikroorganizów ● Zwierzęta gnotobiotyczne Zmiany wielkości niektórych narządów (serce, jelita) ● ● Upośledzona funkcja układu immunologicznego ● Rozród odbywa zapłodnienie się poprzez sztuczne ● Poród w sterylnych boksach przez histerektomię Pozostawienie w stanie bezbakteryjnym lub zakażenie wybranym szczepem/szczepami bakterii ● Poród przez histerektomię Zabieg wykonany w warunkach pełnej jałowości środowiska (sterylna komora laminarna) ● Przed terminem naturalnego porodu ciężarna samica zostaje: ● -poddana płytkiej narkozie ● -goli się i dezynfekuje okolice przecięcia powłok brzusznych ● -dyslokacja kręgów szyjnych ● -przecięcie powłok oraz wypreparowanie macicy wraz z płodami ● Macica do roztworu płyny dezynfekcyjnego (38 stopni) ● Przeniesienie do sterylnego pomieszczenia do hodowli GF ● Przecięcie ścian macicy, wyjecie płodów ● Noworodki karmione sztucznie lub naturalnie przez podstawioną laktującą samicę ● Monitorowanie stanu epizootycznego zwierzętarni zwierząt laboratoryjnych Dyrektywy i rekomendacje FELASA W 1989 r – powstała pierwsza grupa robocza skupiająca się na ustaleniu sposobów i procedur monitoringu stanu zdrowia gryzoni i królików ● 1994r - FELASA wydała pierwszy dokument dotyczący monitorowania stanu zdrowia zwierząt w hodowlach (dot. gryzoni) ● 1996r - FELASA wydała pierwszy dokument dotyczący monitorowania stanu zdrowia zwierząt w hodowlach (dot. królików) ● 1999r – FELASA połączenie dotychczasowych zaleceń w jeden spójny dokument ● Dyrektywy i rekomendacje FELASA ● Częstotliwość monitoringu ● Wielkość badanej grupy ● Sposób przetrzymywania zwierząt ● Metody testowania ● Sposób sporządzania raportu wyników badań ● Patogeny Zalecenia FELASA ● Kontrole – raz na kwartał ● Wielkość próbki – minimum 10 zwierząt/jednostkę Kontrole obejmują – badania serologiczne, bakteriologiczne, parazytologiczne i patomorfologiczne ● Plan kontroli – powinien uwzględniać naukowych, wydajność stosowanych środków ● profil badań Monitorowanie – powinno obejmować nie tylko populacje zwierząt używanych do doświadczeń ale także środowisko i sprowadzane do zwierzętarni produkty ● W przypadku ograniczeń finansowych kontrole powinny być przeprowadzane przynajmniej pod kątem patogenów charakterystycznych dla danego gatunku zwierząt Zalecenia FELASA ● Sentinele – w każdym pomieszczeniu Zwierzęta tego samego gatunku, co zwierzęta trzymane w danym pomieszczeniu ● Przetestowane bakteriologicznie, parazytologicznie i wirusologicznie ● Przetrzymywane na brudnej ściółce zwierząt doświadczalnych ● Piją wodę zlewaną z butelek innych zwierząt – tym samym wyeksponowane są na zakażenia ● Zalecenia FELASA ● Wprowadzone do pomieszczeń ok. 10 tyg życia Przetrzymywane w pomieszczeniu zwierzętarni przynajmniej przez 4 tyg ● ● Nie mogą zmieniać pomieszczeń Mogą być umieszczane w różnych regałach w obrębie tego samego pomieszczenia ● Są świadectwem czystości populacji danego pomieszczenia zwierzętarni ● Uśmiercane w regularnych odstępach czasowych (np. co 3 m-ce) ● Czynniki wpływające na pojawienie się infekcji System utrzymywania zwierząt (klatki konwencjonalne, izolatory, klatki IVC) ● Osłabiony układ immunologiczny zwierząt (zwierzęta GMO mogą mieć ukryte braki odpornościowe) ● Pochodzenie zwierząt ● Kwarantanna (obserwacja pod kątem MHV, Mycoplazmy, owsika, MPV, wirusa Sendai i ogólny stan zdrowia) ● Zbyt duża obsada zwierząt, niewłaściwa wentylacja, krzyżowanie szlaków czystych i brudnych ● Program kontroli zdrowotnej Kontrola pasywna ● Kontrola prewencyjna ● Ograniczona wartość diagnostyczna ● Nie daje klinicznych informacji o zakażeniu ● Obserwowanie, bez uśmiercania zwierząt ● Ograniczony zakres kontroli Obejmuje tylko sekcje zwłok (badanie zwierząt padłych), rutynowe badania kału, rutynowe badania histopatologiczne ● Program kontroli zdrowotnej Kontrola aktywna ● Kontrola przesiewowa ● Obejmuje zwierzęta żywe Regularnie badana morfologia i biochemia krwi oraz badania serologiczne ● Wyrywkowe pełne badania przesiewowe (bez czekania na upadki) ● Obejmuje używanie sentinelów do monitorowania zdrowia populacji ● Choroba zakaźna u zwierząt w zwierzętarniach Czynniki wpływające na zarządzanie walką z powstaniem choroby zakaźnej: ● Biologia patogenów ● Rodzaj prowadzonych badań naukowych ● Dostępność nowych, zdrowych zwierząt ● Stan finansowy jednostki badawczej Zwalczanie choroby zakaźnej Powstrzymanie ● wykrycie patogenu ● poznanie właściwości patogenu ● kwarantanna skażonego terenu ● wyeliminowanie krzyżowego zakażenia Zwalczanie choroby zakaźnej Potwierdzenie ● Użycie dodatkowych testów potwierdzających ● Zweryfikowanie testów nowymi badaniami Pomieszczenia sąsiadujące ze skażonym muszą być objęte szczególną ochroną ● Zwalczanie choroby zakaźnej Zwalczenie Stworzenie efektywnego i realistycznego programu wyeliminowania zakażenia ● Program powinien w jak najmniejszym stopniu wpływać niekorzystnie na program prowadzonych badań naukowych ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Eimeria falciformis – kokcydia występujące pospolicie w jelitach myszy. Oocysty wydalane są z kałem i stanowią czynnik zakaźny. ● Objawy: bieguneki, odwodnienia, utraty masy ciała, aż do wystąpienia krwawych biegunek. Zmiany anatomopatologiczne polegają na rozpulchnieniu i przekrwieniu błony śluzowej jelit oraz ich owrzodzeniu. ● Eimeria falciformis Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Klossiella muris – występuje w nerkach u myszy, zwłaszcza w komórkach nabłonkowych kanalików moczowych w postaci dużych owalnych tworów, a także w nabłonku naczyń włosowatych płuc, śledziony a niekiedy w mózgu, nadnerczach, grasicy, węzłach chłonnych i przysadce mózgowej. ● Klossiella muris Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Babesia muris, Babesia microti – pasożyty krwinek czerwonych, występujące także w wątrobie. Dla tego pasożyta myszy są żywicielem pośrednim, natomiast żywicielem ostatecznym są kleszcze. Pasożytów poszukujemy w erytrocytach, w rozmazach barwionych krwi. ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Hepatozoon muris (musculi) – występuje u myszy i szczura wątrobie i limfocytach krwi obwodowej. ● Hepatozoon micorti – znajdziemy u myszy w szpiku kostnym ● Hepatozoon muris Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Cryptosporidium muris i C. parvum – pasożyty mikrokosmkowe jelit szczurów i żołądka myszy. Wyróżniamy dwa typy oocyst Cryptosporidium: ● -cienkościenne – niewydalane z organizmu, sporulują wewnątrz organizmu żywiciela, a sporozoity kolonizują nowe powierzchnie śluzówki ● -grubościenne - wydalane są z kałem, zachowują w środowisku zewnętrznym inwazyjność przez kilka miesięcy. Odporne są na działanie wielu czynników fizykochemicznych, wrażliwe na wysychanie ● ● Rozpoznanie – rozmaz ze świeżego kału Cryptosporidium muris Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Sarcocystis muris – wywołuje sarkocystozę porażająca mięśnie poprzecznie prążkowane. Nasilona inwazja przyczynia się do śmierci zwierzęcia ● Rozpoznawanie – post mortem – preparaty mikroskopowe z mięśni szkieletowych. ● Sarcocystis muris Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Toxoplazma gondii – występuje wewnątrzkomórkowo w komórkach układu chłonnego, siateczkowo – śródbłonkowego, w krwinkach białych. Zwierzęta zarażają się przez zjedzenia siana, zielonki czy owoców zanieczyszczonych oocystami wydalonymi z kałem kotów. Toksoplazmoza przebiega w postaci poronnej, ale niekiedy powoduje zejścia śmiertelne. ● ● Rozpoznanie – testy immunologiczne Toxoplazma gondii Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Spironucleus muris – wiciowiec występujący w jelicie cienkim myszy, rzadziej szczurów. ● Objawy: u młodych zwierząt - biegunki, odwodnienie, spadek masy ciała. Często zwierzęta są osowiałe i maja powiększony obrys powłok brzusznych. ● Stwierdzono zależną od szczepu myszy odporność żywiciela na zakażenie tym pasożytem, np. u myszy Balb/c zakażenie przebiega bez zmian patologicznych i objawów klinicznych. ● Spironucleus muris Pasożyty zwierzat laboratoryjnych Giardia muris – wiciowiec występujący w jelicie cienkim. ● Objawy: u młodych osobników - biegunki i utrata masy ciała, pozostałe objawy kliniczne są niespecyficzne. ● Rozpoznanie – trofozoity w jelicie cienkim lub wydalone z kałem cysty ● Giardia muris Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Trichomonas muris – rzęsistek, zwykle niepatogenny (czasami wykorzystywany jako biomarker zarażenia hodowli pierwotniakami) ale może wywoływać stany zapalne jelita grubego oraz biegunki. ● Trichomonas muris Pasożyty zwierząt Trypanosoma lewisi – świdrowiec osocza krwi szczurów. Żywicielem pośrednim są pchły. U młodych szczurów ciała odpornościowe wytwarzają się stopniowo. Przebyta inwazja uodparnia szczury na reinwazję. ● Trypanosoma lewisi Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Hymenolepis nana – tasiemiec karli. Nie zawsze wymaga żywiciela pośredniego (rozwój monokseniczny) - szczególnie niebezpieczny w hodowli. ● Objawy – biegunka na przemian z zaparciami, bóle brzucha, duszności, napady rzekomopadaczkowe i zahamowanie wzrostu. Przy małej inwazji występują zapalenia nieżytowe błony śluzowej jelit oraz ogniskowe ziarniakowe zapalenie węzłów chłonnych krezkowych. ● Hymenolepis nana Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Hymenolepis diminuta – najbardziej pospolity tasiemiec szczura i przypadkowo człowieka. ● Objawy: przy małej inwazji występuje nieżytowe zapalenia błony śluzowej jelit. Przy dużej inwazji następuje zahamowanie wzrostu. ● Hymenolepis diminuta Pasożyty zwierząt laboratoryjnych ● Trichinella spiralis – włosień krety Objawy: w fazie jelitowej choroby występują zaburzenia jelitowe, w fazie mięśniowej choroby – zaburzenia ruchowe, połykania i przeżuwania. U szczurów występuje dodatkowo obrzęk powiek. ● Trichinella spiralis Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Oxyrius obvelata – owsik – występuje zwykle masowo w jelicie ślepym i okrężnicy myszy i szczura. Chorobotwórczość - nieznaczna, nasilająca się w przypadku inwazji lub spadku odporności. ● Rozpoznanie – badanie próbek kału metodą flotacji ● Oxyrius obvelata Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Capillaria hepatica – umiejscawia się w miąższu wątroby u szczura. ● Objawy: zapalenie i marskość wątroby. Podczas sekcji obecność pasożyta zdradzają skupiska jajeczek w postaci białych plam pod torebką wątrobowa. ● Capillaria hepatica Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Polyplax serrata – wesz typowa dla myszy, powoduje anemie. Łatwo zauważalna przy małżowinach usznych, zewnętrznych kącikach oczy lub w okolicach otworów naturalnych. Jest wektorem bartonelozy i tularemii. ● Polypax spinulosa – wesz typowa dla szczura. Objawem jest silne drapanie się zwierząt a silna wszawica doprowadzić może do śmierci. ● Polyplax serrata i Polypax spinulosa Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Leptopsylla segnis – pchła mysia, przenosi tyfus mysi ● Xenopsylla cheopis – pchła szczurza, odgrywa główna rolę w przenoszeniu zarazków dżumy ● Leptopsylla segnis i Xenopsylla cheopis Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Myocoptes musculinus – świeżbowiec drążący, typowy dla myszy. ● Objawy: niepokój, drapanie się, zaczerwienienie i strupy na skórze w okolicy głowy i karku, zapalenia skóry i wyłysienia. ● Dermanyssus sanguineus – ptaszyniec, typowy dla szczura. Powoduje świąd oraz jedna z odmian riketsjozy. ● Myocoptes musculinus Dermanyssus sanguineus Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Kokcydia z rodzaju Eimeria – każda obecność kokcydii, niezależnie od wieku żywiciela wywołuje ujemny efekt zdrowotny a nabyta na nie odporność jest zawsze bardzo słabo zaznaczona. Króliki które przechorowały kokcydiozę, nabywają dożywotnią odporność, ale brak jest odporności krzyżowej na poszczególne gatunki kokcydiów. ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych ● ● Silnie patogenne i najgroźniejsze są: Eimeria magna, ● Eimeria flavescens ● Eimeria perforans Pasożyty zwierzat laboratoryjnych Eimeria perforans – wysoka śmiertelność, szczególnie u młodych królików (do 5 m-ca życia) ● Objawy: brak apetytu, osłabienie, niedokrwistość ● strata masy Zmiany anatomopatologiczne: zapalenie jelita cienkiego, ściana pogrubiała i zaczerwieniona ● ciała, nieżytowe jelita jest Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Eimeria stiedai – pasożyt komórek nabłonka przewodów żółciowych ● Objawy: wzdęte podbrzusze, powiększenie wątroby, utrata apetytu, gwałtownie postępujące wychudzenie, zatkanie przewodów żółciowych ● Zmiany anatomopatologiczne: bladość i zażółcenie błon śluzowych, powiększenie pęcherzyka żółciowego i przewodów żółciowych. Na wątrobie można zauważyć białawe lub żółtawe guzki ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Encephalitozoon cuniculi – osiedla się w cytoplazmatycznych wakuolach komórek nabłonkowych kanalików nerkowych, w komórkach śródbłonkowych. ● Objawy: skręt szyi, przechylenie ciała w jedną stronę, napadowe obroty wokół własnej osi, oczopląs. ● Zmiany anatomopatologiczne: śródmiąższowe zapalenie nerek z martwicą nabłonka kanalików. Zmiany obserwowane zarówno w korze jak i w rdzeniu nerki. Może występować zapalenie mięśnia sercowego oraz naczyń krwionośnych ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Tasiemczyce są niebezpieczne dla królików przy masowych inwazjach, głównie dla osobników młodych. ● Inwazja prowadzi do przewlekłego lub ostrego zapalenia nieżytowego jelit cienkich objawiających się: biegunką, wzdęciem powłok brzusznych, stopniowych osłabieniem i ogólnym wychudzeniem mogącym doprowadzić do śmierci. Toksyczne produkty przemiany materii tasiemców porażają układ nerwowy doprowadzając do drgawek. ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Cittitaenia denticulata cienkie ● - umiejscowienie: jelito Pojedyncze tasiemce zazwyczaj nie wywołują u królików żadnych objawów chorobowych. Groźna jest masowa inwazja. ● Objawy: biegunki, pomimo apetytu zwierzęta chudną ● Rozpoznawanie: badanie kału, poszukiwanie członów tasiemca metodą dekantacji lub jaj tasiemca metoda flotacji, sekcyjnie na znalezieniu ● Cittitaenia denticulata Pasożyty zwierząt laboratoryjnych ● Andrya cuniculi – umiejscowienie: jelito cienkie Objawy: intensywna inwazja tasiemców prowadzi do przewlekłego lub ostrego zapalenia nieżytowego błony śluzowej jelit, powiększenie brzucha, osłabienie, niedokrwistość i ogólne wychudzenie. Mogą również pojawić się napady epileptyczne w odpowiedzi na toksyczne produkty przemiany materii tasiemców ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Zakażenia postaciami larwalnymi tasiemców ● Cysticercus pisiformis – wągier tasiemca Taenia pisiformis pasożytującego u lisa, psa i innych mięsożernych. Królik zjada trawę zanieczyszczona jajami lub członami tasiemca, staje się jego żywicielem pośrednim. ● W jelicie cienkim wykluwają się onkosfery, przebijają ścianę jelita i z krwią przedostają się do wątroby. ● Wągry umiejscawiają się w krezce, pod błoną surowiczą sieci, przepony, wątroby i pod błonami surowiczymi innych narządów (nerek, płuc, macicy a nawet mózgu) ● Pomimo silnej inwazji choroba przebiega bezobjawowo, rozpoznanie następuje podczas zabiegu chirurgicznego lub sekcji zwierzęcia ● Cysticercus pisiformis Pasożyty zwierzat laboratoryjnych Ascarops strongylina – nicień żołądkowo – jelitowy. Królik jest żywicielem ostatecznym. ● ● Objawy: brak apetytu, osłabienie Zmiany anatomopatologiczne: pasożyty wnikając głęboko w błonę śluzową żołądka powodują martwicę i owrzodzenie. ● Ascarops strongylina Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Trichostrongylus retortaeformis żołądkowo – jelitowy ● Umiejscowienie: rzadziej żołądek ● błona – nicień śluzowa dwunastnicy, Objawy: u zwierząt dorosłych w dobrej kondycji nawet nasilone inwazje nie wywołują objawów klinicznych choroby. ● U młodych królików (wiek 1-3 m-cy) obserwuje się utratę apetytu, biegunki na przemian z zaparciami, pogorszenie kondycji, niedokrwistość, ● Trichostrongylus retortaeformis Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Graphidium strigosum – miejsce bytowania – błona śluzowa żołądka, czasami jelito cienkie ● Objawy: przy masowej inwazji – biegunka, osłabienie, wychudzenie ● Graphidium strigosum Pasożyty zwierząt laboratoryjnych ● Passalaurus ambiguus – owsik króliczy – najczęściej spotykany nicień w jelitach królików. Objawy – owsiki drażniąc śluzówkę jelita, mogą powodować przy silnej inwazji zapalenie jelita grubego. Pod wpływem świądu może dochodzić do uporczywego wylizywania lub wygryzania okolicy odbytu oraz związanych z tym samouszkodzeń. ● Młode króliki wolniej osiągają masę ciała optymalna dla wieku, a silna inwazja może być czynnikiem usposabiającym do rozwoju stanów zapalnych jelit, zwłaszcza w okresie okołoodsadzeniowym ● Passalaurus ambiguus Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Haemodispus ventricosus – u młodych królików powoduje zahamowanie wzrostu ● Wszawica pojawia utrzymania zwierząt ● się w złych warunkach Objawy: świąd i niepokój. Ukłucia wszy wywołują zmiany podobne do pokrzywki a nawet lokalne zmiany martwicowe. ● Króliki tracą apetyt, chudną a w wyniku silnej inwazji pojawiają się objawy niedokrwistości ● Haemodispus ventricosus Pasożyty zwierząt laboratoryjnych ● Spilopsyllus cuniculi – pchła królicza ● Umiejscowienie: zwykle małżowiny uszne ● Pchły przenoszą myksomatozę, pasterelozę W ciepłych krajach są żywicielem pośrednim króliczych świdrowców. ● Spilopsyllus cuniculi Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Kawia domowa jest żywicielem najliczniejszej fauny pierwotniaków spośród wszystkich zwierząt laboratoryjnych (około 44 gatunków), w tym wiciowce, sporowce, korzeninóżki, orzęski, z których tylko część jest chorobotwórcza. ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Eimeria caviae – występuje w jelicie grubym, niekiedy powoduje biegunkę i upadki śmiertelne. ● Klosiella cobaye – umiejscawia się w moczowodach, naczyniach krwionośnych nerek, komórkach cewek nerkowych. ● Trichomonas caviae i Trichomonas flagelliporta – rzęsistki pasożytujące w jelicie grubym, powodują znaczne straty, szczególnie wśród młodych osobników. ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Hexamita sp. - powoduje ostrą biegunkę lub przewlekłe zapalenie jelita biodrowego. ● Entamoeba histolytica – wywołuje czerwonkę pełzakową, cechuje się krwawą biegunką ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Mallophaga – wszoły – żywią się złuszczonym naskórkiem. Osobniki dorosłe oraz ich jaja można znaleźć przyczepione do trzonów włosów. Inwazji towarzyszy zwykle świąd, na skórze widoczne są wyłysienia i strupki, a włos jest szorstki. ● Pasożyty zwierząt laboratoryjnych Trixacarus caviae – najczęściej występujący świerzbowiec pasożytujący w skórze. ● Objawy: silny świąd, zmiany najczęściej umiejscowione są na bokach ciała i na grzbiecie, ale mogą obejmować prawie całe ciało. Skóra jest zgrubiała, pokryta strupkami, sierść jest znacznie przerzedzona. ● Trixacarus caviae Choroby bakteryjne Corynebacterium bovis- bakteria powodująca zapalenie skóry, łysienie, nadmierne rogowacenie, łuszczące płaty skóry ● Choroby bakteryjne Helicobacter spp. -większość zakażeń jest bezobjawowa, niektórymi z objawów jest wypadanie odbytnicy, zapalenie jelita ślepego. U zwierząt zakażonych Helicobacter może również występować biegunka. ● H. hepaticus mogą być również związane z dysfunkcją wątroby i raka jelita grubego w niektórych szczepach myszy ● Choroby bakteryjne Pasterella pneumotropica – pałeczka gram ujemna. Miejsca kolonizacji – nosogardziel, pochwa, jelita. P. pneumotropica jest nietrwałym organizmem, który nie przetrwa długo poza żywicielem (sentinele mogą być zawodne). Zakażenie przebiega bezobjawowo, u zwierząt z obniżoną odpornością mogą wystąpić takie objawy jak: zapalenie spojówek, nieżyt nosa, zapalenie węzłów chłonnych, ropne odoskrzelowe zapalenie płuc. ● P. pneumotropica może nasilać choroby układu oddechowego u myszy zarażonych wirusem Sendai i Mycoplasma ● Choroby bakteryjne Salmonella – gram ujemne bakterie. Wszystkie gryzonie laboratoryjne zagrożone są infekcją Salmonella. ● Salmonelloza u myszy i szczurów przebiega zazwyczaj bezobjawowo. Objawy które mogą się pojawić to: biegunka, spadek masy ciała, zapalenie spojówek, porfiryny w okolicach nosa. ● Rozpoznanie: badanie próbek kału. Podczas sekcji zwłok zmiany w śledzionie, wątrobie, wzdęte lub pogrubione ściany jelit ● Choroby bakteryjne Citobacter rodentium – gatunkami zagrożonymi infekcją są myszy, myszoskoczki ewentualnie świnki morskie. Szczury i chomiki nie są narażone. ● Objawy: biegunka, zapalenie jelita grubego, spadek masy ciała, wypadanie odbytnicy. Zmiany patologiczne obejmują zgrubiałą ścianę jelita grubego, skurczone jelito ślepe, brak normalnego stolca w okrężnicy. ● Choroby bakteryjne Clostridium piliforme – choroba Tyzzera – podatne na zachorowanie są wszystkie gryzonie laboratoryjne oraz króliki. ● Objawy : odwodnienie, biegunka, zgarbiona postawa, apatia, depresja, brak apetytu, silna bolesność brzucha. Podczas sekcji, u padłych osobników stwierdza się obecność ognisk martwiczych w wątrobie, martwicę jelit – w szczególności jelita biodrowego i okrężnicy, w mięśniu sercowym zauważalne są jasne smugi. ● Choroby bakteryjne Mycoplasma pulmonis – wywołuje mykoplazmowe zapalenie płuc (Murine Respiratory Mycoplasmosis – MRM). Mykoplazmy upośledzają mechanizm samooczyszczania dróg oddechowych, atakując nabłonek rzęskowy i tworząc w jego obrębie warstwę gęstego śluzu. Ułatwia to kolonizację innym drobnoustrojom, dlatego częste są infekcje mieszane z laseczką CAR (Cilia Associated Respiratory Bacillus), Bordetella bronchiseptica czy Streptococcus pneumoniae. ● Zwierzęta mogą być nosicielami, bez objawów klinicznych. Rozwojowi zakażenia sprzyja spadek odporności, niedobory żywieniowe, stres. ● ● Objawy: ● wyciek z nosa, początkowo surowiczy, z czasem mętny śluzowo – ropny; charakterystyczny „świst” i „gruchanie” z powodu częściowej niedrożności dróg oddechowych i zalegania wydzieliny; ● ● kichanie, kaszel; duszność, objawiająca się najczęściej pogorszeniem kondycji oraz leżeniem głównie w pozycji mostkowej najchętniej z wyciągnięta do przodu, wyprostowaną szyją i głową uniesioną nieco wyżej; ● ● przy zaawansowanej duszności tzw. oddychanie brzuszne, czyli bardzo silne „pompowanie bokami”; ● brak apetytu; ● osowiałość. Choroby bakteryjne ● intensywne wydzielanie porfiryn z gruczołów Hardera, czyli tzw. „czerwone łzy”; czerwone zabarwienie sierści wokół oczu, nozdrzy oraz na przednich kończynach (w związku z czerwonymi łzami, które wypływają również przez nos); ● jedno lub obustronne zapalenie spojówek, objawiające się obrzękiem, zaczerwieniem, mrużeniem oczu; ● ● silny świąd, ● zmniejszenie liczebności miotu; ● niepłodność; ● obumieranie zarodków; ● zapalenie macicy ● zapalenie jajników i jajowodów. Choroby bakteryjne Streptococcus pneumoniae – gatunki zagrożone infekcją to szczury i świnki morskie. Infekcje często utajone bez objawów klinicznych choroby. ● Objawy: skulona postawa ciała, nastroszone futro, wydzielina z nosa, zapalenie spojówek, poronienia. Podczas sekcji padłych zwierząt można zaobserwować : ciemnoczerwone płuca, zapalenie opłucnej, zapalenie osierdzia i otrzewnej. ● Choroby bakteryjne Staphylococcus aureus – zagrożone infekcja są wszystkie gatunki zwierząt laboratoryjnych. Gronkowiec kolonizować może skórę, jelita lub nosogardziel bez objawów klinicznych. Przy spadku odporności może powodować: u myszoskoczków – ostre, rozproszone zapalenie skóry, u królików objawiać się może ropniami, zapaleniem sutka, u myszy i szczurów – ropne infekcje spojówki, dróg rodnych, skóry ● Choroby bakteryjne Pseudotuberkuloza (korynebakterioza) zagrożone gatunki myszy, szczury, chomiki. Szczepy myszy mogą wykazywać różną podatność na kolonizację i rozwój choroby (C57/BL bardziej wytrzymałe, Balb/c bardziej wrażliwe). Zakażenie najczęściej utajone, spadek odporności, stres może wywołać rozwój choroby. ● Objawy: spadek masy ciała, nastroszone futro, niewydolność oddechowa. Podczas sekcji zaobserwować można: szaro-białe guzki widoczne w wątrobie, nerkach i płucach rzadziej w tkance podskórnej, śledzionie i węzłach chłonnych ● Choroby bakteryjne Bordetella bronchiseptica – gram ujemna bakteria, może być przenoszona przez szczury, króliki, psy, koty, świnie i naczelne. ● Objawy – nosiciele mogą nie mieć żadnych objawów. Kichanie, wydzielina z nosa, anoreksję, utratę wagi, zapalenie spojówek, duszność i śmierć. Młode kawie zwierzęta są bardziej narażone. ● Choroby bakteryjne Zapalenie błony śluzowej nosa - jest dość popularnym problemem chorobowym u gerbili. Młode osobniki są bardziej narażone na zachorowanie. ● Objawy - łysienie, rumień, ogniskowe zapalenie skóry, częste stwardnienie zanikowe i wrzody są wszystkimi typowymi cechami choroby. ● Choroby bakteryjne Choroba mokrego ogona – choroba bakteryjna, atakująca głównie młode osobniki. ● Objawy - bardzo silna biegunka, zwierzę staje się apatyczne, porusza się na sztywnych łapach. W skrajnych przypadkach może dojść do wypadnięcia jelita grubego przez odbyt. Śmierć następuje w wyniku odwodnienia, wygłodzenia lub wypadnięcia jelita. ● Choroby wirusowe Ospa myszy (Ectromelia virus) ● Objawy: Są różne i wahają się od krost i strupów na twarzy do martwicy obwodowych części kończyn i ogona. W ostrym przebiegu choroby występuje duża śmiertelność. Mysz często przybiera postawę zgarbioną, ma zapalenie spojówek, opuchniętą część twarzową. W przebiegu podostrym i przewlekłym występuje na całym ciele wysypka z pęcherzykami, która często przechodzi w opuchnięcia, martwicę. Przypadki śmiertelne są rzadkie. ● Bardzo wrażliwe Balb/c, DBA, C3H; oporne C57BL/6 i AKR ● Choroby wirusowe Mysi wirus zapalenia wątroby (MHV) - Objawy zależą od rodzaju szczepu wirusa ale również od cech osobniczych myszy takich jak wiek, predyspozycje genetyczne i kondycja odpornościowa. Najpoważniejsze objawy występują u myszy młodych. U myszy z dobrze rozwiniętym systemem odpornościowym przechorowanie może być bezobjawowe lub z łagodnymi objawami. Zwykle po 7-10 dniach wracają do zdrowia. U słabych myszy zauważyć można skołtunioną sierść, przygarbioną postawę, dochodzi do wodnistej biegunki, często kończącej się śmiercią (zwłaszcza przy szczepie atakującym wpierw układ pokarmowy). Myszy z defektami dotyczącymi układu odpornościowego szybko tracą wagę i giną. Choroby wirusowe Wirus Sendai ● Zarażenia tym wirusem są rzadkie. Przenoszony jest przez kontakt bezpośredni z osobnikiem zainfekowanym. Możliwe jest też przenoszenie przez skórne pasożyty. Atakuje on płuca. ● Wirus ten samodzielnie może nie powodować objawów, ale może je wywołać przy jednoczesnej obecności mykoplazm – zwłaszcza że wirus obniża odporność myszy. W enzootycznym przebiegu młode myszy otrzymują odporność bierną od matki, która chroni je przez 6-8 tygodni życia. Czasami można zaobserwować utrudnione oddychanie, piski, słabe przyrosty u młodych i zmniejszoną płodność. Przy braku odporności może dojść do śmierci zwierzęcia. ● Przechorowanie daje odporność dla myszy, która może też odpowiednie przeciwciała przekazać potomstwu razem z mlekiem. ● Choroby wirusowe Mysi Norowirus (MNV) ● Wirus należący do rodziny Caliciwirusów. Powoduje on infekcje jelit ale również może być replikowany w węzłach chłonnych krezki, wątrobie. Przenosi się poprzez pasożyty skórne ale również gdy mysz ma kontakt z zakażonymi odchodami. ● Objawy: Mysz z dobrze rozwiniętą odpornością raczej nie wykazuje objawów, natomiast przy wadach systemu immunologicznego infekcje mogą prowadzić do śmierci (zapalenie mózgu i opon mózgowych, zapalenie płuc i wątroby). ● Choroby wirusowe LCM Limfocytarne zapalenie splotu naczyniówkowego i opon mózgowych. Narażone szczególnie myszy i chomiki. Reakcja myszy laboratoryjnych zakażeniem LCMV zależy od wieku, szczepu wirusa oraz drogi narażenia. Objawy: nacieki limfocytarne w wątrobie, nadnerczach, nerkach, i płucach, zapalenie kłębuszków nerkowych. ● Choroby wirusowe Myksomatoza (myxomatosis) jest wywoływana przez Leporipoxwirusa ● Objawy choroby rozwijają się 3-14 dni po zakażeniu. Są to: ● - osowiałość ● - wzrost temperatury ciała (do ok. 41°C) ● - surowicze a potem ropne zapalenie spojówek ● - podskórne obrzęki lokalizujące się głównie wokół naturalnych otworów ciała (powodują one zwężenie szpar powiekowych, a potem zlepienie powiek, opadanie uszu, duszność, czasem nos wygląda tak królik go obtarł, jest zaróżowiony i może brakować na nim sierści) ● - czasem występują drgawki ● - mogą wystąpić trudności z oddawaniem moczu, staje się on brązowy ● - wyniszczenie (mimo, że początkowo królik ma zachowany apetyt i pije) ● Taka postać choroby trwa do ok. dwóch tygodni. Zwierzę najczęściej nie ● Choroby wirusowe Bywa też tak, że jedynym objawem choroby są guzowate zmiany na skórze, które po pewnym czasie pokrywają się strupami, które odpadając pozostawiają wyłysiałe miejsca. Czasem ok. 30 dni od wystąpienia takiej postaci choroby u pozornie zdrowego królika rozwija się ciężkie zapalenie płuc. Pojawia się śluzowo-ropny wysięk z nosa, zwierzę ma narastające trudności z oddychaniem, prowadzące do śmierci. Myksomatoza jest chorobą trudną do leczenia, terapia trwa bardzo długo, a gwarancji wyleczenia nie ma. Stosuje się antybiotyki, leki przeciwzapalne, należy też zapewnić królikowi ciepło i dobrą opiekę. Młode króliki są wrażliwsze na zakażenie i dużo szybciej prowadzi ona do ich śmierci. ● Choroby wirusowe SDAV – choroba szczurów wywoływana przez koronawirusy. ● Objawy – światłowstręt, kichanie obrzęk podżuchwowy, owrzodzenie rogówki, utrata masy ciała, zmniejszona płodność. U zwierząt zdrowych śmiertelność jest niska. ● Zagrożenia w pracy ze zwierzetami ● Ugryzienia ● Alergeny ● Zoonozy Działanie związków chemicznych – dezynfekujących oraz podawanych w trakcie doświadczenia ● Zagrożenia w pracy ze zwierzętami ● Personel musi być uprzedzony i przeszkolony ● Procedury, ● Odzież ochronna ● Szczepienia ● Właściwa wentylacja i ciśnienie w zwierzętarni ● Odpady (ściółka, martwe zwierzęta) – spalarnia ● Odkażanie sprzętów do prac ze zwierzętami Poziomy bezpieczeństwa biologicznego (BSL) BSL 1 - Mikroorganizmy, które nie wywołują chorób u zdrowych dorosłych ludzi np. choroby wirusowe specyficzne gatunkowo, podstawowy poziom ochrony ● BSL 2 - Mikroorganizmy umiarkowanego ryzyka zakażenia, związane z wywołaniem chorób u osób z osłabionym układem odpornościowym np.. toxoplasma, Salmonella. Konieczne jest ograniczenie dostępu personelu do pomieszczeń, wszystkie badania laboratoryjne wykonywane są w komorach laminarnych typu II,stosowanie maseczek ochronnych na twarz ● BSL 3 - Mikroorganizmy rodzime oraz egzotyczne mogące się przenosić w powietrzu i wywoływać nawet śmiertelne zakażenie np.. Mycobacterium tuberculosis. stosowanie barier ochronnych (wejście do laboratorium odbywa się przez śluzy powietrzne),powietrze do pomieszczeń laboratoryjnych dostarczane jest przez wentylację mechaniczną, wszystkie badania laboratoryjne wykonywane są w komorach laminarnych typu II lub III, odzież ochronna, częsta zmiana rękawic jednorazowych ● BSL 4 - Mikroorganizmy rodzime oraz egzotyczne stwarzające wysokie indywidualne ryzyko choroby zagrażającej życiu np.wirus Ebola. Stosowanie barier ochronnych, powietrze do pomieszczeń laboratoryjnych dostarczane jest przez wentylację mechaniczną, wszystkie badania laboratoryjne wykonywane są w komorach laminarnych typu III, odzież ochronna to szczelne kombinezony ciśnieniowe zakrywające całe ciało ● Zoonozy Limfocytarne zapalenie splotu naczyniówkowego i opon mózgowych - wirusowa choroba odzwierzęcą (mysz, chomik, kawia domowa). Do zakażenia dochodzi przez kontakt z odchodami, moczem i wydzieliną z nosa i gardła tych zwierząt. Przeniesienie wirusa zachodzi drogą kropelkową, pokarmową lub przez skaleczenia skóry. Po okresie inkubacji wynoszącym ok. 6-13 dni choroba może objawiać się podobnie jak grypa lub wywołać poważniejsze symptomy, charakterystyczne dla nietypowego zapalenia płuc lub zapalenia opon mózgowych. ● Zoonozy Yersinia pseudotuberculosis – choroba bezobjawowa lub klinicznie jawna u gryzoni, królików i ludzi ● Zakażenie jelitowe, objawami może być zapalenie jelit, zapalenie węzłów chłonnych a nawet posocznica ● Zoonozy Helicobacter – wrzodziejące zapalenie jelita grubego, zapalenie żołądka, zapalenie dróg żółciowych i pęcherzyka żółciowego ● Zoonozy Leptospirozy, krętkowice, choroba Weila – gryzonie dzikie i laboratoryjne są rezerwuarem patogenu. Zakażenie poprzez uszkodzoną skórę i błony śluzowe ● Objawy - uszkodzenie wątroby i nerek, żółtaczka, krwiomoczem, białkomoczem, Może wystąpić również zapalenie naczyń objawiające się krwawieniami z nosa, krwiopluciem, wybroczynami skórnymi. Stosunkowo rzadkimi powikłaniami jest zapalenie mięśnia sercowego, zapalenie płuc. ● Zoonozy Listerioza – listeria monocytogenes – rezerwuarem są zwierzęta m.in. króliki, świnki morskie. Zakażenie przez błonę śluzową jamy ustnej, nosa, spojówki ● ● objawy grypopodobne ● wymioty ● biegunka ● posocznica ● zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych Zakażenie może być bezpośrednią przyczyną poronień u kobiet. Powoduje niepłodność, nieprawidłowy przebieg ciąży, powstawanie u noworodków wad rozwojowych. ● Zoonozy Hantawirusowy zespół płucny – zakażenie hantavirusami przenoszonymi przez gryzonie np.. nornice ● Objawy:gorączka, bóle mięśni, nudności, wymioty, ból brzucha, zawroty głowy. Faza prodromalna trwa 1-11 dni, po niej dochodzi do rozwoju fazy płucnej, która charakteryzuje się spadkiem ciśnienia tętniczego, tachykardią. W badaniach dodatkowych można stwierdzić hipoksemię a badaniu RTG klatki piersiowej cechy obrzęku płuc. W przeciągu kilku lub kilkudziesięciu godzin choroba może rozwinąć się i spowodować niewydolność oddechową będącą przyczyną śmierci. ● Zoonozy Toksoplazmoza – pasożytnicza choroba ludzi i zwierząt spowodowana zarażeniem pierwotniakiem Toxoplasma gondii. ● Świeże zarażenie u osoby z prawidłową odpornością jest zazwyczaj bezobjawowe. ● Zoonozy Mycobacterium tubeculosis – cechuje się wysoką śmiertelnością u świnek morskich, zakażenie dotyczy wszystkich gatunków zwierząt laboratoryjnych i człowieka ● Gruźlica dotyczy najczęściej płuc (gruźlica płucna), lecz również może atakować ośrodkowy układ nerwowy, układ limfatyczny, naczynia krwionośne, układ kostno-stawowy, moczowopłciowy oraz skórę. ● Piśmiennictwo „Zwierzęta laboratoryjne – patologia i użytkowanie” J.Szarek, M.Szweda, E. Strzyżewska ● „FELASA recommendations for the health monitoring of mouse, rat, hamster, guinea pig and rabbit colonies in breeding and experimental units” Laboratory Animals 2014, Vol.48(3)178-192 ● „Choroby zakaźne myszy i szczurów z elementami zoonoz, wybranymi zagadnieniami z hodowli, anatomii i fizjologii” J. Ziętek, Ł. Adaszek, S. Winiarczyk ● ● http://www.criver.com/files/pdfs/infectious-agents ● http://dora.missouri.edu/ ● Materiały szkoleniowe POLLASA