BIONDYKACJA Wzrastający poziom oraz nowa jakość antropogenicznych zanieczyszczeń wpływają na fizjologię i morfologię organizmów, a w skrajnych przypadkach prowadzą do ich obumierania. Zanieczyszczenia wpływają także na wzajemne abiotyczne i biotyczne czynniki ekosystemu: biocenozy i jej biotopu. Wśród złożonego ekosystemu wyróżniają się organizmy czułe na zmiany składu chemicznego otoczenia, one pierwsze wykazują zewnętrzne oznaki tych oddziaływań: karłowacenie, zmiany barwy, zanikanie gatunków. Związki przyczynowo-skutkowe tych procesów od dawna były obiektem badań. Wyselekcjonowano wiele gatunków roślin i zwierząt, które w swoich organizmach kumulują zanieczyszczenia, wykazują zmiany fizjologiczne, anatomiczne lub morfologiczne, zachodzące pod ich wpływem. Organizmy te zaczęto wykorzystywać jako biologiczne wskaźniki (biowskaźniki, bioindykatory) zanieczyszczenia środowiska. Obecnie metody bioindykacyjne zaczynają skutecznie konkurować z tradycyjnymi metodami badania zanieczyszczenia środowiska. Bioindykacją nazywamy ogół metod oceny stanu środowiska, głównie poziomu zanieczyszczeń, polegających na badaniach reakcji organizmów żywych (stenobiontów, organizmów wskaźnikowych) na zmiany. Biowskaźniki są wykorzystywane do oceny zanieczyszczenia: - wód, np.: fito- i zooplankton, małe ryby; - gleby: różne gatunki i części roślin: np. korzenie i liście; - atmosfery, np.: kora, igły i liście drzew, grzyby, mchy i porosty. Do określania trofii zbiorników wodnych wykorzystywane mogą być również współczynniki fitoplanktonowe. Metody bioindykacji używa się także przy ocenie stanu lasów. Polegają one na określeniu stopnia defoliacji (ubytku liści koron drzew), zabarwienia liści, obecności pasożytów itp. Bioindykacja wód wykorzystuje doświadczenia m.in. ekologii, toksykologii środowiskowej i fizjologii organizmów wodnych. Bioindykacja i analizy fizykochemiczne wód mogą wspólnie tworzyć system oceny środowiska. Analizy fizykochemiczne dostarczają informacji np. o koncentracjach wybranych pierwiastków lub związków chemicznych o udokumentowanych progach toksyczności (głównie dla człowieka), a bioindykacja pozwala na określenie efektów oddziaływania wszystkich czynników środowiskowych na organizmy. W badaniach jakości środowiska poszukuje się idealnego organizmu wskaźnikowego. Powinien on spełniać szereg warunków: mieć wąski i specyficzny (i oczywiście znany) zakres wymagań, być szeroko rozprzestrzeniony, występować licznie, mieć długi cykl życiowy (min. 1 rok), lub kilka nakładających się pokoleń w ciągu roku, być łatwy do oznaczenia, mieć znaną biologię i fizjologię. Znalezienie organizmu (organizmów), który spełniał by wszystkie te wymogi jest bardzo trudne. Dodatkowym problemem jest adaptacja wielu organizmów do zanieczyszczeń, a także różna odporność organizmów występujących w środku i na skraju zasięgu występowania. W bioindykacji wód rozwijają się dwa zasadnicze kierunki: bioindykacja terenowa i bioindykacja laboratoryjna. W bioindykacji terenowej oceny jakości wody dokonuje się na podstawie analizy składu gatunkowego, liczebności i struktury zespołów organizmów występujących w badanym środowisku, bądź też reakcji organizmów umieszczanych w nim eksperymentalnie (np. testy pstrągowe). Dotyczy to zwłaszcza wód silnie zanieczyszczonych, gdzie miarą stopnia skażenia jest reakcja zwierząt wprowadzonych do badanego środowiska. Bioindykacja laboratoryjna umożliwia precyzyjną ocenę sumarycznego oddziaływania większości czynników środowiskowych na organizmy żywe. Badaniu podlegają próbki pobrane w terenie, a miarą jakości wody (w szczególności jej sumarycznej toksyczności) jest rodzaj i czas reakcji organizmów wodnych wprowadzanych do tych próbek. Ten rodzaj bioindykacji jest możliwy do zastosowania także w przypadku badań wód silnie skażonych, nawet takich, w których żadne żywe organizmy już nie występują. Uzyskane dane doświadczalne informują jednakże o stopniu skażenia środowiska i dynamice jego oddziaływania na organizmy, a także o trwałości skażenia środowiska - jeśli badania są powtarzane. Rozwój zastosowań bioindykacji uzależniony jest od: postępów w poznawaniu zakresów tolerancji poszczególnych gatunków i ich zespołów na różnorodne czynniki środowiskowe, przygotowania służb odpowiedzialnych za monitoring stanu środowiska do właściwego analizowania i interpretowania danych przyrodniczych, powszechnego wprowadzenia bioindykacji poprzez popularyzację wiedzy na temat różnorodności organizmów występujących w wodach oraz ich podstawowych wymagań siedliskowych. Metody wykorzystywane do oceny jakości wód powierzchniowych powinny być proste, łatwe i szybkie w wykonaniu, obiektywne, porównywalne, czułe i tanie. Wszystkie te wymogi są ważne na każdym z etapów analizy. W Polsce stosuje się jak dotychczas głównie metody fizyczno-chemiczne, w mniejszym zakresie mikrobiologiczne, parazytologiczne i biologiczne (hydrobiologiczne). Metody biologiczne (hydrobiologiczne) w porównaniu z metodami fizykochemicznymi mają szereg zalet: obrazują zmiany jakości wody w dłuższych odcinkach czasowych, informują one w jaki sposób zanieczyszczenia wpływają na organizmy, dają bezpośredni obraz wpływu zanieczyszczeń na organizmy, są z jednej strony "odporne" na chwilowe przerwy w dopływie ścieków (w wypadku badań fizyczno-chemicznych uzyskujemy wtedy informację o dobrej jakości wody), ale równocześnie uwzględniają wpływ krótkoterminowych "katastrof ekologicznych, wreszcie wykrywają same zmiany, a nie ich przyczyny, pozwalają na ocenę jakości nie samej tylko wody, ale całego środowiska. W odniesieniu do makrofauny bezkręgowej metody te są opracowane w dostatecznym stopniu jedynie dla cieków. Dla oceny wód stojących stosowane są niekiedy wskaźniki biologiczne, bazujące na strukturze zespołów planktonowych. Istnieje szereg metod oceny jakości wód wykorzystujących organizmy żywe. Dotychczas w Polsce stosowany jest znana od blisko 100 lat system saprobowej klasyfikacji wód. W metodzie tej wykorzystywane są liczne organizmy należące do różnych grup systematycznych i ekologicznych, jednak w Polsce badania te prowadzi się wyłącznie w oparciu o bioseston (drobne organizmy zasiedlające toń wodną) W krajach Europy Zachodniej i w Ameryce dominują metody wykorzystujące makrofaunę bezkręgową, (tzw. indeksy biotyczne). System saprobów jest to metoda, w której przyjęto, że organizmy wodne różnią się tolerancją na zanieczyszczenia i w związku z tym każdy gatunek ma jakąś wartość wskaźnikową (jest wskaźnikiem stanu zanieczyszczeń). W systemach saprobów wykorzystywane są jako gatunki wskaźnikowe organizmy z bardzo różnych grup taksonomicznych (Rys.1). Rys. 1. Liczba gatunków wskaźnikowych w systemach saprobowych, dla różnych klas jakości wód (I-IV) (za Lampert W., Sommer U.,1996) System saprobów ma wiele wad. W momencie powstawania był opracowany tylko dla wód zanieczyszczonych związkami organicznymi (łatwo rozkładalnymi), podczas gdy obecnie mamy najczęściej do czynienia z całymi kompleksami zanieczyszczeń. System uwzględnia nie tylko organizmy heterotroficzne, ale także pewne gatunki roślin, glonów i sinic, co jest błędne, gdyż organizmy autotroficzne reagują raczej na trofię, a nie na saprobowość. Poza tym listy gatunków wskaźnikowych zostały opracowane bez znajomości fizjologicznych granic tolerancji poszczególnych gatunków, ich wymagań ekologicznych i granic adaptacji. Warunki środowiskowe dobrze charakteryzują przy tym jedynie gatunki o skrajnych wymaganiach (saprobionty i saprokseny). Również dominacja gatunków o dużej tolerancji ekologicznej powoduje, że nawet w wypadku wód niezanieczyszczonych, wskaźniki saprobowości często skupiają się wokół klasy jakości wód II-III. Znacznym utrudnieniem jest również konieczność oznaczenia każdego znajdowanego w próbie zwierzęcia i rośliny, co wobec dużej liczby branych pod uwagę grup systematycznych jest niezwykle trudne, pracochłonne i w praktyce wymaga zaangażowania dużej grupy specjalistów. Poza tym nie istnieją kompletne opracowania (klucze) dla wszystkich grup systematycznych danego obszaru. Metoda wskaźników zróżnicowania gatunkowego (różnorodności gatunkowej) ma u podstaw założenie, że środowiska naturalne, nie narażone na antropopresję, charakteryzują się dużym ogólnym zróżnicowaniem - dużą liczbą gatunków, stosunkowo niewielkimi różnicami udziału różnych gatunków występowaniem wielu współdominantów w poszczególnych grupach organizmów itd. Środowiska poddane działaniu jakiegoś jednego, z dużą siłą działającego czynnika, charakteryzują się małym ogólnym zróżnicowaniem - małą liczbą gatunków, a nawet występowaniem tylko jednego gatunku, który jest w stanie tolerować skrajne warunki środowiskowe i może w pełni zdominować środowisko. Jednak nie zawsze musi to mieć związek z antropopresją; np. w wysokogórskich strumieniach siła płynącej wody lub/i niska temperatura mogą ograniczać występowanie organizmów mimo braku oddziaływania człowieka i mimo dużej czystości wody. W wypadku mięczaków w ciekach górskich liczba gatunków rośnie z biegiem cieku, natomiast w ciekach nizinnych - maleje, co jest związane z odmiennym charakterem zmian zróżnicowania środowiska. Tak więc nie zawsze sprawdza się podstawowe założenie tych metod i możliwość bezpośredniego interpretowania jakości wód na podstawie wskaźników różnorodności. Makrofauna bezkręgowa jest w wielu krajach podstawą do określania jakości wody, także i wtedy, gdy nadal korzysta się z systemu saprobów. Właśnie grupa organizmów jest wykorzystywana gdyż: denne bezkręgowce są w ciekach, zwłaszcza małych, grupą dominującą, organizmy te są stosunkowo duże, a więc dosyć łatwe do znalezienia, praktycznie stale zasiedlają dany odcinek cieku (są mało ruchliwe), charakteryzują się stosunkowo długimi cyklami życiowymi (niekiedy mierzonych w latach), a więc zmiany w ich składzie gatunkowym czy liczebności będą odzwierciedlać długookresowe zmiany środowiska, różnorodność makrofauny bezkręgowej dobrze odzwierciedla stopień degradacji cieków, ponieważ w obrębie tej grupy występują liczne grupy systematyczne i funkcjonalne, które w różny sposób reagują na zmiany środowiskowe, jest też stosunkowo łatwa do analizy systematycznej można często korzystać z ponad gatunkowych jednostek taksonomicznych). Makrofauna bezkręgowa w wodach czystych charakteryzuje się zazwyczaj dużą różnorodnością gatunkową, zróżnicowaną liczebnością i przeważnie niską biomasą. Wraz ze wzrostem zanieczyszczenia następuje wzrost liczebności, a następnie zmiana struktury dominacji a potem składu gatunkowego. Rośnie liczebność i udział procentowy skąposzczetów (Oligochaeta) i, początkowo, larw ochotkowatych (Chironomidae), a następnie ograniczeniu ulega występowanie larw ochotkowatych, pijawek i mięczaków. W wodach silnie zanieczyszczonych substancjami organicznymi masowo występują skąposzczety, a w wodach zatrutych makrofauna może w ogóle nie występować. Szczególnie wrażliwe na zanieczyszczenia są larwy widelnic (Plecoptera), niektórych jętek (Ephemeroptera) i niektórych chruścików (Trichoptera). Metoda indeksów biotycznych łączy zalety związane z wykorzystaniem makrofauny bezkręgowej z uproszczonym sposobem jej oznaczania. Podstawowym założeniem tej metody jest przyjęcie, że pewne taksony lepiej niż inne charakteryzują biocenozę. opiera się na następujących założeniach: zanieczyszczenia organiczne powodują redukcję liczby różnych grup makrofauny bezkręgowej, czyli zmniejszają różnorodność, ze wzrostem zanieczyszczeń znikają kolejno: larwy widelnic (Plecoptera), larwy jętek (Ephemeroptera), larwy chruścików (Trichoptera), kiełże (Gammarus sp.), czerwone larwy ochotkowatych z rodzaju Chironomus, i dopiero na końcu skąposzczety z rodziny Tubificidae. Polski indeks biotyczny (BMWP-PL) – metoda monitoringu rzek w Polsce, zaadaptowana z brytyjskiego indeksu BMWP ((ang.) Biological Monitoring Working Party score). Indeks biotyczny opracowano w celu dostosowania polskich metod biomonitoringu do ujednoliconego systemu stosowanego w UE. Ramowa Dyrektywa Wodna Unii Europejskiej wprowadziła nowe podejście do oceny czystości i klasyfikacji wód, kładąc nacisk na ocenę stanu ekologicznego. W polskim indeksie biotycznym uwzględnione są następujące grupy bezkręgowców wodnych (Tab. 1.) Tabela 1. Punktacja przypisana poszczególnym rodzinom organizmów makrobezkręgowców bentosowych wg propozycji polskiej modyfikacji angielskiego indeksu BMWP [Soszka i wsp., 2001] Grupa Takson jętki; chruściki; muchówki Ameletidae; Glossosomatidae, Molannidae, Beraeidae, 10 Odontoceridae, Leptoceridae; Blephariceridae, Thaumaleidae jętki, widelnice; chruściki Punktacja ważki; Behningiidae; Taeniopterygidae; Cordulegastridae; Goeridae, 9 Lepidostomatidae. skorupiaki; jętki; widelnice; Astacidae, Oligoneuriidae, Heptageniidae; Capniidae, Perlidae, 8 chruściki; muchówki Chloroperlidae; Philopotamidae; Athericidae Siphlonuridae, Leptophlebiidae, Potamanthidae, jętki; widelnice; ważki; Ephemerellidae, Ephemeridae, Caenidae; Perlodidae, chruściki, chrząszcze, Leucridae; Calopterygidae, Gomphidae; Rhyacophilidae, 7 pluskwiaki; ślimaki; małże Brachycentridae, Sericostomatidae, Limnephilidae; Elmidae; Aphelocheiridae; Viviparidae; Unionidae; Dreissenidae Piscicolidae; Gammaridae, Corophiidae; Baetidae, pijawki; skorupiaki; jętki; Heptageniidae (z wyjątkiem rodzajów Epeorus i Rhitrogena); widelnice; ważki; chruściki; Nemouridae; Platycnemididae, Coenagrionidae; Hydroptilidae, 6 muchówki; ślimaki Polycentropodidae; Limoniidae, Simuliidae, Empididae, Neritidae, Bithyniidae Cambaridae; Hydropsychidae, Psychomyidae; Dytiscidae, skorupiaki; chruściki; Gyrinidae, Haliplidae, Hydrophilidae; Mesoveliidae, Nepidae, chrząszcze; pluskwiaki; 5 Naucoridae, Notonectidae, Pleidae, Corixidae, Veliidae; chruściki; muchówki; ślimaki Tipulidae; Hydrobiidae muchówki; ślimaki; małże pijawki; wielkoskrzydłe; ślimaki Ceratopogonidae; Valvatidae, Planorbidae; Sphaeriidae 4 skorupiaki, Glossiphoniidae, Hirudinidae, Erpobdellidae; Asellidae; muchówki; 3 Sialidae; Chironomidae; Ancyllidae, Lymnaeidae, Physidae skąposzczety; muchówki Oligochaeta; Culicidae 2 muchówki Syrphidae, Psychodidae 1 Ocena jakości wód przeprowadzana jest w oparciu o 2 kryteria: wartość indeksu BMWP-PL, oraz wartość indeksu bioróżnorodności. Wartość indeksu BMWP-PL uzyskujemy, sumując punkty przypisane poszczególnym taksonom znalezionym zarówno w próbie jakościowej jak i w próbach ilościowych (Tabela 1). Tak uzyskaną wartość należy odnieść do zakresów BMWP-PL dla pięciu klas jakości (Tabela 2). Tabela 2. Zakresy punktacji klas BMWP-PL (Kownacki, Soszka 2004). Klasa czystości Wartość indeksu BMWP I powyżej 100 II 70 - 99 III 40 - 69 IV 1.10.1939 V poniżej 10 Kolejnym etapem jest obliczenie wskaźnika bioróżnorodności (d) według zmodyfikowanego wzoru Margalefa: d = s / log N gdzie: d – wskaźnik bioróżnorodności, s – liczba rodzin występujących na stanowisku, N – całkowita liczebność fauny (w przeliczeniu na m2) na badanym stanowisku Uzyskaną wartość indeksu bioróżnorodności należy odnieść do pięciostopniowej skali wartości (Tabela 3). Tabela 3. Zakresy wartości klas indeksu bioróżnorodności (Kownacki, Soszka 2004). Zakres indeksu Wartość indeksu d I > 5,50 II 4,00 – 5,49 III 2,50 – 3,99 IV 1,00 – 2,49 V <1 Jeżeli klasa wskazana przez indeks BMWP-PL i klasa wskazana przez indeks bioróżnorodności są takie same to ostateczna klasyfikacja wód na danym stanowisku jest taka, na jaką wskazują indeksy. Jeżeli klasy wskazane przez indeksy różnią się, to jako ostateczną przyjmuje się klasę niższą. Jeżeli jakość wody wskazana na podstawie BMWP-PL i wartość d różnią się o dwie klasy to za końcową klasę przyjmujemy wartość średnią. Według Rozporządzenia Ministra Środowiska z dnia 20 sierpnia 2008 r. w sprawie sposobu klasyfikacji stanu jednolitych części wód powierzchniowych przewiduje się uwzględnianie stanu makrobezkręgowców bentosowych w ocenie klas jakości wód, jednak w momencie jego uchwalania warunki referencyjne (tj. niezakłócone), a przez to wartości liczbowe ewentualnych wskaźników, były jeszcze nieustalone. Wśród proponowanych przez polskich bentologów systemów oceny są: polski indeks biotyczny i zmodyfikowany wskaźnik różnorodności biologicznej Margaleffa. Klasa Wartości BMWP-PL I >100 II 70–99 III 40–69 IV 10–39 V <10 Metodyka pobierania próbek makrofauny bezkręgowej Szczegółowa metodyka pobierania i opracowywania próbek makrofauny bezkręgowej opisana jest w różnych podręcznikach, a w odniesieniu do oceny jakości wód, w odpowiednich normach Polskiego Komitetu Normalizacji, Miar i Jakości (PN 86 C-05550/06) i w normach międzynarodowych (ISO 7828 i ISO 9391, oraz w normach CEN). Próbka to pojedyncza porcja materiału (osadów dennych, roślin, kamieni, wody, lub też zasiedlających je organizmów) pobranego w środowisku. Próba jest to seria próbek pobranych w określonym środowisku, na określonym stanowisku i w jednym czasie; w skrajnym przypadku próbę może stanowić nawet jedna próbka. Próba powinna być reprezentatywna, a więc odzwierciedlać charakter występowania organizmów w środowisku. Tak więc wielkość pojedynczej próbki uzależniona musi być od wielkości występujących w środowisku organizmów, od ich liczebności lub wielkości ich areałów, a liczba próbek od typu przestrzennego rozmieszczenia organizmów. W praktyce oznacza to, że nie można pobierać próbek w celu zbadania występowania np. dużych małży z rodziny skójkowatych (Unionidae), których rozmiary często przekraczają 10 cm, przy użyciu chwytacza dna o średnicy otworu rury poniżej 10 cm. W rzeczywistości tzw. powierzchnia chwytna używanego aparatu musi być dużo większa od powierzchni potencjalnej "zdobyczy". Natomiast pobranie zbyt dużej ilości materiału w praktyce uniemożliwia jego opracowanie. Korzystne jest, aby liczba próbek pobranych jednorazowo na stanowisku była możliwie duża (10-20 to liczba optymalna; przy użyciu aparatów o dużej powierzchni chwytnej może jednak wystarczyć 3 do 5 próbek), gdyż większość organizmów rozmieszczonych jest w środowisku skupiskowo (dwa inne typy rozmieszczenia to rozmieszczenie losowe, bardzo rzadko spotykane, i rozmieszczenie równomierne, w warunkach naturalnych spotykane u organizmów o wyraźnie zaznaczonym terytorializmie). Duża liczba próbek pozwala uniknąć błędów spowodowanych przypadkowym "trafieniem" w skupienie lub w miejsce pomiędzy skupieniami organizmów. Istotne jest również miejsce wyboru stanowiska pobierania próbek, gdyż pewne organizmy są związane z określonymi siedliskami lub mikrosiedliskami, np. na próżno byśmy szukali dużych małży z rodziny skójkowatych na dnie kamienistym, a z drugiej strony małża racicznicy zmiennej (Dreissena polymorpha) na dnie piaszczystym lub mulistym. Jest to o tyle istotne, że czas pobierania materiału jest często ograniczony, a z drugiej strony różny stopień dostępności środowiska może prowadzić do pobierania próbek w miejscu najłatwiej dostępnym, ale niekoniecznie reprezentatywnym dla całości badanego ekosystemu. Duże znaczenie ma też czas pobierania próbek - środek lata jest okresem najbardziej niekorzystnym ze względu na wyloty owadów, a za najbardziej reprezentatywny okres można uważać późną wiosnę. Metoda pobierania próbek uzależniona jest od celu badań. Podstawowym celem jest uzyskanie informacji o składzie taksonomicznym (gatunkowym) organizmów zasiedlających określone środowisko. W tym celu wykorzystujemy najprostsze metody badań, zwane jakościowymi. Duże organizmy w płytkiej wodzie można zbierać pojedynczo, raczej przy pomocy małej siateczki lub pęsety (gdyż niektóre, jak np. duże chrząszcze lub pluskwiaki, mogą boleśnie ukąsić). Do wykorzystywanych urządzeń zaliczamy tu kasarek (Rys.2a) lub jego modyfikację, zapatrzoną w nóż na dolnej, prostej krawędzi - skrobak dna (Rys. 2b). Wielkość otworów siatki kasarka powinna wynosić ok. 0,4-0,5 mm. Kasarkiem pobieramy próbki wśród roślin, energicznie przeciągając nim wielokrotnie w toni wodnej, strącając i zagarniając organizmy, lub zagarniając porcję roślin zanurzonych. Skrobak dna umożliwia, dodatkowo, pobranie porcji osadów dennych. W głębszej wodzie wykorzystujemy ciągnioną po dnie, za łódką lub z brzegu, sieć, tzw. dragę denną (Rys. 2c), obszytą wokół ciężkiej, metalowej, zwykle trójkątnej ramy. Zebrane w ten sposób materiały pozwalają na określenie składu gatunkowego, a jeśli wyizolowane są wszystkie organizmy z pobranej próbki także na określenie zróżnicowania gatunkowego lub struktury dominacji (procentowego udziału poszczególnych gatunków, lub taksonów wyższej rangi w łącznej liczbie zebranych organizmów). Rys. 2. Przyrządy po pobierania jakościowych próbek makrofauny bezkręgowej: a. kasarek; b. skrobak dna; c. draga denna trójkątna Wykorzystując wymienione wyżej urządzenia można również pobierać tzw. próbki półilościowe, pozwalające uzyskać (niezbyt precyzyjne) dane o ilościowym występowaniu danych organizmów. Zgodnie z Rozporządzeniem Ministra Środowiska z dnia 20 sierpnia 2008 roku do oceny jakości wód płynących wykorzystywane są również takie wskaźniki biologiczne jak: fitoplankton, fitobentos, makrofity. Fitoplankton tworzą mikroskopijne organizmy roślinne, głównie glony niższe (organizmy eukariotyczne) oraz sinice (organizmy prokariotyczne), które biernie unoszą się w wodzie – przy powierzchni tafli cieków, zbiorników, bądź wód morskich i oceanicznych, nie posiadające zdolności ruchu lub tylko w znacznie ograniczonym zakresie. Są to organizmy samożywne, zdolne do przeprowadzania procesu fotosyntezy w dobrze oświetlonej, górnej warstwie wód (strefa eufotyczna). W skład fitoplanktonu wchodzą różne grupy taksonomiczne: sinice Cyanophyta, a z glonów, głównie gromady: zielenice Chlorophyta, okrzemkiBacillariophyceae, bruzdnice Dinoflagellata, eugleniny Euglenophyta, chryzofity Chrysophyta, kryptofity Cryptophyta, chloromonady Chloromonadophyta, tobołki Pyrrophyta oraz glukofity Glaucophyta, i in. Fitoplankton jest podstawą większości produkcji biomasy (produkcja pierwotna) w wodach powierzchniowych, który jest podstawowym ogniwem łańcuchów troficznych. W wyniku nadmiernego wzrostu trofii (eutrofizacji) następuje zazwyczaj wzrost biomasy fitoplanktonu, który przy dużym nasilaniu prowadzi do powstawania zakwitów wody. Organizmy te mogą przeprowadzać proces fotosyntezy, m. in. dzięki obecności w ich komórkach specyficznego barwnika chlorofilu „a”, którego zawartość w wodach powierzchniowych, zgodnie z w/w RMŚ, służy do indykacji stanu (potencjału) ekologicznego wód. Głównymi zaletami pomiarów i badań fitoplanktonu w wodach rzek jest łatwość pobierania próbek. Element ten może być istotny dla rzek, w których czas retencji jest wystarczająco długi do podtrzymania rozwoju (np. rzeki nizinne, powyżej zbiorników retencyjnych). Dodatkowo jest to indykator bardzo podatny na zwiększającą się eutrofizację otoczenia, reakcją na którą jest zwiększenie produktywności i tym samym swojej biomasy tworzących go organizmów. Dlatego fitoplankton może być użyteczny jako wskaźnik poziomu produktywności/eutrofizacji, będącej w przeważającej mierze negatywnym skutkiem intensyfikacji antropopresji. Wadą metodyki wykorzystującej plankton roślinny do określenia jakości środowiska wodnego jest z kolei to, że nie jest to element biologiczny stosowany rutynowo w ocenie jakości rzek w UE, a przyjęta metodyka nie jest spójna dla wszystkich Państw Członkowskich. Fitoplankton nie jest zawsze obecny w rzekach płynących (przeważnie jest nieliczny, jedynie w bardzo sprzyjających warunkach rozwoju występuje obficie), ewentualne pomiary i badania utrudniać może jego wysoka mobilność (unoszony jest wraz prądem cieku). Kłopotliwa jest także wysoka zmienność sezonowa (jak i w trakcie trwania danego sezonu) struktury i biomasy biowskaźnika, która zależna jest od szeregu czynników biotycznych i abiotycznych, tj.: klimatu, dostępności substancji biogennych i światła, stabilności i czasu retencji. Powoduje to konieczność częstego pobierania próbek do badań. Ocena większości gatunków nie jest łatwa i wymaga specjalistycznej wiedzy o tej grupie glonów, nie ma również dostępnych referencji do porównania jakości, próbek, bądź stanowisk. Dlatego przydatność tego elementu do klasyfikacji stanu rzek jest niska i zalecana jest raczej dla dużych i wolno płynących cieków. W trakcie badań fitoplanktonu należy zwracać uwagę na następujące parametry wskaźnikowe: skład, liczebność, zakwity, biomasa, obecność wrażliwych taksonów. Parametry wspierające to chlorofil „a”, przepływ, parametry fizykochemiczne (np. temperatura, tlen rozpuszczony, N, P, Si). Przeważnie pobierana jest próbka zintegrowana danego elementu biologicznego ze słupa wody w czasie całego roku. Dalsza identyfikacja następuje podczas analizy laboratoryjnej, gdzie stężenie chlorofilu „a” oznaczana jest przy pomocy metod spektrofotometrii absorpcyjnej cząsteczkowej (przeważnie metoda Utermöhla). Fitoplankton można wykorzystać do oceny stanu wód rzecznych jedynie w niektórych rzekach „fitoplanktonowych” (czyli takich ciekach, gdzie zbiorowiska takie się rozwijają). Są to rzeki z następujących typów abiotycznych: 21 (wielkie rzeki nizinne) oraz do części typu 19 (rzeki nizinne piaszczysto-gliniaste), 20 (rzeki nizinne żwirowe), 24 (rzeki w dolinie zatorfionej) i 25 (rzeki łączące jeziora). Fitobentos – termin ten określa zbiorowiska fotoautotroficznych mikroorganizmów, występujących na dnie i w strefie przydennej wód płynących i stojących, zarówno śródlądowych, jak i morskich (oceanicznych). W przypadku wód słodkich do fitobentosu zaliczyć można sinice Cyanobacteria, rośliny kwiatowe zakorzeniające się w miękkim dnie (ryzobentos) oraz rośliny niższe, głównie glony, wśród których wyróżnić można zielenice Chlorphyta, krasnorosty Rhodophyta, a także okrzemki Bacillariophyceae. Jest to flora denna, która może się rozwijać w płytkich, prześwietlonych miejscach wód (strefa eufotyczna), przez co ich występowanie ograniczone jest praktycznie wyłącznie do strefy brzegowej (litralu, epipelagialu i pseudolitoralu). W Polsce na potrzeby oznaczania stanu ekologicznego cieków w oparciu o fitobentos wykorzystuje się okrzemki. Jest to stosunkowo duża grupa organizmów, licząca około 10000 gatunków. Są to wyłącznie jednokomórkowe formy, przeważnie żyjące pojedynczo, rzadziej w koloniach. Żyją w wodach słodkich i słonych, mogą być też składnikiem planktonu, jednak głównie są składnikiem zbiorowisk dennych i epifitycznych. Poza wodą okrzemki można spotkać w wilgotnych środowiskach, np. między mchami, w glebie i na skałach. Poza niewątpliwą pozytywną rolą dla ekosystemów (np. podstawowe ogniwo łańcucha troficznego, składnik pożywienia drobnych zwierząt wodnych), mogą też powodować zjawiska wysoce negatywne, np. zakwity wody, bądź – w przypadku masowych pojawów – zużywają wielkie ilości związków krzemu (na budowę swych „skorupek” – charakterystycznych ścian komórkowych, zbudowanych z pektyn, silnie wysyconych krzemionką), co powoduje zachwianie proporcji substancji rozpuszczonych w wodzie. Większość ma ściśle określone wymagania siedliskowe, zwłaszcza trofii, zanieczyszczeń organicznych, odczynu i zasolenia, co sprawia, że są dobrymi bioindykatorami stanu środowiska, w tym wód, co sprawiło, że zostały one uwzględnione jako wskaźnik jakości wód powierzchniowych, pomocnego do klasyfikacji stanu/potencjału ekologicznego części wód w Polsce, z grupy fitobentosu. Zaletą badań jakości wód z wykorzystaniem fitobentosu jest stosunkowo niewielki ich koszt, a dodatkowo możliwość wnioskowania na ich podstawie o presji zanieczyszczeń organicznych – substancji biogennych, na dany ekosystem wodny. Problemem jest natomiast identyfikacja gatunkowa tych glonów, gdyż wymaga to specjalistycznej wiedzy i doświadczenia w przeprowadzaniu tego typu badań. Nie ma dostępnych danych referencyjnych do porównania jakości stosowanej metodyki, precyzji wykonanych pomiarów i badań oraz cech stanowisk pomiarowo - obserwacyjnych. Według RMŚ do klasyfikacji stanu/potencjału ekologicznego jednolitych części wód powierzchniowych, w oparciu o fitobentos w tych wodach, służą wyniki tzw. wskaźnika okrzemkowego IO (indeks okrzemkowy). IO przyjmuje wartości od 0 do 1 (wraz ze wzrostem wartości z zera do jedności, jakość środowiska ulega poprawie, tak, że 0 – oznacza zły stan ekologiczny, a 1 – bardzo dobry stan ekologiczny). Podstawą dla IO są wartości wskaźników TI (wskaźnik trofii), SI (wskaźnik saprobii) i GR (wskaźnik obfitości gatunków referencyjnych). Makrofity to stosunkowo wąska grupa wodnych roślin, o rozmiarach co najmniej kilku mm, zakorzenionych w podłożu, związanych z wodami powierzchniowymi śródlądowymi. Jest to umowny podział, a grupę tę można dodatkowo podzielić na klasy i mniejsze jednostki fitosocjologiczne, podstawowe znaczenie mają tu jednak rośliny wodno – błotne, podwodne zakorzenione, podwodne zarodnikowe i plustonowe. Do makrofitów zaliczane są rośliny kwiatowe, paprotniki, mszaki oraz ramienice Charophyceae – specyficzna klasa glonów wyższych z gromady zielenic Chlorophyta. Stan ekologiczny rzek, strug, strumieni i potoków w Polsce oceniany jest na podstawie Makrofitowej Metody Oceny Rzek (MMOR), opartej przede wszystkim na identyfikacji składu gatunkowego (jakościowego i ilościowego) makrofitów, które występują w środowisku wodnym badanego odcinka cieku. Metoda oparta o makrofity pozwala także na przybliżone określenie stopnia degradacji rzek, przede wszystkim poziomu trofii (zanieczyszczeń troficznych), jedno z najistotniejszych obecnie zagrożeń dla wód oraz stan zakwaszania, obecność metali ciężkich lub zmian parametrów hydromorfologicznych cieków. Metoda Oceny Rzek (MMOR) oparta jest o opracowane i stosowane od wielu lat w innych krajach metody: angielską Mean Trophy Rank (MTR) oraz francuską – Indice Biologique Macrophytique en Riviere (IBMR), zmodyfikowane tak, aby dostosować je do potrzeb polskiego monitoringu. MMOR bazuje na obliczeniu wartości wskaźnika biologicznego Makrofitowego Indeksu Rzecznego (MIR). Bazuje on na właściwościach indykacyjnych 149 gatunków/taksonów makrofitów, głownie zakresowi tolerancji ekologicznej, która powoduje, że występują one w ściśle określonym środowisku, spełniającym określone wymogi preferencji życiowych tych roślin. Do podstawowych zalet porostów jako biowskaźników i biomonitorów zanieczyszczenia środowiska należny zaliczyć: - powszechność występowania; szacuje się, że obecnie ok. 8% powierzchni Ziemi pokryte jest porostami, - sposób odżywiania; porosty substancje odżywcze pobierają bezpośrednio z otoczenia: atmosfery i częściowo podłoża (kora, skała), dzięki czemu ograniczona jest wielowymiarowość oddziaływań, np. w porównaniu do roślin korzeniowych, - odporność na wiele rodzajów zanieczyszczeń kumulowanych w ich strukturze biologicznej, przy czym wyraźny próg tolerancji porostów na zanieczyszczenia, co zostało wykorzystane do opracowania popularnych „skal porostowych”, wiążących występowanie danych gatunków porostów z jakością powietrza na badanym obszarze, - zaburzenia homeostazy, wywołane zanieczyszczeniem atmosfery, powodują w porostach wiele mierzalnych zmian: fizjologicznych, anatomicznych oraz morfologicznych, - właściwości sorpcyjne - kumulują w swojej strukturze śladowe ilości pierwiastków, niejednokrotnie świadczące o ich pochodzeniu, np. radionuklidy, - łatwość pozyskiwania próbek porostów - łatwe do transportu i przechowywania. Spośród metod wykorzystujących porosty do oceny zanieczyszczenia środowiska (metod lichenoindykacyjnych) można wyróżnić 4 podstawowe grupy: metody polegające na badaniu różnorodności i liczebności porostów, metody anatomiczno-morfologiczne, metody fizjologiczne metody analityczno-chemiczne. Metody polegające na badaniach różnorodności i liczebno ści porostów najczęściej stosowane są metody korzystające z równych skal porostowych, modyfikowanych dla obszarów geograficznych w zależności od występujących tam gatunków porostów oraz metody polegające na wyznaczaniu tzw. indeksu czystości atmosfery IAP (Index of Atmospheric Purity) Metody anatomiczno-morfologiczne polegają głównie na badaniu zmian w budowie anatomicznej plechy porostów spowodowanych czynnikami antropogenicznymi. Porównywany jest na przykład udział żywych i martwych komórek glonów oraz szybkość ich obumierania. W metodach tych najczęściej wykorzystywana jest technika transplantacji porostów, która polega na przeniesieniu porostów z obszarów mało zanieczyszczonych i ekspozycji na badanych obszarach, głównie miejskich i przemysłowych. Metody fizjologiczne polegają na ocenie zmian aktywności procesów życiowych zachodzących w porostach pod wpływem toksyn zawartych w powietrzu. Przykładem jest pomiar zmian konduktywności wody po zanurzeniu w niej porostów, wywołany wyciekaniem jonów z wnętrza komórek wskutek uszkodzenia błon komórkowych. Bada się takŜe intensywność wydzielania etylenu, nadmiernie wytwarzanego przez porosty pod wpływem toksyn. Często badanym wskaźnikiem są zmiany aktywności fotosyntetycznej glonów (wraz z grzybami tworzącymi porosty). Do tego celu stosowane są metody fluorescencyjne, które można wykorzystywać w terenie (in situ), unikając w ten sposób możliwych zmian fizjologicznych, wywołanych transportem oraz przechowywaniem porostów. Metody analityczno-chemiczne polegają na analizie składu chemicznego porostów: mikro- i makropierwiastków kumulowanych w ich strukturze biologicznej. Na tej podstawie wyznacza si ę strefy zanieczyszczenia środowiska oraz bada źródła i kierunki rozprzestrzeniania się tych polutantów. Celem prezentowanego artykułu było zebranie i usystematyzowanie informacji na temat budowy porostów, kierunków badań i stosowanych metod badawczych, wykorzystywanych do oceny stanu zanieczyszczenia środowiska na podstawie analizy składu chemicznego porostów. Porosty występują na wszystkich kontynentach. Zasiedlają niedostępne dla innych roślin obszary Arktyki i Antarktydy, nawet skały wznoszące się nad lądolodem. Licznie reprezentują florę tundry i tajgi, zasiedlają obszary wysokogórskie oraz lasy tropikalne. Ze względu na rodzaj podłoża, na którym rosną, dzieli się je na : - porosty ubikwistyczne, rosnące na różnym podłożu, do których zaliczana jest m.in.: pustułka pęcherzykowata (Hypogymnia physodes) i chrobotek kieliszkowaty (Cladonia chlorophaea), - porosty epigeiczne (naziemne), np.: płucnica islandzka (Cetraria islandica) i chrobotek leśny (Cladonia sylvatica), - porosty epilityczne (naskalne), np.: misecznica murowa (Lecanora muralis) i wzorzec geograficzny (Rhizocarpon geographicum), - porosty epifityczne (nadrzewne), np.: włostka kędzierzawa (Bryoria crispa) i Mąklik otrębiasty (Pseudevernia furfuracea), - porosty epifiliczne, rosnące na liściach roślin naczyniowych, w Polsce tylko Catillaria boutellei, - porosty epibryofityczne, rosnące na martwych łodyżkach i listkach mchów, często także na innym podłożu organicznym (szczątki roślin naczyniowych), np.: Absconditella annexa i Caloplaca aurea, - porosty epilichenofityczne, porosty Ŝyjące na plechach innych porostów, np.: Buellia bada i Protothelenella leucothelia, - porosty epiksyliczne, porosty murszejącego drewna, np.: Biatorella flavella i Buellia erubescens. Na podstawie zewnętrznych cech morfologicznych porostów wyróżnia się kilka form plechy: proszkowatą, skorupkowatą, plakodiową, łuskowatą, listkowatą, wełniastą, krzaczkowatą. W badaniach lichenoindykacyjnych plechy porostów zazwyczaj dzieli się na trzy podstawowe formy: skorupiaste, do których należą m.in.: Brunatka kropkowata (Buellia punctata) i Liszajec zwyczajny (Lepraria incana), listkowate, np.: Pustułka pęcherzykowata (Hypogymnia physodes) i Tarczownica bruzdkowana (Parmelia sulcata) i krzaczkowate, np.: Mąkla tarniowa (Evernia prunastri) lub Brodaczka zwyczajna (Usnea filipendula). Do badań lichenoindykacyjnych najczęściej wykorzystywane są porosty epifityczne (nadrzewne), a w badaniach laboratoryjnych, w których np. oznacza się skład chemiczny porostów, wykorzystuje się dające się łatwo oddzielić od podłoża, dobrze wykształcone formy nadrzewnych porostów listkowatych i krzaczkowatych. W badaniach lichenoindykacyjnych wykorzystuje się znajomość gatunków porostów do oceny stanu sanitarnego powietrza, czyli określania stopnia zanieczyszczenia powietrza dwutlenkiem siarki, tlenkami azotu i fluorowodorem. Porosty są organizmami kumulującymi metale ciężkie i pierwiastki radioaktywne (radionuklidy). Używa się ich jako biotestów w rejonach przemysłowych i wielkich aglomeracjach miejskich. Substancje toksyczne wpływają na porosty bezpośrednio lub pośrednio. Przy oddziaływaniu bezpośrednim najsłabszym punktem jest aparat fotosyntetyczny glonów porostowych, w którym chlorofil ulega degradacji i zostaje unieczynniony (zamienia się w nieaktywny fotosyntetycznie związek zwany feofityną). Dzieje się to w silnie zakwaszonym środowisku wewnątrz komórkowym. Duże stężenie SO 2 sprzyja temu, co w krótkim czasie powoduje obumarcie wszystkich glonów w plesze i śmierć porostu. Przy mniejszych stężeniach następują zmiany w budowie wewnętrznej komórek i w przepuszczalności błon plazmatycznych, co ułatwia wnikanie toksyn do wnętrza. Pyły, jeżeli są emitowane w dużych ilościach, niszczą plechy w sposób mechaniczny, okrywając je grubą warstwą uniemożliwiają wymianę gazową i ograniczają dostęp światła do komórek glonów. Ponadto toksyny zawarte w pyłach rozpuszczają się w wodzie i w roztworach przenikają do wnętrza plech porostów. Pośrednie działanie szkodliwych związków to zmiana warunków siedliskowych, np. zakwaszenie podłoża, na którym rosną porosty. Istnieje wyraźna korelacja między stężeniem SO 2 w powietrzu a odczynem kory drzew. W warunkach miejskich odczyn kory często obniża się o 2-3 jednostki, co eliminuje wszystkie lub większość porostów. Zakwaszenie kory powoduje, że na pniach drzew o korze z natury obojętnej lub słabo zasadowej, takich jak topole i wierzby, pojawiają się porosty kwasolubne (acidofilne), które w naturalnych warunkach nigdy na tych drzewach nie występują. Stwierdzenie takiego faktu podczas monitoringu jest dowodem nie najlepszej sytuacji aerosanitarnej. Największy walor bioindykacyjny mają porosty nadrzewne, natomiast gatunki rosnące na pozostałych podłożach są do badań bioindykacyjnych wykorzystywane zwykle jako materiał pomocniczy, a czasem w ogóle pomijane. Wynika to z faktu, że - poza epifitami - porosty z innych podłoży, a zwłaszcza naziemne i naskalne, są w dużej mierze uzależnione od składu chemicznego minerałów, na których rosną i które mogą w znacznym stopniu niwelować wpływ zanieczyszczeń. Przykładowo, liczne gatunki naskalne, które pospolicie rosną na betonie, tynkach i dachówkach, występują nawet w obrębie stref o bardzo wysokim stężeniu toksykantów, ponieważ zawierające węglan wapnia podłoże ma dużą zdolność buforowania kwaśnych zanieczyszczeń. Stosowanie porostów jako bioindykatorów emisji ma w porównaniu z roślinami wiele zalet: porosty nie posiadają szparek ani kutikuli, tym samym nie mogą regulować wymiany gazowej; ponieważ nie posiadają one systemu wydalania, nie mogą usuwać pobranych, głównie w postaci roztworów, substancji szkodliwych, co powoduje kumulację i wzrost stężeń substancji szkodliwych w ich plechach; porosty umożliwiają ocenę wpływu emisji przemysłowych również w okresie zimowym, czego nie zabezpieczają inne rośliny poza drzewami iglastymi (wyj. modrzew), w związku z czym nadają się one szczególnie do oceny długookresowego oddziaływania zanieczyszczeń. Opracowana w Anglii skala porostowa jest stosowana również w Polsce, w wersji dopasowanej do środkowoeuropejskich warunków klimatycznych. Skala ta precyzyjnie odpowiada średnim stężeniom SO 2 w powietrzu (średnim rocznym lub średnim w okresie zimy). Opiera się na porostach epifitycznych, które rosną na pniach drzew liściastych i iglastych, oraz różnej wrażliwości tych gatunków na stężenia SO2 w powietrzu. Powszechne ubożenie lichenoflory w miastach i ośrodkach przemysłowych traktuje się jako stałą cechę tych środowisk. Najpoważniejszą przyczyną wymierania porostów są zanieczyszczenia powietrza. Dwutlenek siarki, tlenki azotu i inne związki są emitowane do atmosfery z lokalnych źródeł lub nanoszone niejednokrotnie z dużych odległości. Wiele porostów usuwanych jest podczas poszerzania dróg wraz ze starymi drzewami, przy których rosną. Całe populacje roślinności zielnej oraz porostów naziemnych są niszczone w czasie wycinania lasów tzw. zrębami zupełnymi. Działanie człowieka w bezpośredni sposób niszczące stanowiska porostów to obok gospodarowania lasami: eksploatacja wapieni, bazaltów i głazów narzutowych, kopalnictwo odkrywkowe, wydeptywanie muraw wysokogórskich, zbieractwo do celów ozdobnych itd. Niebezpieczne są również środki chemiczne stosowane w rolnictwie. Literatura: W: Barbara Kawecka, Pertti Vesa Eloranta: Zarys ekologii glonów wód słodkich i środowisk lądowych. Warszawa: Wydawnictwo Naukowe PWN, 1994, January Weiner: Życie i ewolucja biosfery. Podręcznik ekologii ogólnej. Warszawa: PWN, 1999, s. 104 W: Winfried Lampert, Ulrich Sommer: Ekologia wód śródlądowych. tłum. Joanna Pijanowska. Warszawa: Wydawnictwo Naukowe PWN, 2001, Alicja Szweykowska: Fizjologia roślin. Poznań: Wydawnictwo Naukowe Uniwersytetu im. Adama Mickiewicza, 2002, Stanisław Więckowski: Fotosynteza. Warszawa: W: Encyklopedia Biologiczna. Agencja Publicystyczno-Wydawnicza Opres, 1998. Hanna Wójciak: Porosty, mszaki, paprotniki. Warszawa, PWN 2011 Fałtynowicz, W., 2003, The Lichens, lichenicolous and allied fungi of Poland - an annotated checklist. Krytyczna lista porostów i grzybów naporostowych Polski. IB PAN. Kraków. Krzysztof Szoszkiewicz, Szymon Jusik, Tomasz Zgoła: Klucz do oznaczania makrofitów dla potrzeb oceny stanu ekologicznego wód powierzchniowych. Warszawa: Inspekcja Ochrony Środowiska, 2010, seria: Biblioteka Monitoringu Środowiska. Rozporządzenie Ministra Środowiska z dnia 20 sierpnia 2008 r. w sprawie sposobu klasyfikacji stanu jednolitych części wód powierzchniowych