ORIENTACYJNY HARMONOGRAM ĆWICZEŃ Z MIKROBIOLOGII ŻYWNOŚCI II ROK BIOPROCESY I BIOINŻYNIERIA - 2015/2016 Ćwiczenie 1 (6 października 2015) 1. Zasady bezpiecznej pracy w laboratorium – teoria i pokaz. 2. Laboratorium mikrobiologiczne i technika pracy laboratoryjnej – sterylizacja i dezynfekcja, podstawowa aparatura mikrobiologiczna, urządzenia do hodowli drobnoustrojów, drobny sprzęt – pokaz. 3. Ogólne zasady mycia oraz jałowienia szkła, sprzętu, podłoży i powierzchni – teoria. 4. Posiew metodą odciskową na szalkę z agarem odżywczym (1 szalka na 2 osoby). Ćwiczenie 2 (13 października 2015) 1. Mikroskop – budowa i technika mikroskopowania – pokaz i omówienie, samodzielne ćwiczenia. 2. Obserwacja mikroskopowa preparatów drożdży/spiruliny – preparat przyżyciowy. 3. Pożywki hodowlane – składniki pożywek, rodzaje pożywek – teoria. 4. Charakterystyka wzrostu na podłożu płynnym i stałym – analiza koloni z ćwiczenia 1 (barwy, profilu, brzegu kolonii itp.). 5. Posiewy – przeszczepianie wybranych koloni z podłoża stałego na skos bulionowy (1 skos/osobę). 6. Przygotowanie preparatu do barwienia negatywowego. 7. Izolacja Bacillus z gleby (4 probówki na grupę). Ćwiczenie 3 (20 października 2015) 1. Morfologia bakterii. 2. Technika wykonywania preparatu mikrobiologicznego – wykonanie rozmazu z bakterii namnożonych na skosie. 3. Barwienia – proste i złożone, pozytywowe i negatywowe. Teoria. 4. Oglądanie preparatów po barwieniu metodą negatywną z poprzednich ćwiczeń. 5. Barwienie proste fioletem krystalicznym przygotowanego rozmazu i oglądanie pod mikroskopem immersyjnym. 6. Barwienie złożone metodą Grama – teoria. 7. Posiew redukcyjny Bacillus z podłoża płynnego na agar odżywczy na płytce (4 szalki z AO na grupę). Ćwiczenie 4 (27 października 2015) 1. Kolokwium nr 1 (laboratorium, mikroskop, pożywki, barwienia, preparaty) 2. Ogólna charakterystyka ziarniaków i bakterii cylindrycznych - teoria. 3. Bakterie przetrwalnikujące Bacillus i Clostridium – metody identyfikacji, pożywki wzrostowe, właściwości. 4. Barwienie złożone metodą Grama – Micrococcaceae i Bacillus – oglądanie, analiza, porównanie i charakterystyka ziarniaków i laseczek. 5. Test na katalazę na ziarniakach i wyizolowanych bakteriach z rodzaju Bacillus. 6. Charakterystyka enzymatyczna mikroorganizmów. Określanie właściwości amylolitycznych, proteolitycznych, lipolitycznych i celulolitycznych drobnoustrojów gleby (2 zestawy podłoży na grupę). 7. Określanie ruchu bakterii w kropli wiszącej (Bacillus). 8. Posiew bakterii Bacillus na podłoże płynne do wykrywania mikroorganizmów redukujących azotany (4 probówki na grupę). 9. Fermentacja masłowa – teoria. Ćwiczenie 5 (3 listopada 2015) 1. Ocena właściwości redukcyjnych azotanów – odczyt wyników posiewów z poprzednich zajęć (z odczynnikiem Griessa). 2. Odczyt posiewów na właściwości enzymatyczne Bacillus. 3. Barwienie przetrwalników bakterii Bacillus met. Schaeffera-Fultona – teoria i wykonanie preparatu. 4. Charakterystyka bakterii z rodziny Enterobacteriaceae – podłoża diagnostyczne, morfologia, fizjologia. Barwienie metodą Grama wybranych gatunków (E. coli). 5. Bakterie octowe Acetobacteraceae i fermentacja octowa – teoria, morfologia, fizjologia. Barwienie metodą Grama wybranych gatunków. Ćwiczenie 6 (10 listopada 2015) 1. Morfologia i charakterystyka promieniowców – obserwacja wyglądu morfologicznego koloni na podłożu stałym, odbarwianie podłoża. 2. Barwienie promieniowców metodą Grama. 3. Barwienie promieniowców kwasoopornych metodą Ziehl-Nielsena. 4. Antybiotyki i ich wpływ na mikroorganizmy – oznaczanie zdolności do wytwarzania antybiotyku przez wybrane szczepy promieniowców – teoria. 5. Ocena umiejętności manualnych – wykonanie preparatu, barwienia, interpretacja obrazu spod mikroskopu Ćwiczenie 7 (17 listopada 2015) 1. Oddanie karty pracy nr 1 2. Drożdże – charakterystyka ogólna. Morfologia komórek drożdżowych. Ocena morfologii kolonii wybranych gatunków drożdży (m.in. Rhodotorula, Kluyveromyces, S. cerevisiae, Kloeckera, Schizosaccharomyces) – wstęp teoretyczny. 3. Preparaty przyżyciowe wybranych gatunków drożdży (m.in. Rhodotorula, Kluyveromyces, S. cerevisiae, Kloeckera, Schizosaccharomyces) – ocena kształtu, wielkości komórek, pączkowania. 4. Metody pomiaru wielkości komórek. Wykonanie pomiaru wielkości komórek Kluyveromyces i Saccharomyces metodą prostą na papierze milimetrowym. Obliczenia. 5. Test na żywotność (na starych drożdżach S. cerevisiae z gęstwy). 6. Test na odżywienie komórek drożdży. 7. Badanie wybranych szczepów drożdży: testy asymilacyjne i fermentacyjne (4 zestawy na grupę). Ćwiczenie 8 (24 listopada 2015) 1. Odczyty testów asymilacyjnych i fermentacyjnych z poprzednich ćwiczeń. 2. Ocena zarodnikowania drożdży z podłoża octanowego (met. Schaeffera-Fultona). 3. Zakażenia drożdżami dzikimi, drożdże killerowe – teoria. 4. Metody ilościowego określania drobnoustrojów. Liczenie komórek drożdży piekarskich (z gęstwy) w komorze Thoma, w preparacie przyżyciowym (bezpośrednim). 5. Ogólna charakterystyka organelli Eukaryota. 6. Barwienia organelli drożdży: jądra metodą Piekarskiego, mitochondriów i przyżyciowe barwienie wakuoli. 7. Barwienie materiałów zapasowych: glikogenu, wolutyny, tłuszczu (stare drożdże). 8. Założenie hodowli pleśni na materiale naturalnym (zadanie domowe studentów). Ćwiczenie 9 (1 grudnia 2015) 1. Ogólna charakterystyka, morfologia i właściwości grzybów pleśniowych. 2. Makroskopowe preparaty przyżyciowe pleśni: Rhizopus, Geotrichum, Aspergillus, Mucor, Alternaria, Penicillium, Trichoderma, Fusarium, Cladosporium 3. Interpretacja preparatów z własnych hodowli grzybów pleśniowych. Ćwiczenie 10 (8 grudnia 2015) 1. Kolokwium nr 2 (bakterie, grzyby) 2. Oddanie karty pracy nr 2 3. Mikroflora powietrza – teoria i posiewy powietrza metodą sedymentacyjną Kocha – 15 minut ekspozycji (8 szalek AO + 8 szalek AB na grupę). Analiza ilościowa mikroorganizmów – metody hodowlane. 4. Mikroflora gleby – teoria i posiewy z gleby na promieniowce, grzyby, saprofity i bakterie przetrwalnikujące (3 zestawy podłoży na grupę). Ćwiczenie 11 (15 grudnia 2015) 1. Odczyty posiewów z gleby – liczenie koloni i przeliczenie ilości poszczególnych grup mikroorganizmów na 1 g gleby. 2. Odczyty posiewów powietrza – liczenie koloni i przeliczenie ilości poszczególnych grup mikroorganizmów na 1 m3 powietrza. 3. Mikroflora wody – teoria. Pobieranie próbek wody. 4. Określanie liczby bakterii psychro- i mezofilnych w wodzie studziennej, rzecznej i kranowej (podział na 3 podgrupy, każda wykonuje oznaczenia w innej wodzie). 5. Oznaczanie bakterii grupy coli metodą fermentacyjno-probówkową w wodzie studziennej, rzecznej i kranowej (3 zestawy na grupę). Ćwiczenie 12 (22 grudnia 2015) 1. Odczyty posiewów z wody – liczenie koloni i określanie liczby bakterii psychro- i mezofilnych, szacunkowe wyznaczanie miana coli. 2. Posiew potwierdzający z prób LPB na agar Endo (2 podłoża ENDO na grupę). 3. Fermentacja mlekowa – wiadomości teoretyczne. 4. Określanie jakości kiszonek. Przygotowanie preparatów mikroskopowych mleka zsiadłego, jogurtu, kefiru, żurku, soku z kiszonej kapusty i zalewy spod ogórków kiszonych. Barwienie Grama, rysunki, wnioski dot. jakości kiszonek (stosunek drożdże : bakterie, pH). 5. Oznaczanie liczby bakterii w mleku, próba reduktazowa dla mleka – teoria. 6. Posiewy mleka w celu rozróżnienia enterokoków od paciorkowców mlekowych (4 zestawy na grupę – bez grup piątkowych). Ćwiczenie 13 (5 stycznia 2016) 1. Odczyty posiewów z mleka, określenie liczby mikroorganizmów w mleku. 2. Odczyty z ENDO. 3. Mikroflora opakowań. 4. Analiza czystości mikrobiologicznej opakowań – metoda popłuczyn (3 zestawy), metoda odciskowa (4 podgrupy), metoda tamponowa (4 podgrupy), metoda Richtera (1 zestaw na grupę). Ćwiczenie 14 (12 stycznia 2016) 1. Odczyty posiewów z opakowań, wyliczanie efektu dezynfekcyjnego, obliczanie skażenia powierzchni papieru do pakowania żywności. 2. Mikroflora mięsa oraz przetworów z owoców i warzyw – teoria i posiewy z mięsa świeżego i zepsutego, przecieru pomidorowego świeżego i zepsutego (4 podgrupy). Ćwiczenie 15 (19 stycznia 2016) 1. Kolokwium nr 3 (mikrobiologia środowisk, surowców, opakowań, fermentacja mlekowa) 2. Odczyty posiewów z mięsa i surowców roślinnych 3. Oddanie karty pracy nr 3 4. Ocena wpływu środków konserwujących na drobnoustroje – utrwalanie żywności - teoria. 5. Badanie skuteczności utrwalania – temperatura, UV, pH i antybiotyki - teoria. 6. Ocena skuteczności dezynfekcji przez UV na E. coli – teoria 7. Ocena wrażliwości E. coli na różne środki dezynfekujące – teoria 8. Ocena wrażliwości różnych organizmów na roztwory fenolu – teoria