ANALIZA ŻYWNOŚCI Bezpieczeństwo instalacji wodnych Bakterie Aeromonas sp. nowy wskaźnik mikrobiologiczny? DOROTA KRĘGIEL, ANNA RYGAŁA akterie Aeromonas sp. występują głównie w naturalnych zbiornikach wodnych, u ujścia rzek lub w wodach morskich. Wykrywano je w systemach dystrybucji wody, a także w wodzie destylowanej. Są one często izolowane z produktów żywnościowych: ryb, mleka i produktów mlecznych, warzyw, a nawet butelkowanej wody mineralnej. Charakteryzują je silne właściwości adhezyjne. B PORTAL - www.sigma-not.pl Zjawisko adhezji Adhezja (przyleganie) poprzedza wzrost bakterii w postaci biofilmu zarówno w organizmie zakażonym, jak i na powierzchniach abiotycznych. Warunkują ją molekularne interakcje między powierzchnią bakterii a powierzchnią kolonizowanych materiałów. U bakterii Gram-ujemnych za te oddziaływania są odpowiedzialne głównie fimbrie, glikokaliks (otoczka polisacharydowa) i warstwa S (dodatkowa warstwa osłonowa). Fimbrie (pilusy) to nitkowate białkowe struktury eksponowane na powierzchni komórki bakteryjnej. U bakterii patogennych są one odpowiedzialne za rozpoznanie, a następnie specyficzne związanie odpowiedniego receptora eukariotycznego [2]. Wytwarzanie zewnątrzkomórkowych związków – polisacharydów inicjuje zjawisko agregacji komórek. Ponadto egzopolisacharydy chronią komórki przed niekorzystnym wpływem warunków zewnętrznych, np. zmianami ciśnienia osmotycznego, pH, brakiem substancji odżywczych, działaniem promieni UV, środków dezynfekcyjnych i antybiotyków [5, 13, 14]. Synteza egzopolisacharydów jest stymulowana w środowiskach ubogich w składniki odżywcze. Uważa się, że zewnątrzkomórkowe białka oraz węglowodany są źródłem monomerów oraz podstawowych pierwiastków, które mogą być wykorzystywane do utrzymania podstawowych funkcji życiowych komórek. Mikroorganizmy w warunkach głodowych szybciej ulegają adsorpcji do powierzchni, a szybkość desorpcji jest prawie równa zeru. Na zjawisko adhezji może mieć istotny wpływ wiek komórek bakteryjnych. Największą przyczepność komórek do powierzchni obserwowano we wczesnej fazie stacjonarnej [6]. U większości bakterii Gram-ujemnych występuje białkowa struktura osłonowa zwana warstwą S. Pośredniczy ona w przyłączaniu się patogenów do komórek nabłonkowych i ma wpływ na osłabienie odpowiedzi immunologicznej gospodarza [8]. Na powstawanie biofilmów ma także wpływ rodzaj i charakter powierzchni. Powierzchnie hydrofobowe, szorstkie, nieregularne są szybciej zasiedlane przez drobnoustroje niż materiały o powierzchni 46 Streszczenie. Pałeczki należące do rodzaju Aeromonas wykazują podobne właściwości biochemiczne jak pałeczki z grupy coli. Mogą wywoływać choroby u zwierząt i ludzi, a ponadto charakteryzują je silne właściwości adhezyjne. Wzrost tych bakterii w systemach dystrybucji wody prowadzi zwykle do tworzenia biofilmów. Oznaczanie bakterii Aeromonas sp. w wodzie nie jest obligatoryjne. Jednak wyniki badań mikrobiologicznych wody sugerują uznanie tych bakterii jako wskaźników potencjalnej kolonizacji systemów dystrybucji wody pitnej. Summary. Bacteria belonging to Aeromonas genera show biochemical features similar to coliforms. They are opportunistic pathogens, revealing strong adhesion to both biotic and abiotic surfaces. Their growth in distribution systems usually leads to the formation of biofilms. Detection of Aeromonas sp. in water is not obligatory. However, the microbiological results suggest that Aeromonas should be analyzed as indicator of potential regrowth in water distribution systems. Słowa kluczowe: Aeromonas sp., adhezja, wirulencja, systemy dystrybucji wody Key words: Aeromonas sp., adhesion, virulence, water distribution systems gładkiej. Zależność ta może być również determinowana wielkością komórki mikroorganizmu. Jeżeli jej wymiary są większe niż wielkość porów danej powierzchni, adhezja może być utrudniona. Dotyczy to zwłaszcza komórek grzybów, których wymiary są znacznie większe niż wymiary bakterii [5-7]. Bakterie Aeromonas sp. Wśród bakterii Gram-ujemnych charakteryzujących się silnymi uzdolnieniami adhezyjnymi na uwagę zasługują pałeczki z rodzaju Aeromonas (rys. 1). Te ruchliwe bakterie mają podobne uzdolnienia biochemiczne jak pałeczki z rodziny Enterobacteriaceae (tabela). Tabela. Wybrane cechy biochemiczne Aeromonas sp. i Escherichia coli [1] Aeromonas Escherichia coli Cecha biochemiczna Barwienie Grama caviae hydrophila veronii – – – – Oksydaza + + + – Tworzenie indolu (I) + + + + Właściwości kwasotwórcze (MR) + + + + Tworzenie acetoiny (VP) – + + – Asymilacja cytrynianu d* d* + – β-galaktozydaza (ONPG) + + + + d* 25-75% wyników pozytywnych Przemys³ Spo¿ywczy 11/2008 ANALIZA ŻYWNOŚCI Rys. 1. Bakterie z rodzaju Aeromonas widoczne w preparacie mikroskopowym trwa³ym Rys. 2. Adhezja komórek Aeromonas do powierzchni abiotycznej Rys. 3. Utworzony biofilm Za ruchliwość Aeromonas sp. są odpowiedzialne dwa typy urzęsienia: polarne i peritrichalne. Polarne urzęsienie umożliwia komórce bakteryjnej poruszanie się w środowisku płynnym. W pewnych, określonych warunkach aeromonady wytwarzają rzęski peritrichalne. Urzęsienie takie zwiększa zdolności adhezyjne bakterii do komórek eukariotycznych oraz tworzenia biofilmów na powierzchniach abiotycznych (rys. 2, 3) [12]. U Aeromonas sp. warstwa S i glikokaliks uodporniają komórki na surowicę, chronią je przed enzymami proteolitycznymi gospodarza oraz zapobiegają fagocytozie przez makrofagi [2, 17]. Szczepy Aeromonas sp. wytwarzają wiele takich czynników, np. ciepłochwiejną cytotoksynę, aktywne aerolizyny lub hemolizyny, lipazy zawierające GCAT, proteazę serynową oraz DNA-azy. Omawiane bakterie, podobnie jak inne bakterie patogenne, mają zdolność pozyskiwania żelaza z ustroju gospodarza za pośrednictwem sideroforów – niskocząsteczkowych związków wykazujących powinowactwo do żelaza (tzw. chelatorów żelaza) [15]. Pałeczki z rodzaju Aeromonas mogą wywoływać choroby u zwierząt i ludzi. Uważane są za najistotniejszy czynnik etiologiczny zakażeń ryb. Badania wykazały, że szczepy patogenne Aeromonas sp. miały prawie 20 razy większą zdolność przylegania do skóry karpi niż szczepy niepatogenne [9]. Dla człowieka znaczenie kliniczne mają przede wszystkim trzy gatunki: Aeromonas hydrophila, A. caviae i A. veronii. Szczepy te mogą wywoływać choroby układu pokarmowego u dzieci, osób starszych oraz u osób z osłabionym systemem immunologicznym [10]. Odpowiedzialne są również za zapalenie tkanki łącznej i zakażenia ran, ostrą biegunkę sekrecyjną, zakażenia układu moczowego, wątroby i dróg żółciowych, opon mózgowo-rdzeniowych, a nawet posocznicę [16]. Aeromonas sp., ze względu na naturalne środowisko występowania, są odpowiedzialne za tzw. regrowth, czyli wtórne zanieczyszczenia wody pitnej spowodowane kolonizacją mikroorganizmów w różnych systemach dystrybucji wody [4]. Omawiane bakterie są zdolne nie tylko do przeżywania, ale i namnażania w wodzie o niskiej temperaturze (od –2 do +10°C). W takich warunkach mogą także wytwarzać czynniki wirulencji* [3]. Izolację pałeczek z rodzaju Aeromonas ze środowisk wodnych można prowadzić metodą filtracji membranowej na wybiórczych pożywkach agarowych, np. stosując podłoże GSP lub jego modyfikacje [11]. Biorąc pod uwagę obecność wielu czynników wirulencji, zdolność namnażania w wodzie o niskiej temperaturze oraz silne właściwości adhezyjne, należy rozważyć możliwość włączenia pałeczek Aeromonas sp. jako nowego wskaźnika mikrobiologicznego, zwłaszcza w kontroli funkcjonowania systemów instalacji wodnych. Dotyczy to zwłaszcza sieci wodociągowej, systemów dystrybucji wody oraz linii rozlewniczych, zwłaszcza pod kątem zagrożenia kolonizacją bakterii Gram-ujemnych [10]. LIDERZY HANDLU... rozwojowych Grupa przewiduje dalszą ekspansję hurtowni do ponad 150 miast liczących powyżej 25 tys. mieszkańców, rozszerzenie portfela sieci zintegrowanych z tymi hurtowniami oraz aktywne uczestnictwo w procesie przejęć kolejnych hurtowni. Nie precyzuje ona skali planowanych przedsięwzięć, ogranicza się jedynie do określenia zamierzeń na następny rok (np. na 2008 r. zaplanowano przyrost 6-10 hurtowni Eurocash, 60-70 sklepów Delikatesy Centrum) [3]. (dokończenie ze s. 7) w zakresie dystrybucji produktów impulsowych. Pozwoliło to Grupie na wejście na nowe obszary rynku, takie jak obsługa sklepów convenience przy stacjach benzynowych i restauracji. Ponadto możliwości własnego zaplecza logistycznego oraz dobre relacje ze sklepami IGA (należącymi do Mc Lane) powinny korzystnie wpłynąć na dalszą ekspansję sieci Delikatesy Centrum (dotychczas obejmującą swym zasięgiem działania region Polski południowo-wschodniej). Grupa przewiduje dalsze aktywne uczestnictwo w procesach konsolidacji rynku hurtowego mając świadomość licznych zagrożeń płynących z integracji. W ostatnim okresie główne jej działania były związane z modernizacją i remodelingiem samoobsługowych hurtowni Eurocash, rozbudową sieci Delikatesy Centrum, a także ze wsparciem organizacyjnym niezależnych sklepów ABC. W planach Przemys³ Spo¿ywczy 11/2008 * Wirulencja – zjadliwość drobnoustrojów – zdolność wniknięcia, rozmnożenia/namnożenia się oraz uszkodzenia tkanek zainfekowanego organizmu przez określony typ patogenu. Poszczególne szczepy danego gatunku mogą różnić się wirulencją. Od redakcji: Wykaz literatury prześlemy zainteresowanym Czytelnikom e-mailem, faksem lub pocztą. Korespondencję prosimy kierować na adres: [email protected] Dr inż. D. Kręgiel, mgr inż. A. Rygała – Instytut Technologii Fermentacji i Mikrobiologii, Politechnika Łódzka Opracowano na podstawie: [1] Lista 500 największych firm w Polsce w 2007 r. Dodatek do „Rzeczpospolitej” z 25 kwietnia 2008 r. Raport o rynku franczyzowym FMCG w Polsce w 2008 r. Akademia Rozwoju Systemów Sieciowych. http://www.franczyzawpolsce.pl [2] http://www.emperia [3] http://www.eurocash.com.pl Dr E. Maleszyk – Instytut Badań Rynku, Konsumpcji i Koniunktur, Warszawa 47