Zamierzone uwolnienie GMO Tytuł Zamierzone uwolnienie GMO Opis Wniosek o wydanie decyzji w sprawie zamierzonego uwolnienia GMO Dane ogólne INFORMACJE OGÓLNE O WNIOSKU Numer wniosku 02-08/2010 Status zgłoszenia Wydano decyzję Data zgłoszenia 2010-01-08 Znak decyzji DOPgmo-431-146/6778/10/jryb Data wydania decyzji 2011-05-21 Data obowiązywania decyzji 2014-12-31 Data upublicznienia 2010-07-27 Numer decyzji 02-01/2011 Numer uchwały 50/2010 Tytuł zamierzonego uwolnienia Wniosek o przeprowadzenie badań polowych w latach 2010-2014 z genetycznie zmodyfikowanymi liniami topoli (Populus trichocarpa L.), charakteryzującymi się zmienionymi właściwościami przyrostu biomasy drewna Title Application of genetically modified poplar trees (Populus trichocarpa L.) with changed biomass production properties into field experiments during 2010-2014 Cel zamierzonego uwolnienia Celem doświadczeń w warunkach polowych jest: charakterystyka morfologiczna i fizjologiczna, szczególnie w aspekcie przyrostu rocznego drewna, kompozycji ściany komórkowej, zużycia wody, odporności na zmienne warunki pogodowe, zimową przeżywalność i naturalnie występujące w środowisku roślinne patogeny. Celem prowadzenia badań laboratoryjnych na materiale z warunków polowych jest: poznanie mechanizmów programowej śmierci komórki i starzenia się roślin, poprzez regulację wydajności procesów oddychania i fotosyntezy w mitochondriach i chloroplastach oraz transdukcji sygnałów pomiędzy tymi organellami. Światło, jego percepcja oraz spektralna kompozycja odgrywa szczególną rolę w tych mechanizmach. Tylko warunki polowe potwierdzą współzależności zachodzące na poszczególnych poziomach regulacji komórkowej podstawowych procesów życiowych roślin. Geny, które szczególnie wpływają na procesy przez nas badane to: LSD1, PAD4, EDS1, CAO1, MPK4 oraz nowe geny zidentyfikowane w regulonie LSD1. Celem aplikacyjnym w przyszłości będzie produkcja drewna, papieru, etanolu z roślin o podwyższonej odporności i zwiększonym przyroście biomasy w warunkach ograniczonego do minimum zużycia szkodliwych chemicznych środków ochrony roślin. Abstract The aim of the field experimental releasing GMO is a morphological and physiological analysis of genes which take a part in various biological processes: biomass production, cell wall composition, water use Strona 1 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO efficiency, resistance to biotic and abiotic stresses. The aim of the laboratory experiments using GMO plant material from field experiments is knowledge about programmed cell death and plant senescence based on photorespiration, photosynthesis mechanisms in mitochondria, chloroplasts and signal transduction between these organelles. Light perception and its spectral composition takes a main part in these mechanisms. Field experiments can prove correlations occur on each level of basic plant living processes regulation. Genes that influence on above processes are under our interest: LSD1, PAD4, EDS1, CAO1, MPK4 and new genes discovered in LSD1 regulon. In a future, application aim of the project is production of wood, paper and ethanol (bio-fuel) using plants confer higher pathogen resistance and biomass production and reduction in the use of plant protection toxic chemicals. Strona 2 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Użytkownik 1.INFORMACJE O UŻYTKWONIKU GMO I OSOBACH ODPOWIEDZIALNYCH ZA PRZYGOTOWANIE I PRZEPROWADZENIE ZAMIERZONEGO UWOLNIENIA 1.1. Nazwa i siedziba lub nazwisko i adres użytkownika GMO Dane osoby prawnej Nazwa użytkownika Szkoła Główna Gospodarstwa Wiejskiego w Warszawie, Wydział Ogrodnictwa i Architektury Krajobrazu, Katedra Genetyki, Hodowli i Biotechnologii Roślin Kod pocztowy 02-776 Miejscowość Warszawa Ulica Nowoursynowska Numer budynku 159 Numer lokalu ..................................... Adres e-mail [email protected] Telefon 22 59-321-72 Faks 22 59-321-52 1.2. Imię i nazwisko oraz informacja o kwalifikacjach fachowych osoby (osób) odpowiedzialnej za przygotowanie i przeprowadzenie zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska Dane osoby odpowiedzialnej Tytuł naukowy Prof. dr hab. Imię pracownika Stanisław Nazwisko pracownika Karpiński Telefon 22 59-321-72 Faks 22 59-321-52 Adres e-mail [email protected] Kwalifikacje zawodowe pracownika udział w badaniach z użyciem GMO: 1. Transgenic control of photosynthetic electron transport, oxygen and hydrogen peroxide production in higher plants VR (Swedish Research Council - Szwedzki Komitet Badań Naukowych - S. Karpiński był kierownikiem projektu, 2050 tys. koron szwedzkich w latach 1998 - 2004). 2. Genetic control of biotic and abiotic stress tolerance and redox signalling circuitry in higher plants. FORMAS (Swedish Research Council for Environment, Agricultular Sciences and Spatial Planning Szwedzka Rada Badań Środowiska, Nauk Rolniczych i Zagospodarowania Przestrzennego – S. Karpiński był kierownikiem projektu, 940 tys. koron szwedzkich w latach 2003 - 2005). 3. The role of NPR1 in redox-mediated communication between pathogen resistance and excess light acclimation pathways in Arabidopsis. FORMAS (Swedish Research Council for Environment, Agricultular Sciences and Spatial Planning - Szwedzka Rada Badań Środowiska, Nauk Rolniczych i Zagospodarowania Przestrzennego – S. Karpiński był kierownikiem projektu, 580 tys. koron szwedzkich w latach 2004 - 2006). 4. Genes and light Strona 3 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO mechanisms controlling plants growth rate, development, environmental stress tolerance and yield quality. VR (Swedish Research Council – Szwedzki Komitet Badań Naukowych - S. Karpiński jest kierownikiem projektu, 1350 tys. koron szwedzkich w latach 2005-2008). 5. Swedish Strategic Fundation – Szwedzka Fundacja Celowych Badań Podstawowych Arabidopsis platform (S. Karpiński był kierownikiem projektu, 450 tys. koron szwedzkich w latach 1998–2001). 6. Knut och Alice Wallenberg Foundation – Fundacja Knut och Alice Wallenberg, Arabidopsis platform (S. Karpiński był kierownikiem projektu, 750 tys. koron szwedzkich w latach 2001-2002). 7. Genes involved in regulation of stress tolerance and redox signaling circuitry in higher plants. A coordinated Swedish – U.K. interdisciplinary STINT fellowship program on higher plants (Swedish Agency for International Collaboration in Higher Education and Research). Interdyscyplinarny bilateralny szwedzko-brytyjski projekt badawczy roślin wyższych (Szwedzka Agencja Współpracy Międzynarodowej i Szkolnictwa Wyższego). S. Karpiński był kierownikiem i koordynatorem badań tego projektu; 3150 tys. koron szwedzkich w latach 2002 - 2005). Współpraca pomiędzy zespołami prof. PM Mullineaux i prof. Z Miszalskiego 8. Projekt UE „Cropstress” project (QLAM-2001-00424, lata 2003-2005). Udział w projekcie obejmował miedzyinnymi współpracę między Instytutem Fizjologii Roślin PAN (Zakład Biologii Stresu, prof. Z. Miszalski), który uzyskał tytuł Centrum Doskonałości i Department of Botany at the Stockholm University (Laboratory of Oxidative Stress, prof. S. Karpinski – Instytutem Botaniki Uniwersytetu Sztokholmskiego – Laboratorium Stresu Oksydacyjnego). Tytuł naukowy Dr hab. Imię pracownika Marcin Nazwisko pracownika Filipecki Telefon 22 59-321-78 Faks 22 59-321-52 Adres e-mail [email protected] Kwalifikacje zawodowe pracownika Osoba bezpośrednio odpowiedzialna za zamierzone uwolnienie GMO do środowiska Strona 4 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Uwolnienie 2. INFORMACJE O ZAMIERZONYM UWOLNIENIU GMO DO ŚRODOWISKA a) Tytuł zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska Wniosek o przeprowadzenie badań polowych w latach 2010-2014 z genetycznie zmodyfikowanymi liniami topoli (Populus trichocarpa L.), charakteryzującymi się zmienionymi właściwościami przyrostu biomasy drewna Title Application of genetically modified poplar trees (Populus trichocarpa L.) with changed biomass production properties into field experiments during 2010-2014 b) Cel zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska i krótkie streszczenie Celem doświadczeń w warunkach polowych jest: charakterystyka morfologiczna i fizjologiczna, szczególnie w aspekcie przyrostu rocznego drewna, kompozycji ściany komórkowej, zużycia wody, odporności na zmienne warunki pogodowe, zimową przeżywalność i naturalnie występujące w środowisku roślinne patogeny. Celem prowadzenia badań laboratoryjnych na materiale z warunków polowych jest: poznanie mechanizmów programowej śmierci komórki i starzenia się roślin, poprzez regulację wydajności procesów oddychania i fotosyntezy w mitochondriach i chloroplastach oraz transdukcji sygnałów pomiędzy tymi organellami. Światło, jego percepcja oraz spektralna kompozycja odgrywa szczególną rolę w tych mechanizmach. Tylko warunki polowe potwierdzą współzależności zachodzące na poszczególnych poziomach regulacji komórkowej podstawowych procesów życiowych roślin. Geny, które szczególnie wpływają na procesy przez nas badane to: LSD1, PAD4, EDS1, CAO1, MPK4 oraz nowe geny zidentyfikowane w regulonie LSD1. Celem aplikacyjnym w przyszłości będzie produkcja drewna, papieru, etanolu z roślin o podwyższonej odporności i zwiększonym przyroście biomasy w warunkach ograniczonego do minimum zużycia szkodliwych chemicznych środków ochrony roślin. Abstract The aim of the field experimental releasing GMO is a morphological and physiological analysis of genes which take a part in various biological processes: biomass production, cell wall composition, water use efficiency, resistance to biotic and abiotic stresses. The aim of the laboratory experiments using GMO plant material from field experiments is knowledge about programmed cell death and plant senescence based on photorespiration, photosynthesis mechanisms in mitochondria, chloroplasts and signal transduction between these organelles. Light perception and its spectral composition takes a main part in these mechanisms. Field experiments can prove correlations occur on each level of basic plant living processes regulation. Genes that influence on above processes are under our interest: LSD1, PAD4, EDS1, CAO1, MPK4 and new genes discovered in LSD1 regulon. In a future, application aim of the project is production of wood, paper and ethanol (bio-fuel) using plants confer higher pathogen resistance and biomass production and reduction in the use of plant protection toxic chemicals. Strona 5 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Biorca 3. INFORMACJE O GMO a) Charakterystyka biorcy; organizmu rodzicielskiego (o ile występuje) 3.1. Nazwa taksonomiczna Żadna z powyższych Jeżeli w powyższym słowniku wybrana została wartość "Żadne z powyższych" należy wypełnić pole: Populus trichocarpa L. 3.2. Taksonomia Rodzina: Salix Rodzaj: Salicaceae Gatunek: Populus trichocarpa; Domena: Bakterie Klasa: Gammaprobacteria Rząd: Enterobacteriales Rodzina: Enterobacteriaceae Rodzaj: Escherichia Gatunek: Escherichia coli; Domena: Bakterie Klasa: Alphaproteobacteria Rząd: Rhizobiales Rodzina: Rhizobiaceae Rodzaj: Agrobacterium Gatunek: Agrobacterium tumefaciens 3.3. Inne nazwy (w szczególności: nazwa zwyczajowa, nazwa szczepu, nazwa hodowlana) Rośliny: 1. topola – topola kalifornijska (gatunek dziki); rośliny transgeniczne topoli kalifornijskiej. Bakterie: 1. szczepy laboratoryjne E. coli : DB3.1, DH5α, XL1-Blue MRF’, TOP10F’ 2. szczepy laboratoryjne A. tumefaciens: EHA105, LBA4404. 3.4. Cechy fenotypowe i genetyczne Cechy fenotypowe topoli odpowiadają cechom typowym dla każdego z gatunków i odmianowym. Cechy fenotypowe topoli transgenicznych pochodzą z laboratorium Umea Plant Science Center, SLU Umea, Szwecja (www.upsc.se). Cechy bakterii są typowe dla danego szczepu: - (Plant Genetic Transformation and Gene Expression. Eds. J. Draper, R. Scott, P. Armitage, R. Walden. 1988. Blackwell Sci. Publ.; Hellens R., Mullineaux P. Technical Focus: A guide to Agrobacterium binary Ti vectors. 2000. Trends in Plant Sci. 5: 446-451.) 3.5. Stopień pokrewieństwa pomiędzy dawcą i biorcą lub między organizmami rodzicielskimi Sekwencje pochodzące z danego gatunku są przenoszone do tego samego gatunku (punkt 3.1). Bakterie są zdolne do przenoszenia materiału genetycznego w kontrolowanych warunkach laboratoryjnych, w wyniku zastosowania specjalnie do tego celu opracowanych procedur. 3.6. Opis technik identyfikacji i detekcji Detekcja transgenu metodą PCR i metodą hybrydyzacji DNA::DNA (Southern) z użyciem całkowitego DNA roślinnego 3.7. Dokładność, powtarzalność i specyficzność technik identyfikacji i detekcji ................................................................................................................................................................................ 3.8. Opis geograficznego zasięgu i naturalnego środowiska organizmu wraz z informacją o naturalnych wrogach, ofiarach, pasożytach, konkurentach, symbiontach i gospodarzach ................................................................................................................................................................................ 3.9. Możliwość przeniesienia informacji genetycznej do innych organizmów. Krzyżowanie z innymi gatunkami użytkowymi lub dzikimi ................................................................................................................................................................................ 3.10. Stabilność genetyczna organizmów i czynniki na nią wpływające ................................................................................................................................................................................ Strona 6 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO 3.11. Cechy patologiczne, ekologiczne i fizjologiczne a) cechy patologiczne, stosownie do istniejących norm dotyczących ochrony zdrowia ludzi lub ochrony środowiska ................................................................................................................................................................................ b) wymiana pokoleń w naturalnym ekosystemie; płciowe i bezpłciowe cykle reprodukcyjne ................................................................................................................................................................................ c) zdolność do samodzielnego utrzymania się w środowisku, w tym wytwarzanie diaspor między innymi przez nasiona, spory. Specyficzne czynniki wpływające na przeżywalność i rozsiewanie ................................................................................................................................................................................ d) patogenność: infekcyjność, toksyczność, alergenność, nośniki (wektory) patogenów, inne wektory, wpływ na organizmy nieobjęte celowym działaniem GMO. Możliwość aktywacji wirusów utajonych (prowirusów); zdolność do kolonizacji innych organizmów ................................................................................................................................................................................ e) oporność na antybiotyki i możliwość wykorzystywania tych antybiotyków w leczeniu ludzi i zwierząt i w profilaktyce ................................................................................................................................................................................ f) rola w procesach środowiskowych, produkcja, przemiany metaboliczne, rozkład materii organicznej, inne ................................................................................................................................................................................ 3.12. Charakterystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Ogólna chcrakterystyka wcześniej wprowadzonych wektorów ................................................................................................................................................................................ a) sekwencja ................................................................................................................................................................................ b) częstotliwość użytkowania ................................................................................................................................................................................ c) specyficzność ................................................................................................................................................................................ d) obecność genów nadających oporność ................................................................................................................................................................................ 3.13. Opis wcześniejszych modyfikacji genetycznych ................................................................................................................................................................................ Strona 7 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Dawca 3. INFORMACJE O GMO b) Charakterystyka dawcy 3.14. Nazwa taksonomiczna Żadna z powyższych Jeżeli w powyższym słowniku wybrana została wartość "Żadne z powyższych" należy wypełnić pole: Rośliny: - Populus trichocarpa L. – sekwencje genów uczestniczących w odpowiedzi rośliny na stresy biotyczne i abiotyczne. Bakterie: - Agrobacterium tumefaciens – wektor insercyjny pH7GWIWG2(I). 3.15. Taksonomia Rodzina: Salix Rodzaj: Salicaceae Gatunek: Populus trichocarpa; Domena: Bakterie Klasa: Alphaproteobacteria Rząd: Rhizobiales Rodzina: Rhizobiaceae Rodzaj: Agrobacterium Gatunek: Agrobacterium tumefaciens 3.16. Inne nazwy (w szczególności: nazw zwyczajowa, nazwa szczepu, nazwa hodowlana) ................................................................................................................................................................................ 3.17. Cechy fenotypowe i genetyczne Cechy fenotypowe topoli odpowiadają cechom typowym dla każdego z gatunków i odmian. Cechy bakterii są typowe dla danego szczepu: - (Plant Genetic Transformation and Gene Expression. Eds. J. Draper, R. Scott, P. Armitage, R. Walden. 1988. Blackwell Sci. Publ.; Hellens R., Mullineaux P. Technical Focus: A guide to Agrobacterium binary Ti vectors. 2000. Trends in Plant Sci. 5: 446-451.) 3.18. Stopień pokrewieństwa pomiędzy dawcą i biorcą lub między organizmami rodzicielskimi Sekwencje pochodzące z danego gatunku są przenoszone do tego samego gatunku (punkt 3.1). Bakterie są zdolne do przenoszenia materiału genetycznego w kontrolowanych warunkach laboratoryjnych, w wyniku zastosowania specjalnie do tego celu opracowanych procedur. 3.19. Opis technik identyfikacji i detekcji Nie dotyczy 3.20. Dokładność, powtarzalność i specyficzność technik identyfikacji i detekcji Nie dotyczy 3.21. Opis geograficznego zasięgu i naturalnego środowiska organizmu wraz z informacją o naturalnych wrogach, pasożytach, konkurentach, symbiontach i gospodarzach Topola kalifornijska to odmiana użytkowa, stosowana w praktyce, jest również modelową rośliną laboratoryjną. Agrobacterium tumefaciens jest bakterią glebową. 3.22. Możliwość przeniesienia informacji genetycznej do innych organizmów Krzyżowanie z innymi gatunkami użytkowymi lub dzikimi Nie dotyczy 3.23. Stabilność genetyczna organizmów i czynniki na nią wpływające Nie dotyczy, ponieważ w badaniach nie będą wykorzystane organizmy dawców, a tylko sekwencje DNA z nich pochodzące. 3.24. Cechy epidemiologiczne (patologiczne i fizjologiczne oraz ekologiczne) Strona 8 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO a) cechy patologiczne, stosownie do istniejących norm dotyczących ochrony zdrowia ludzi lub ochrony środowiska Nie dotyczy, ponieważ w badaniach nie będą wykorzystane organizmy dawców, a tylko sekwencje DNA z nich pochodzące. b) Wymiana pokoleń w naturalnym ekosystemie; płciowe i bezpłciowe cykle reprodukcyjne Nie dotyczy c) zdolność do samodzielnego utrzymania się w środowisku, w tym wytwarzanie diaspor między innymi przez nasiona, spory. Specyficzne czynniki wpływające na przeżywalność i rozsiewanie Nie dotyczy d) patogenność: infekcyjność, toksyczność, alergenność, nośniki (wektory) patogenów, inne wektory, wpływ na organizmy nieobjęte celowym oddziaływaniem GMO; możliwość aktywacji wirusów utajonych (prowirusów); zdolność do kolonizacji innych organizmów Nie dotyczy e) oporność na antybiotyki i możliwość wykorzystywania tych antybiotyków w leczeniu ludzi i zwierząt i w profilaktyce Nie dotyczy f) rola w procesach środowiskowych, produkcja, przemiany metaboliczne, rozkład materii organicznej, inne Nie dotyczy 3.25. Charakterystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Charaktetystyka wcześniej wprowadzonych wektorów Nie dotyczy a) sekwencja Nie dotyczy b) częstość mobilizacji Nie dotyczy c) specyficzność Nie dotyczy d) obecność genów nadających oporność Nie dotyczy 3.26. Opis wcześniejszych modyfikacji genetycznych Rośliny dawcy nie były wcześniej modyfikowane genetycznie. Stosowane szczepy laboratoryjne bakterii są dostępne komercyjnie na rynku, mają ściśle określony genotyp i są powszechnie stosowane w laboratoriach UE. Strona 9 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Wektor 3. INFORMACJE O GMO c) Charakterystyka wektora 3.27. Właściwości i źródło wektora Wektory binarne: pH7GWIWG2(I) - wektor oparty na systemie Gateway. M., Inze, D., Depicker, A., Gateway vectors for Agrobacterium-mediated plant transformation. Trends Plant Sci. 2002 May;7(5): 193-195. Wektory pośrednie: pCRII-TOPO pENTR - Komercyjne wektory stosowane do klonowania sekwencji DNA w laboratoryjnych szczepach E. coli. Dostępne w firmie Invitrogen (www.invitrogen.com). 3.28. Sekwencja transpozonów, wektorów i innych niekodujących odcinków genetycznych, użytych do konstrukcji GMO i zrobienia wektorów wprowadzających oraz pozwalających na ich funkcjonowanie w GMO Wektory binarne: pH7GWIWG2(I) - wektor oparty na systemie Gateway. Jest powszechnie używany do transformacji roślin. Zawiera sekwencje graniczną T-DNA (tzw. prawą i lewą), genów selekcyjny warunkujący oporność na higromycynę. Ekspresja genów warunkowana jest sekwencjami promotorowymi: promotorem 35S CaMV. Koniec transkrypcji warunkowany jest sygnałem poliadenylacji z syntazy nopalinowej. M., Inze, D., Depicker, A., Gateway vectors for Agrobacterium-mediated plant transformation. Trends Plant Sci. 2002 May;7(5): 193-195. Wektory pośrednie: pCRII-TOPO pENTR - Komercyjne wektory stosowane do klonowania sekwencji DNA w laboratoryjnych szczepach E. coli. Są to powszechnie używane plazmidy do badań w biologii molekularnej wielu różnych organizmów. W swojej strukturze zawierają sekwencje odpowiedzialne za amplifikację w komórce bakteryjnej (ORI), gen warunkujący oporność na antybiotyk, sekwencje umożliwiające łatwe klonowanie insertów. Wszystkie te wektory są dostępne komercyjnie w firmie Invitrogen. 3.29. Częstość mobilizacji wbudowanego wektora lub zdolność przenoszenia i metody określenia tych procesów Fragment wbudowanego do chromosomu wektora (tzn. T-DNA) nie ulega dalszej mobilizacji 3.30. Informacje o tym, w jakim stopniu wektor jest ograniczony do DNA wymaganego do spełnienia planowanych funkcji Wektor został skonstruowany tak, aby zminimalizować ilość DNA niepotrzebnego do procesu transgenezy. Do GMO wprowadzany jest odcinek T-DNA ograniczony sekwencjami LB i RB (left border, right border) w pojedynczej lub wielu kopiach. Strona 10 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO GMO 3. INFORMACJE O GMO d) Charakterystyka GMO 3.31. Informacje związane z modyfikacjami genetycznymi a) metody modyfikacji ................................................................................................................................................................................ b) metody konstrukcji i wprowadzenia insertu bądź insertów do biorcy lub usunięcia sekwencji ................................................................................................................................................................................ c) opis insertu i/ lub konstrukcji wektora ................................................................................................................................................................................ d) metody użyte do selekcji ................................................................................................................................................................................ e) czystość insertu - obecność sekwencji o nieznanych funkcjach ................................................................................................................................................................................ f) sekwencja, lokalizacja i funkcja wprowadzonych/ usuniętych/ zmienionych fragmentów DNA, ze szczególnym odniesieniem do jakiejkolwiek znanej szkodliwej sekwencji ................................................................................................................................................................................ g) umiejscowienie insertu w komórce (chromosomy, mitochondria, chloroplasty, cytoplazma) i metody identyfikacji umiejscowienia insertu ................................................................................................................................................................................ h) wielkość usuniętego fragmentu i jego funkcje ................................................................................................................................................................................ 3.32. Informacje o uzyskanym GMO Informacje o uzyskanym GMO Wykonywane doświadczenia polowe z GMO należą do badań podstawowych. Celem badań jest analiza funkcjonalna genów biorących udział w różnych w/w procesach u wymienionych gatunków. Obserwacje i wnioski mogą być wysnute tylko na podstawie zmian fenotypowych transgenicznych roślin. a) opis zmienionych cech genetycznych i fenotypowych GMO Technologia RNAi. b) struktura i liczba kopii każdego wektora lub dodanego kwasu nukleinowego w GMO Transformacja komórek roślinnych niżej wymienionych gatunków odbywa się metodą pośrednią z użyciem wektorów tj. Agrobacterium tumefaciens: 1. Populus trichocarpa L. Komórki Agrobacterium transformowane są plazmidami za pomocą elektroporacji. Komórki E. coli za pomocą metody szoku cieplnego. c) stabilność genetyczna i fenotypowa Insert stanowią sekwencje cDNA kodujące białka związane z odpowiedzią roślin na stresy biotyczne i abiotyczne w orientacji sens-intron-antysens, generujące w roślinie sygnał wyciszający (RNAi). Strona 11 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO d) charakterystyka i poziom ekspresji nowego materiału genetycznego; metody i czułość pomiaru; części organizmu, gdzie występuje ekspresja (np. korzeń) Do selekcji transgenicznych linii topoli wykorzystany został gen oporności na higromycynę (htp II). e) funkcja nowego białka Nie stwierdzono sekwencji o nieznanych funkcjach. f) techniki identyfikacji i detekcji wprowadzonej sekwencji, wektorów i białka oraz metabolitów będących produktami wprowadzonego genu ................................................................................................................................................................................ g) czułość, wiarygodność (w rozumieniu ilościowym) i specyficzność technik identyfikacji i detekcji ................................................................................................................................................................................ h) zmiany współczynnika rozmnożenia, zdolności do rozsiewania i przeżywalności GMO w porównaniu do organizmu biorcy ................................................................................................................................................................................ 3.33. Opis wcześniejszych uwolnień GMO ................................................................................................................................................................................ 3.34. Ustalenia zdrowotne Ustalenia zdrowotne ................................................................................................................................................................................ a) efekty toksyczne lub alergiczne GMO lub produktów ich metabolizmu ................................................................................................................................................................................ b) produkty stwarzające zagrożenie ................................................................................................................................................................................ c) porównanie GMO z dawcą, biorcą lub organizmem rodzicielskim (o ile występuje), w odniesieniu do patogenności ................................................................................................................................................................................ d) zdolność do kolonizacji ................................................................................................................................................................................ e) patogenność organizmu dla ludzi, którzy są immunokompetentni (o sprawnym układzie odpornościowym) ................................................................................................................................................................................ f) wywołane dolegliwości i mechanizm patogenności, włączając inwazyjność i złośliwość (zjadliwość) choroby ................................................................................................................................................................................ g) zaraźliwość (zakaźność) ................................................................................................................................................................................ h) dawka infekcyjna ................................................................................................................................................................................ Strona 12 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO i) zakres gospodarzy i możliwość ich zmiany ................................................................................................................................................................................ j) możliwość przeżycia poza organizmem gospodarza ................................................................................................................................................................................ k) obecność wektorów lub możliwość rozprzestrzeniania się ................................................................................................................................................................................ l) stabilność biologiczna ................................................................................................................................................................................ m) formy oporne na antybiotyki ................................................................................................................................................................................ n) możliwość leczenia ................................................................................................................................................................................ Strona 13 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Warunki uwolenienia 4. Informacje dotyczące warunków zamierzonego uwolnienia GMO do środowiska a) Informacje o zamierzonym uwolnieniu do środowiska 4.1. Opis proponowanych zamierzonych uwolnień do środowiska, zawierający zamierzone i przewidywane skutki Planowane jest założenie doświadczenia w 1 lokalizacji Lokalizacja - Pole doświadczalne WOLICA; Katedra Genetyki Hodowli i Biotechnologii Roślin; ul. Nowoursynowska 92/100, 02-130 Warszawa, województwo mazowieckie. Doświadczenia prowadzone będą zgodnie z ustaloną metodyką. Wyprowadzone w warunkach in vitro sadzonki drzew topoli (transgenicznych i kontrolnych) będą przesadzane do odchwaszczonej mechanicznie (i w razie potrzeby chemicznie) ziemi, przykrytej szczelnie czarną agrotkaniną odporną na działanie UV o szerokości 445 cm. W agrotkaninie wykonane zostaną otwory rozstawie 100cmx100cm, w dwóch rzędach (odległość od brzegów agrotkaniny wynosić będzie 172,5cm) o średnicy ok. 10 cm umożliwiające swobodny wzrost roślin. Przewidziane jest wysadzenie 30 roślin, stąd pas przykrytej ziemi będzie miał długość: 1845 cm (172,5cm + 15x100 cm + 172,5cm). Rośliny w razie potrzeby nawożone będą raz na miesiąc pożywką Hoaglanda. Zimowanie roślin odbywać się będzie bez dodatkowych zabezpieczeń w warunkach naturalnych. 4.2. Dane dotyczące zamierzonego uwolnienia do środowiska a) termin zamierzonego uwolnienia początek ..................................... koniec ..................................... czas uwolnienia 15.09. 2010 (rozpoczęcie) – 31.12.2014 (zakończenie). b) charakter zamierzonego uwolnienia (jednorazowe, wielokrotne, czasowe) Wielokrotne na lata 2010-2014. 4.3. Przygotowanie miejsca i jego charakterystyka Teren ogrodzony, typowy ekosystem rolny, przygotowany standardowo do wysadzania 1-2 letnich topól. 4.4. Metody używane do uwolnienia do środowiska Ręczne wysadzanie młodych drzew topoli . 4.5. Planowana ilość uwolnionego do środowiska GMO ................................................................................................................................................................................ 4.6. Zmiany siedliska (typ i metoda uprawy, nawadnianie lub inne działania i ich znaczenie) 120 roślin 4.7. Sposoby ochrony pracowników w czasie zamierzonego uwalniania GMO do środowiska Nie dotyczy 4.8. Traktowanie terenu po zakończeniu uwolnienia do środowiska GMO (typ i metoda uprawy, nawadnianie lub inne działania i ich znaczenie) Nie występują żadne zagrożenia 4.9. Przewidywane techniki eliminacji lub inaktywacji GMO po zakończeniu eksperymentu Strona 14 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Podczas eksperymentu i po jego zakończeniu teren będzie kontrolowany co najmniej dwa razy w tygodniu 4.10. Informacje i wyniki dotyczące wcześniejszego wprowadzenia do środowiska GMO, zwłaszcza w różnych skalach i różnych ekosystemach Nie dotyczy Strona 15 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Środowisko 5. CHARAKTERYSTYKA ŚRODOWISKA, DO KTÓREGO MA NASTĄPIĆ ZAMIERZONE UWOLNIENIE GMO 5.1. Jednostka podziału administracyjnego, lokalizacja geograficzna Jednostka podziału administracyjnego, lokalizacja geograficzna Lokalizacja - Pole doświadczalne WOLICA; Katedra Genetyki Hodowli i Biotechnologii Roślin; ul. Nowoursynowska 92/100, 02-130 Warszawa, województwo mazowieckie. Województwo 5.2. Wielkość terenu mazowieckie Teren liczy 60 000 m2 pola, na którym prowadzone są uprawy roślin warzywnych. 1200 m2 liczy teren, na którym będzie prowadzone zamierzone uwolnienie GMO do środowiska 5.3. Fizyczne lub biologiczne pokrewieństwo uwalnianego organizmu z ludźmi lub innymi ważnymi organizmami (gatunki pokrewne dzikie i użytkowe) Nie ma pokrewieństwa 5.4. Sąsiedztwo ważnych biotopów lub obszarów chronionych Nie dotyczy 5.5. Odległość od najbliższego obszaru chronionego wody pitnej i obiektów wyróżniających się cennymi walorami przyrodniczymi Nie dotyczy 5.6. Charakterystyka klimatyczna regionu Nie ma specjalnych wymagań. Warunki klimatyczne typowe dla rejonów, gdzie rosną topole. 5.7. Charakterystyka geograficzna, geologiczna i gleboznawcza Warunki geologiczno-glebowe typowe dla rejonów, gdzie rosną topole. 5.8. Flora i fauna, włączając rośliny uprawne, żywy inwentarz i gatunki wędrowne Flora i fauna charakterystyczna dla warunków klimatycznych środkowej Europy 5.9. Opis ekosystemów będących i niebędących celem wprowadzenia, na których może wystąpić efekt Nie oczekujemy żadnych zmian w ekosystemach. 5.10. Porównanie naturalnego środowiska organizmu biorcy z proponowanym terenem uwolnienia do środowiska Środowisko identyczne 5.11. Informacja o planowanych zmianach zagospodarowania terenu i planach rozwoju regionu, które mogą mieć wpływ na środowiskowe oddziaływanie zamierzonego uwolnienia Nie planujemy zmian zagospodarowania terenu. 5.12. Liczebność społeczności lokalnej w zależności od obszaru zamierzonego uwolnienia Nie określona, ze względu na brak jakiegokolwiek zagrożenia. Strona 16 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO 5.13. Główne kierunki działalności gospodarczej społeczności lokalnej, korzystającej z naturalnych zasobów obszaru Działalność badawcza w zakresie roślin modelowych (topola), standardowo wykorzystywanych w badaniach funkcji genów. Działalność doświadczalna w ramach statutowych badań Katedry Genetyki, Hodowli i Biotechnologii Roślin. Strona 17 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Oddziaływanie 6. Informacje o oddziaływaniach między GMO a środowiskiem a) Charakterystyka oddziaływań środowiska na przeżycie, rozmnażanie i rozpowszechnianie GMO 6.1. Cechy biologiczne mające wpływ na przetrwanie, rozmnażanie i rozprzestrzenianie Topola jest rośliną obcopylną. Gatunki te nie krzyżują się z innymi gatunkami dzikimi. Ponadto topola nie wytwarza organów generatywnych do 9-12 roku życia. 6.2. Cechy biologiczne mające wpływ na przetrwanie, rozmnażanie i rozprzestrzenianie Przedmiotem badań są transgeniczne linie topól, których geny związane z odpowiedzią na stresy biotyczne i abiotyczne zostały wyciszone, czyli nie spełniają swoich funkcji. Podlegają one wpływom środowiska w takim samym stopniu jak odmiany nietransgeniczne, a linie z wyłączoną funkcją genów są bardziej wrażliwe na bodźce środowiskowe. 6.3. Wrażliwość na specyficzne warunki Temperatura, herbicydy. b) Oddziaływanie ze środowiskiem 6.4. Przewidziane środowisko GMO Ekosystem rolny. 6.5. Wyniki badań nad zachowaniem i charakterystyką GMO w kontrolowanych warunkach wzrostu, takich jak laboratoryjnie odtworzone ekosystemy, komory wzrostu, cieplarnie i inne Badania transgenicznych roślin topól w warunkach szklarniowych dają gwarancję braku jakiegokolwiek negatywnego wpływu na otoczenie. 6.6. Zdolność przenoszenia materiału genetycznego a) z GMO do organizmów występujących w ekosystemie Topola nie wytwarza organów generatywnych do 9-12 roku życia. Planujemy zakończenie doświadczeń przed pojawieniem się organów generatywnych. b) z organizmów występujących w ekosystemie do GMO Topola jest rośliną obcopylną. Gatunki te nie krzyżują się z innymi gatunkami dzikimi. Zapylenie przez inną odmianę możliwe, ale nie pociąga za sobą żadnych negatywnych skutków. 6.7. Prawdopodobieństwo selekcji, po uwolnieniu do środowiska, prowadzące do nieoczekiwanej ekspresji niepożądanych cech w GMO Geny, które są modyfikowane u topoli występują naturalnie w genomie tej rośliny, nie wprowadzamy nowych genów z innych gatunków, czy odmian. Nie przewidujemy wystąpienia cech innych niż zakładane. 6.8. Stosowane środki dla zabezpieczenia i sprawdzenia stabilności genetycznej; opis mechanizmów genetycznych, które mogą zapobiegać lub minimalizować rozprzestrzenianie się materiału genetycznego; metody sprawdzania stabilności genetycznej Metody weryfikujące stabilność genetyczną. Southern i northern blot są używane rutynowo do analizy genomowego DNA transgenicznych roślin. 6.9. Szlaki biologicznego rozprzestrzeniania, znane lub potencjalne sposoby rozsiewania, włączając wdychanie, przyjmowanie pokarmu, przenikanie przez glebę lub skórę, inne Strona 18 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Nie dotyczy 6.10. Opis ekosystemów, do których GMO mógłby |być przeniesiony Nie dotyczy c) Potencjalny wpływ na środowisko 6.11. Możliwość nadmiernego rozmnażania w środowisku Nie dotyczy 6.12. Konkurencyjność GMO w stosunku do niezmodyfikowanych biorców lub organizmów rodzicielskich Nie dotyczy 6.13. Identyfikacja i opis organizmów objętych celowym oddziaływaniem GMO ................................................................................................................................................................................ 6.14. Przewidywany mechanizm i rezultaty oddziaływania między GMO a organizmem objętym celowym oddziaływaniem GMO Nie dotyczy 6.15. Identyfikacja i opis innych organizmów, na które mogą wpływać niezamierzone oddziaływania Nie dotyczy 6.16. Prawdopodobieństwo zmian biologicznych oddziaływań lub zmiany gospodarza Nie dotyczy 6.17. Znane lub przewidywane wpływy na organizmy nieobjęte celowym oddziaływaniem GMO w środowisku, zmiany konkurencyjności w stosunku do ofiar, gospodarzy, symbiontów, wrogów, pasożytów i patogenów Nie dotyczy 6.18. Możliwy wpływ na środowisko, wynikający z wzajemnego oddziaływania GMO i organizmów nieobjętych celowym oddziaływaniem GMO Nie dotyczy 6.19. Możliwe pozytywne i negatywne cechy u innych krzyżujących się gatunków, które mogą ujawniać się na skutek przeniesienia genów z GMO Nie dotyczy 6.20. Znany lub przewidywany udział w procesach biogeochemicznych Nie dotyczy 6.21. Inne potencjalnie możliwe interakcje i zależności ze środowiskiem biotycznym i abiotycznym Nie dotyczy Strona 19 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Pracownicy 7. INFORMACJE DOTYCZĄCE PRZYGOTOWANIA ZAWODOWEGO PRACOWNIKÓW 7.1. Imię i nazwisko oraz informacje o kwalifikacjach fachowych osoby odpowiedzialnej za działanie polegające na zamierzonym uwolnieniu GMO Dane pracownika Tytuł Prof. dr hab. Imię Stanisław Nazwisko Karpiński Telefon ..................................... Faks ..................................... Adres e-mail ..................................... Kwalifikacje zawodowe udział w badaniach z użyciem GMO – 1. Transgenic control of photosynthetic electron transport, oxygen and hydrogen peroxide production in higher plants VR (Swedish Research Council - Szwedzki Komitet Badań Naukowych - S. Karpiński był kierownikiem projektu, 2050 tys. koron szwedzkich w latach 1998 - 2004). 2. Genetic control of biotic and abiotic stress tolerance and redox signalling circuitry in higher plants. FORMAS (Swedish Research Council for Environment, Agricultular Sciences and Spatial Planning Szwedzka Rada Badań Środowiska, Nauk Rolniczych i Zagospodarowania Przestrzennego – S. Karpiński był kierownikiem projektu, 940 tys. koron szwedzkich w latach 2003 - 2005). 3. The role of NPR1 in redox-mediated communication between pathogen resistance and excess light acclimation pathways in Arabidopsis. FORMAS (Swedish Research Council for Environment, Agricultular Sciences and Spatial Planning - Szwedzka Rada Badań Środowiska, Nauk Rolniczych i Zagospodarowania Przestrzennego – S. Karpiński był kierownikiem projektu, 580 tys. koron szwedzkich w latach 2004 - 2006). 4. Genes and light mechanisms controlling plants growth rate, development, environmental stress tolerance and yield quality. VR (Swedish Research Council – Szwedzki Komitet Badań Naukowych - S. Karpiński jest kierownikiem projektu, 1350 tys. koron szwedzkich w latach 2005-2008). 5. Swedish Strategic Fundation – Szwedzka Fundacja Celowych Badań Podstawowych Arabidopsis platform (S. Karpiński był kierownikiem projektu, 450 tys. koron szwedzkich w latach 1998–2001). 6. Knut och Alice Wallenberg Foundation – Fundacja Knut och Alice Wallenberg, Arabidopsis platform (S. Karpiński był kierownikiem projektu, 750 tys. koron szwedzkich w latach 2001-2002). 7. Genes involved in regulation of stress tolerance and redox signaling circuitry in higher plants. A coordinated Swedish – U.K. interdisciplinary STINT fellowship program on higher plants (Swedish Agency for International Collaboration in Higher Education and Research). Interdyscyplinarny bilateralny szwedzko-brytyjski projekt badawczy roślin wyższych (Szwedzka Agencja Współpracy Międzynarodowej i Szkolnictwa Wyższego). S. Karpiński był kierownikiem i koordynatorem badań tego projektu; 3150 tys. koron szwedzkich w latach 2002 - 2005). Współpraca pomiędzy zespołami prof. PM Mullineaux i prof. Z Miszalskiego 8. Projekt UE „Cropstress” project (QLAM-2001-00424, lata 2003-2005). Udział w projekcie obejmował miedzyinnymi współpracę między Instytutem Fizjologii Roślin PAN (Zakład Biologii Stresu, prof. Z. Miszalski), który uzyskał tytuł Centrum Doskonałości i Department of Botany at the Stockholm University (Laboratory of Oxidative Stress, prof. S. Karpiński – Instytutem Botaniki Uniwersytetu Sztokholmskiego – Laboratorium Stresu Oksydacyjnego). 7.2. Liczba osób zatrudnionych przy realizacji projektu (lista imienna) Strona 20 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO 1. Stanisław Karpiński 2. Ireneusz Ślesak 3. Magdalena Szechyńska-Hebda 4. Alexey Sotnikov 5. Joanna Dąbrowska 6. Weronika Wituszyńska 7. Paweł Burdiak 8. Magdalena Górecka 9. Piotr Gawroński 7.3. Wykształcenie i doświadczenie pracowników (w tym odbyte szkolenia) Wszystkie osoby biorące udział w badaniach z wykorzystaniem GMO mają wyższe wykształcenie. Niektóre osoby odbyły dłuższe staże zagraniczne, gdzie brały udział w badaniach z użyciem GMO. Pracownicy korzystają z odzieży ochronnej i rękawiczek jednorazowych. Pracownicy i doktoranci podlegają obowiązkowym badaniom lekarskim. Strona 21 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Tryb kontroli 8. INFORMACJE DOTYCZĄCE TRYBU KONTRLOLI I MONITOROWANIA PROCESU UWALNIANIA GMO DO ŚRODOWISKA a) Informacje o technice monitorowania 8.1. Metody monitorowania GMO i efektów uwolnienia do środowiska Metody biologii molekularnej. 8.2. Specyficzność, czułość i wiarygodność technik monitorowania Southern i northern blot, PCR. 8.3. Techniki detekcji materiału genetycznego przenoszonego do innych organizmów Oporność na antybiotyki oraz techniki southern i northern blot, PCR. 8.4. Czas trwania i częstotliwość monitorowania Obszar pól doświadczalnych będzie monitorowany regularnie, po ukończeniu badań polowych zgodnie z metodyką. b) Kontrola zamierzonego uwalniania do środowiska 8.5. Metody i procedury zmierzające do uniknięcia lub zminimalizowania rozprzestrzeniania GMO poza miejscem uwolnienia do środowiska (izolacja przestrzenna lub mechaniczna) Transgeniczne topole pochodzą z kultur in vitro. Rozmnażane są wegetatywnie. Zachowanie minimum 20 metrowej odległości od innych upraw. 8.6. Metody i procedury mające na celu ochronę miejsca uwolnienia GMO przed wtargnięciem osób nieupoważnionych Teren pól doświadczalnych jest zamknięty i monitorowany przez 24 godziny. Utworzona zostanie lista osób upoważnionych do kontrolowania doświadczeń. 8.7. Metody i procedury ochrony miejsca uwolnienia przed innymi organizmami Nie dotyczy c) Izolacja przestrzenna 8.8. Planowana odległość od gatunków pokrewnych, zdolnych do krzyżowania się, dzikich i uprawnych Nie dotyczy 8.9. Metody zapobiegania niekontrolowanemu rozprzestrzenianiu się diaspor i pyłku Nie dotyczy d) Plany reagowania na zagrożenie 8.10. Metody i procedury kontroli GMO, w| przypadku nieoczekiwanego rozprzestrzenienia Metody biologii molekularnej (southern, northern blot, PCR). 8.11. Plany ochrony zdrowia ludzi i środowiska, w przypadku wystąpienia niepożądanych efektów Nie dotyczy 8.12. Metody postępowania z GMO, stwarzającym zagrożenie (unieczynnienie, usunięcie ze środowiska) Nie dotyczy Strona 22 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO 8.13. Metody eliminacji: roślin, zwierząt, gleby, inne, narażonych na kontakt z GMO po lub w trakcie rozprzestrzeniania Nie dotyczy 8.14. Metody izolacji obszarów zagrożonych rozprzestrzenieniem się GMO Nie dotyczy Strona 23 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Odpady 9. INFORMACJE DOTYCZĄCE POSTĘPOWANIA Z ODPADAMI 9.1. Rodzaj wytwarzanych odpadów Części zielone (pędy, liście), części zdrewniałe. 9.2. Oczekiwana ilość odpadów 200 kg 9.3. Możliwe zagrożenia Nie dotyczy 9.4. Opis planowanego postępowania z odpadami, uwzględniający metody bezpiecznej dla zdrowia ludzi i środowiska dezaktywacji odpadów Mechaniczne rozdrobnienie, spalenie Strona 24 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Poprzednie uwolnienia 10. INFORMACJE O WYNIKACH POPRZEDNICH ZAMIERZONYCH UWOLNIEŃ GMO DO ŚRODOWISKA Dane o poprzednich uwolnieniach Informacje o wynikach poprzednich zamierzonych uwolnień GMO do środowiska Nie dotyczy a) Data wydanej zgody ..................................... Numer wydanej zgody ..................................... Początek ..................................... Koniec ..................................... Czas uwolnienia ................................................................................................................................................................................ b) Miejsce wprowadzenia ..................................... c) Cel wprowadzenia ................................................................................................................................................................................ d) Obserwacje po wprowadzeniu ................................................................................................................................................................................ e) Wnioski z poprzedniego wprowadzenia ................................................................................................................................................................................ f) Rezultaty wprowadzenia związane z ryzykiem dla zdrowia ludzi i środowiska ................................................................................................................................................................................ g) Wnioski dotyczące kumulatywnego wpływu na zdrowie ludzi i środowisko ................................................................................................................................................................................ Strona 25 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Komentarze 11. KOMENTARZE I UWAGI DODATKOWE, INNE INFORMACJE, UZNANE PRZEZ UZYTKOWNIKA ZA WAŻNE DLA ZACHOWANIA BEZPIECZEŃSTWA Komentarze i uwagi dodatkowe ................................................................................................................................................................................ Strona 26 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Załączniki 12. ZAŁĄCZNIKI 1) Ocena zagrożenia przygotowana dla uwalnianych organizmów genetycznie zmodyfikowanych 02-08_2010_ocena.doc 2) Dokumentacja związana z opracowaniem oceny zagrożenia wraz ze wskazaniem metod przeprowadzenia tej oceny brak 3) Techniczna dokumentacja zamierzonego uwolnienia 02-08_2010_dokumentacja_techniczna.doc 4) Program działania w przypadku zagrożenia dla zdrowia ludzi lub dla środowiska związanego z zamierzonym uwolnieniem 02-08_2010_awaria.docx 5) Mapa wektora 02-08_2010_wektor.docx 6) Plany pól doświadczalnych 02-08_2010_pola.jpg 7) Streszczenie wniosku 02-08_2010_wniosek.doc DOKUMENTY DODAWANE PRZEZ PRACOWNIKA MINISTERSTWA ŚRODOWISKA Nazwa załącznika Aneks Załącznik 02-08_2010_aneks.pdf Nazwa załącznika Decyzja zmiejącąca II Załącznik 02-08_2010_decyzja_zmieniajaca2.pdf Nazwa załącznika Decyzja zmieniająca Załącznik 02-08_2010_decyzja_zmieniajaca.pdf Nazwa załącznika Aneks2 Załącznik 02-08_2010_aneks2.pdf Nazwa załącznika Aneks2011 Załącznik 02-08_2010_Aneks2011.pdf Nazwa załącznika Data upublicznienia wniosku Załącznik 02-08_2010_Data.pdf Nazwa załącznika Data upublicznienia aneksu Załącznik 02-08_2010_Data_aneks.pdf Strona 27 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Nazwa załącznika Decyzja Załącznik 02-08_2010_decyzja.doc Strona 28 z 29 Zamierzone uwolnienie GMO Strona 29 z 29