PN-EN ISO 29621:2011

Badania "product to product" alternatywa dla testu konserwacji
produktu kosmetycznego
Małgorzata Stachowiak
J.S. HAMILTON POLAND S.A.
Tytułem wstępu
Człowiek jako źródło zanieczyszczenia
mikrobiologicznego
Całkowita masa bakterii wynosi ok. 2 kg
99% DNA , które mamy w sobie , to w
rzeczywistości DNA bakterii
zamieszkujących nasze jelita
Definicja
Dobór i ocenę skuteczności działania
konserwantów przeprowadzić można za
pomocą
TESTU KONSERWACJI
( TESTU OBCIĄŻENIOWEGO , CHALLENGE TEST )
Cel testu konserwacji:
• ocena działania konserwantów wobec szczepów
środowiskowych;
• dobór i sprawdzenie skuteczności układu
konserwującego użytego w produkcie na etapie
końcowym;
• potwierdzenie stabilności użytego układu
konserwującego
PN-EN ISO 11930:2012
Kosmetyki -- Mikrobiologia -- Test skuteczności i
ocena zakonserwowania produktów
kosmetycznych
Metoda przeznaczona przede wszystkim dla
produktów kosmetycznych rozpuszczalnych w
wodzie lub mieszających się z wodą i może
wymagać dostosowania na przykład do badania
produktów, w których woda jest fazą wewnętrzną
product to product inoculation
Ocena zakonserwowania produktów kosmetycznych
polegająca na zaszczepianiu badanej próbki porcją
zanieczyszczonego produktu kosmetycznego.
Utrzymanie wirulencji szczepów
oportunistycznych
cel
.
Odzwierciedlenie
zanieczyszczenia kosmetyku w
trakcie produkcji
Utrzymanie agresywności
zanieczyszczonego produktu
Cechy zarazka
• Inwazyjność - umiejętność przenikania do organizmu
i szerzenia się w nim
• Zjadliwość - zdolność przełamania sił obronnych
i wywołania objawów
Białka błony zewnętrznej ściany komórkowej bakterii Gram-ujemnych
szczepy oportunistyczne
Burkholderia cepacia , Pseudomonas aeruginosa
zakażające chorych lub osoby osłabione –
związane z zakażeniami przyrannymi, zakażeniami
układu moczowego, posocznicą ,wtórnymi
zapaleniami płuc, a także zakażeniami szpitalnymi.
Hiszpania -2006 rok , oddział OIOM
Rezerwuar B.cepacia- mleczko
nawilżajace
PN-EN ISO 29621:2011
Test skuteczności konserwacji przeprowadzany zgodnie z
normą ISO 11930 i metodyka product to product nie jest
wymagany w przypadku tych produktów kosmetycznych, w
przypadku których ryzyko mikrobiologicznego
zanieczyszczenia zostało ustalone na niskim poziomie ,
zgodnie z normą
PN-EN ISO 29621:2011(Kosmetyki – Mikrobiologia – Przewodnik
do oceny ryzyka i identyfikacji produktów niskiego ryzyka
mikrobiologicznego)
PN-EN ISO 29621:2011
Podatność na zakażenie
wysoka
średnia
mała
Sprasowane pudry
Preparaty w sztyfcie
Sypkie pudry
Pudry do kapania (talki)
Grupa produktów
w formie aerozoli
 Pudry do oczu i sztyfty





 Preparaty alkoholowe
(>=20%)
 Dezodoranty i
antyperspiranty
 Sole do kapania
 Aerozole
 Surowce z właściwościami
przeciwdrobnoustrojowymi
 Produkty stosowane wokół
oczu
 Emulsje
 Kremy do ust
 Produkty na bazie wody
 Surowce pochodzenia
naturalnego
PN-EN ISO 29621:2011
Brak podatności na zakażenie
Produkty, w których drobnoustroje nie rozwijają się, określone
na podstawie:
 Wyników wykonywanych testów obciążeniowych
 Danych historycznych i charakterystyki mikrobiologicznej
wynikającej z zawartości i produkcji produktów na
przestrzeni lat
PN-EN ISO 29621:2011
Ocena ryzyka
aw
pH
alkohol
surowce
Produkcja,
pakowanie
PN-EN ISO 29621:2011
Czynnik
fizyko – chemiczny
Limit
Przykład
pH
<3
Produkty do oczyszczania skory na
bazie glicolic acid
Produkty do włosów
> 10
Produkty utleniające
Utleniające do włosów
Alkohol etylowy
> 20%
Produkty do włosów (rozpylacze,
toniki, perfumy)
Temp. napełniania
> 650 C
aw
<0.75
Produkty do ust, pomadki, błyszczyki w
kremie
Produkty na bazie rozpuszczalników
Aluminium chlorohydrate
Lakiery do paznokci
> 25%
antyperspiranty
product to product inoculation
Test konserwacji polega na :
 kontrolowanym, jednorazowym kontaminowaniu próbek
zakonserwowanego produktu określonymi szczepami testowymi
umieszczonymi w zanieczyszczonym produkcie
Jest to symulacja wtórnego zakażenia jakie może powstać podczas
użytkowania produktu przez konsumenta
product to product inoculation
Parametry testu konserwacji :





dobór szczepów testowych - środowiskowych;
gęstość inokulum zakażającego;
liczba wysiewów;
czas kontaktu szczepów z produktem;
stopień przeżycia drobnoustrojów
podłoża
TSA- agar tryptozowo-sojowy- bakterie
Podłoża
rozcieńczalniki
SDA-Sabouraud dextrose agarpleśnie i drożdże
Eugon LT 100 liquid broth,rozcieńczalnik z
peptonem, rozcieńczalnik z Tween 80
inokulum zakażajace
Dodać 1-1,05g /ml inokulum zakażającego do 9 ml bulionu Eugon
LT 100, wymieszać
Wykonać serię rozcieńczeń w MRD do 10-7
Oznaczyć liczbę bakterii na podłożu TSA
i pleśni/drożdży na SDA wysiewając 1 ml z rozcieńczenia
od 10-4 do 10-7
Inkubować 30,0 ± 1,0 0C –72 h – bakterie , drożdże ,
25,0 ± 1,0 0C –5 dni - pleśnie
inokulum zakażajace
Ważne
1. Zanieczyszczony produkt przechowywać w temperaturze
pokojowej
2. Ocenę najwyższego odzysku przeprowadzić na co najmniej
pięciu próbkach , dwie z najwyższym odzyskiem użyć do testu
konserwacji
Poziom odzysku drobnoustrojów po inokulacji w
badanej próbce –min. 1,0 x 104 jtk/g lub ml
badanie
Odważyć aseptycznie 30±0.5g badanej próbki do pojemnika z polipropylenu
Dodać więcej niż 0,5 g zanieczyszczonego produktu lub mieszanki do
próbki testowej, wymieszać
Oznaczyć liczbę drobnoustrojów po 5 minutach od zaszczepienia- dzień
0, ponownie po 48h (tylko bakterie), 7,14 i 28 dniach wykonując posiewy
rozcieńczeń próbki 10-1 do 10-4
przechowywać próbki w 22,5 °C między kolejnymi przesiewami
interpretacja wyników
Kryteria oceny aktywności przeciwdrobnoustrojowej
Logarytm redukcji liczby zdolnych do życia drobnoustrojów
(R):
Rx = log N0 – log Nx
log No – logarytm liczby mikroorganizmów w 1 g próbki
bezpośrednio po zakażeniu;
log Nx – logarytm liczby mikroorganizmów w 1 g próbki po
określonym czasie posiewu.
interpretacja wyników
• Redukcja inokulum zakażającego o 2 log10 w ciągu
48 h i liczba nie zwiększa się po 7 , 14 i 28 dniach po
zaszczepieniu
• Kryteria - odpowiednik Farmakopei Europejskiej redukcja inokulum zakażającego o 2 log10 w ciągu
48 h i o 3 log10 po 7 dniach, po 14 i 28 liczba nie
zwiększa się
wyniki
Log reduction
The product to
product
inoculum
T0
T2
criteria
T7
criteria
T 14
criteria
T28
criteria
5,72
2,79
≥2
4,72
NI
4,72
NI
4,72
NI
T0- log drobnoustrojów po 5 minutach od zakażenia
Rx =lg N0- lgNx
No- liczba drobnoustrojów w czasie t0
Nx- liczba drobnoustrojów w czasie tx
NI- liczba drobnoustrojów nie zwiększa się w czasie T7,T14,T28 dni
Dziękuję za uwagę