Normy ilościowe i jakościowe dotyczące zawartości drobnoustrojów w produktach spożywczych. KATEDRA I ZAKŁAD MIKROBIOLOGII LEKARSKIEJ WUM W WARSZAWIE Dominika Lachowicz Źródła zanieczyszczenia mikrobiologicznego żywności. • Gleba: rezerwuar laseczek tlenowych (Bacillus spp.), beztlenowych (Clostridium spp.) oraz grzybów ale także bakterii z rodziny Enterobacteriaceae: Escherichia coli, Proteus, chorobotwórczych Salmonella, Shigella oraz innych pałeczek - Pseudomonas, Alcaligenes, • Woda: naturalna mikroflora wody nie stanowi zagrożenia dla zdrowia, ale może byd zanieczyszczona przez np. Yersinia enterocolitica, Vibrio parahaemolyticus, florę kałową, • Surowiec, • Człowiek: drobnoustroje stanowiące florę stałą lub przejściową zasiedlające skórę, błony śluzowe, drogi oddechowe i przewód pokarmowy. Normy ilościowe i jakościowe zawartości drobnoustrojów w żywności zawarte są w następujących dokumentach. • Aktualny Dziennik Ustaw Rzeczypospolitej Polskiej • Polskie Normy np.: - norma PN-EN ISO 21187:2006 dot. mleka – Ilościowe oznaczanie jakości bakteriologicznej - norma PN-A-86528:1996 dot. produktów drobiarskich – wyrobów - garmażeryjnych gotowych z mięsa drobiowego – wymagania i metody badao norma PN-A-82055-19:2000 dot. mięsa i przetworów mięsnych – badania mikrobiologiczne Prawo żywnościowe. • Rozporządzenie nr 178/2002/WE z dnia 28 stycznia 2002 r. ustanowiło ogólne zasady i wymagania prawa żywnościowego, powołało Europejski Urząd ds. bezpieczeostwa żywności oraz ustanowiło procedury w zakresie bezpieczeostwa żywności. • Zgodnie z definicją Międzynarodowej Komisji ds. Wymagao Mikrobiologicznych dla Żywności zagrożenie mikrobiologiczne to – nieakceptowanie zanieczyszczenie, wzrost lub przeżywalnośd drobnoustrojów w żywności, które mogłyby spowodowad jej zepsucie lub wytwarzanie i utrzymywanie się w niej toksyn, enzymów, amin biogennych lub innych produktów ich metabolizmu. Cel badania mikrobiologicznego żywności. 1. 2. 3. ustalenie poziomu ogólnej liczby drobnoustrojów saprofitycznych określenie stanu sanitarnego żywności za pomocą wskaźnikowych bakterii typu fekalnego (miano coli) badanie obecności bakterii chorobotwórczych w celu orzeczenia czy dana żywnośd nie zagraża zdrowiu konsumentów • bakterie grupy coli: grupa tlenowych i beztlenowych bakterii, patogennych, nie tworzących przetrwalników, zasiedlających zwykle jelito grube człowieka i zwierząt, jako wskaźnikowa traktowana jest pałeczka E. coli Badanie poszczególnych grup drobnoustrojów z uwzględnieniem wymagao wzrostowych. 1. Temperatura wzrostu: – bakterie mezofilne (30-37°C) – bakterie psychrofilne (0-10°C) – żywnośd pochodzenia morskiego (ryby, mięczaki), a także przechowywana w warunkach chłodniczych – bakterie termofilne (55-65°C) 2. Wymagania tlenowe – bakterie tlenowe lub względnie beztlenowe – bakterie bezwzględnie beztlenowe (Clostridium spp.) 3. Substrat – bakterie lipolityczne (tłuszcze – masło) podłoże z tributyryną lub Tween 80 – bakterie proteolityczne (białka – mleko, mięso, ryby) podłoże Fraziera z kazeiną lub żelatyną – bakterie amylolityczne ( skrobia – mąka) podłoże Waksmana ze skrobią Zakażenia i zatrucia pokarmowe. Według Światowej Organizacji Zdrowia zakażenia i zatrucia pokarmowe są ostrymi zachorowaniami o charakterze zakaźnym, inwazyjnym lub toksycznym, którym towarzyszą najczęściej objawy żołądkowo-jelitowe (nudności, wymioty, bóle brzucha i biegunki). Podział: • intoksykacje – choroby wywoływane działaniem toksyn (w żywności może już nie byd żywych drobnoustrojów) • infekcje – wynik dostania się do organizmu żywych komórek drobnoustrojów i ich rozwoju w organizmie człowieka, • toksykoinfekcje – infekcje, podczas których patogeny uwalniają w organizmie gospodarza toksyny • infekcje inwazyjne – infekcje, podczas których czynniki infekcyjne przedostają się do tkanek, narządów lub całych układów organizmu. MID – MINIMAL INFECTIOUS DOSE (MINIMALNA DAWKA INFEKCYJNA). Liczba komórek drobnoustrojów, która wywołuje objawy chorobowe. Intoksykacje. • Staphylococcus aureus – enterotoksyny (21 typów) • Clostridium botulinum - neurotoksyna botulinowa (8 typów) • Bacillus cereus - toksyna wymiotna Toksykoinfekcje. O koło 20 gatunków bakterii: Salmonella spp. np. S. enteritidis (wyjątek S. Typhi, S. Paratyphi A, B, C) - Shigella spp. (wyjątek S. dysenteriae) - E.coli (np. EPEC) - Klebsiella spp. - Yersinia spp. - Bacillus cereus produkujący toksynę biegunkową• objawy: wodnista biegunka, bóle brzucha • występują po 8- 16h po spożyciu produktu zanieczyszczonego bakteriami • objawy ustępują po 12 – 24h - Clostridium perfringens typ A i C, - Vibrio parahaemolyticus, - Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes, Campylobacter jejuni, Aeromonas hydrophila. - Najważniejsze czynniki wywołujące u ludzi zatrucia i zakażenia pokarmowe. Drobnoustrój Okres inkubacji Okres choroby MID Salmonella spp. 1-7dni 3-19 dni 2 tygodnie 1-4 dni 102-106 106-107 10-103 Vibrio parahaemolyticus 12-48 h 12-72h 3-5 dni 2-48h Staphylococcus aureus 2-6 h 6-24 h 12-96 h zgon po 1-8 dniach lub rekonwalescencja od 6-8 miesięcy 0,005-1 μg toksyny Campylobacter 8-24h 1-18 h 2-5dni 12-24 h 12-24 h 2-10 dni 105-107 >106 102-105 Yersinia enterocolitica 5-10 dni kilkanaście dni 108-109 Enterococcus 3-22 h 24-48 h 109 Escherichia coli Shigella spp. Clostridium botulinum Typ A, B, E, F Clostridium perfringens Bacillus cereus 105-107 enterotoksyna gronkowcowa 1-25μg Najważniejsze czynniki wywołujące u ludzi zatrucia i zakażenia pokarmowe cd. Gatunek Najczęściej zakażane Bacillus cereus mięso, mleko, warzywa, ryby Campylobacter jejuni Clostridium botulinum Escherichia coli (szczepy enterokrwotoczne) Listeria monocytogenes drób, mleko, woda kiełbasa, mięso, konserwy warzywne niedosmażone, mielone mięso wołowe, mleko mleko, sery, lody, surowe warzywa, kiełbasa, drób, mięso, ryby Dawka infekcyjna Uwagi dorośli > 106 komórek Powoduje zatrucia pokarmowe dwiema różnymi enterotoksynami. Objawy zatrucia zwykle nie są groźne. dzieci > 105 komórek 102-103 komórek nanogramy toksyny Najczęstsza przyczyna zakażeo pokarmowych w Stanach Zjednoczonych. Groźne dla życia zatrucia wywołuje wytworzona przez bakterie neurotoksyna – jad kiełbasiany. Toksyna jest inaktywowana w wysokiej temperaturze. 10-102 komórek Produkują toksynę SLT bardzo podobną do toksyny Shiga. Zatrucia mogą prowadzid też do poważnych uszkodzeo nerek. 102-105 komórek Może namnażad się w warunkach chłodniczych. Może powodowad niebezpieczne zakażenia płodu, zwykle śmiertelne. Najważniejsze czynniki wywołujące u ludzi zatrucia i zakażenia pokarmowe cd. Gatunek Najczęściej zakażane surowe mięso, Salmonella enterica subsp.enterica drób, jajka, mleko, nabiał, ryby, (różne serowary) soki owocowe Shigella sp. Staphylococcus aureus Vibrio cholerae sałatki, surowe warzywa, mleko i nabiał, drób, woda mięso, drób, ciastka z kremem, jajka, sałatki, mleko i nabiał zanieczyszczona woda, owoce morza Dawka infekcyjna Uwagi 105-107 komórek Jedne z najczęstszych przyczyn toksykoinfekcji pokarmowych na całym świecie. ok. 10 komórek Jest przyczyną poważnych toksykoinfekcji czerwonki bakteryjnej. Produkuje dwa rodzaje toksyn: enterotoksynę i tzw. toksynę Shiga. mikrogram enterotoksyny ok. 106 komórek 108-109 komórek Yersinia enterocolitica mięso, ostrygi, ryby, surowe mleko Yersinia pseudotuberculosis nieznana Zatrucia powodują wytworzone przez gronkowce enterotoksyny, które nie są inaktywowane w wysokich temperaturach. Wywołuje cholerę. Związana jest z niskim poziomem higieny. Obecnie występuje głównie w krajach Trzeciego Świata. Potrafią się namnażad w niskich temperaturach. Objawy choroby są czasami bardzo podobne do zapalenia wyrostka robaczkowego, który jest w związku z tym niepotrzebnie usuwany. Czystośd mikrobiologiczna leków. Obecne w lekach drobnoustroje mogą powodowad rozkład substancji aktywnej, a także wywoływad zakażenia. czynniki wpływające na obecnośd w lekach drobnoustrojów: • pierwotne zanieczyszczenie surowców farmaceutycznych • proces produkcyjny W Polsce warunkiem uzyskania zgody na wytwarzanie produktów leczniczych jest spełnienie wymogów zawartych w rozporządzeniu ministra zdrowia w sprawie wymagao Dobrej Praktyki Wytwarzania z dnia 1 października 2008 roku. Dziękuję za uwagę.