Elektroforeza metoda za pomocą której można od siebie oddzielić
advertisement
Elektroforeza metoda za pomocą której można od siebie oddzielić fragmenty DNA. Wykorzystuje się w niej fakt, że cząsteczki DNA mają ładunek elektryczny i mogą wędrować w polu magnetycznym. Proteza enzym który trawi białka Ligaza enzym spajający końce DNA Wektor cząsteczka DNA do której można wbudować fragment obcego DNA, następnie wprowadzić ją do komórki, a potem odzyskać. Enzymy restrykcyjne (restryktazy) enzymy które przecinają DNA tylko w określonych miejscach. Enzymy te (uzyskuje je się z bakterii) rozpoznają w DNA krótkie sekwencje zasad i przecinają DNA tylko tam, gdzie te sekwencje występują. Otrzymywanie DNA z tkanek. Tkankę najpierw rozdrabnia się w odpowiednich roztworach. Powstaje zawiesina do której dodaje się detergent który niszczy błony komórkowe i uwalnia DNA z komórek. Do zawiesiny dodaje się protezę –enzym który trawi białko. Do takiej zawiesiny dodaje się etanol, to wytrąci niej czysty DNA. Otrzymane w ten sposób cząsteczki DNA są bardzo długie. Aby je pociąć na mniejsze fragmenty stosuje się enzymy restrykcyjne które przecinają DNA w określonych miejscach. Bakterie. Kolisty wektor rozcina się enzymem restrykcyjnym. Przecięty wektor miesza się z wyciętym fragmentem DNA, a następnie dodaje się ligazy –enzymu spajającego końce DNA z wektorem. Dzięki temu wektor jest znowu zamkniętym kółkiem, z tym że zawiera dodatkowy fragment DNA. Wprowadzenia tak zmodyfikowanego wektora do komórek bakterii (lub innych komórek) określa się mianem transformacji. Bakterie z wektorem rozmnaża się na odpowiednich pożywkach. Oprócz własnych białek produkują one także białko zakodowane w genie, który został wprowadzony. Zwierzęta. Trzeba dokonać transformacji komórek wczesnego zarodka, ponieważ nich właśnie powstają wszystkie komórki organizmu. Zarodek, którego komórki zawierają obcy gen, umieszcza się w macicy, gdzie odbywa się jego dalszy normalny rozwój. Rośliny. Transgeniczne rośliny otrzymuje się z transformowanych komórek roślinnych, z których regeneruje się całe rośliny.
