IMMUNOPATOLOGIA ANALITYKA MEDYCZNA IV rok 2016/2017

IMMUNOPATOLOGIA
ANALITYKA MEDYCZNA IV rok 2016/2017 - program
Ćwiczenie „0” (20.04.2017)
Organizacja zajęć laboratoryjnych, regulamin pracowni, omówienie zasad BHP, obsługa sprzętu laboratoryjnego.
Zapoznanie się z efektami kształcenia na podstawie sylabusa.
Ćwiczenie 1A (25.04.2017)
Wykonanie praktyczne:
1. Test NBT.
2. Test fagocytarny– odsetek komórek fagocytujących, indeks fagocytarny.
3. Oznaczenie składowych układu dopełniacza:– C3, C4, inhibitora C1.
Ćwiczenie 1B (27.04.2017)
Odczyt i interpretacja wykonanych praktycznie badań. Omówienie pozostałych metod służących ilościowej i jakościowej
ocenie odpowiedzi nieswoistej: ocena aktywności hemolitycznej dopełniacza metoda 50% i 100% hemolizy (CH 50 i CH
100), immunodyfuzja radialna wg Manciniego – płytki Partigen.
Ćwiczenie 2A (9.05.2015)
Wykonanie praktyczne:
1. Ocena rozmazu krwi obwodowej.
2. Testy rozetkowe.
Omówienie:
1. Komórki układu immunologicznego – podział i charakterystyka. Metody izolacji i różnicowania komórek w oparciu
o markery powierzchniowe (testy rozetkowe, przy użyciu przeciwciał monoklonalnych metodą IF, cytometria
przepływowa). Podstawy cytometrii przepływowej.
2. Metody badania funkcji limfocytów T i B: test transformacji blastycznej pod wpływem fitohemaglutyniny, test
zahamowania migracji, ocena stężenia cytokin, testy cytotoksyczne.
Ćwiczenie 2B (11.05.2017)
Film: Niektóre objawy zakażenia HIV.
Odczyt i interpretacja wykonanych praktycznie badań.
Omówienie pozostałych metod służących ocenie układu odpowiedzi swoistej: izolacja immunoglobulin, kompleksów
immunologicznych, antygenów z płynów ustrojowych. Immunoelekroforeza. Oznaczanie poziomów przeciwciał w surowicy
w poszczególnych klasach (IgG, IgM, IgA). Wykrycie antygenu lub przeciwciał swoistych w testach serologicznych in vitro:
aglutynacja szkiełkowa i probówkowa, precypitacja pierścieniowa, podwójna dyfuzja w żelu , immunoelektroforeza
rakietowa, odczyn lityczny, odczyn wiązania dopełniacza, immunofluorescencja, ELISA, testy radioimmunologiczne-RIA.
Zasady diagnostyki w niedoborach immunologicznych – dobór testów immunologicznych.
Ćwiczenie 3A (16.05.2017)
Wykonanie praktyczne:
1. Izolacja limfocytów z krwi obwodowej metodą wirowania w gradiencie. Przygotowanie zawiesiny komórkowej o
określonej koncentracji.
2. Wykonanie testu limfocytotoksycznego.
Ćwiczenie 3B (18.05.2017)
Odczyt i interpretacja wykonanych praktycznie badań.
Omówienie metod służących izolacji komórek krwi i procedur stosowanych w transplantologii: izolacja komórek układu
immunologicznego: metoda sedymentacji, metoda izolacji komórek w gradiencie gęstości jednostopniowa, dwustopniowa,
metody adherencji, metoda izolacji komórek z zastosowaniem kulek paramagnetycznych.
Omówienie zasad testów: cross-match, PRA. Zasady doboru dawcy i biorcy przeszczepów.
Kolokwium zaliczeniowe I (23.05.2017)
Ćwiczenie 4A (30.05.2017)
Wykonanie praktyczne:
1. Wykonanie testu immunofluorescencji pośredniej stosowanej w diagnostyce chorób autoimmunologicznych oraz
infekcyjnych.
2. Ustalenie swoistości wybranych przeciwciał metodą Western-blott.
Ćwiczenie 4B (1.06.2017)
Odczyt i interpretacja wykonanych praktycznie badań.
Zasady diagnostyki chorób autoimmunizacyjnych - wykrywanie autoprzeciwciał metodą IF, ELISA i testu potwierdzenia
Western-blott. Oglądanie oznaczeń autoprzeciwciał przeciwjądrowych ANA, przeciwciał przeciwtkankowych – ASMA,
LKM, APCA, przeciwciał antykardiolipinowych, przeciwciał przeciwgranulocytom obojętnochłonnym ANCA i ich
interpretacja.
Metody wykrywania kompleksów immunologicznych - metoda Creightona, metoda interakcji ze składowymi dopełniacza.
Komórki LE.
Omówienie zasad metody IF bezpośredniej na przykładzie badanie w kierunku Chlamydia trachomatis.
Diagnostyka chorób alergicznych: oznaczanie IgE in vitro – testy RIST i RAST, ocena eozynofilii w popłuczynach
pęcherzykowo-oskrzelowych, omówienie zasad testów skórnych (metoda skaryfikacyjna, śródskórna), testów prowokacji
(próba nosowa, próba oskrzelowa), zasady testu uwalniania histaminy z bazofili, testu degranulacji bazofilów, testu
oznaczanie trypazy, eozynofilowgo białka katinowego ECP w surowicy.
Odczyn tuberkulinowy, badanie reakcji późnej u ludzi (Multitest).
Ćwiczenie 5A (6.06.2017)
Wykonanie praktyczne:
1. Izolacja ludzkiego DNA z krwi pełnej metodą kolumienkową
2. Oznaczenie antygenów HLA locus A, DR lub DQ metodą PCR-SSP
Ćwiczenie 5B (8.06.2017)
Wykonanie praktyczne:
1. Wykonanie elektroforezy produktów amplifikacji reakcji PCR-SSP
2. Wykrywanie metodą Real time PCR materiału genetycznego wybranych wirusów
3. Odczyt i interpretacja wykonanych praktycznie badań
Omówienie:
Metody badania antygenów transplantacyjnych: oznaczanie HLA kl. I i II metodami serologicznymi, metodami
molekularnymi (PCR-SSP, PCR-SSO), test mieszanej hodowli limfocytów jednokierunkowy i dwukierunkowy - omówienie,
oznaczanie antygenów grupowych krwi. Metody biologii molekularnej stosowane w diagnostyce chorób infekcyjnych.
Analiza wyników. Analiza wyników badań immunologicznych u osób zdrowych, w różnych typach zakażeń z niedoborami
wrodzonymi i nabytymi.
Analiza wybranych przypadków klinicznych.
Egzamin końcowy:
Część I praktyczna ze znajomości procedur metod laboratoryjnych
Część II teoretyczna – test egzaminacyjny