Monoclonal Mouse Anti-Human Podoplanin Clone D2-40

Monoclonal Mouse
Anti-Human Podoplanin
Clone D2-40
Nr kodu M3619
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro
Przeciwciała Monoclonal Mouse Anti-Human Podoplanin, Clone D2-40 są przeznaczone do stosowania w immunohistochemii. To
przeciwciało znakuje marker podoplaniny w śródbłonku naczyń limfatycznych w tkankach prawidłowych i nowotworowych. Przeciwciało
moŜe być przydatne w diagnostyce nacieku limfatycznego w wielu rodzajach nowotworów (1, 2). Interpretacja kliniczna dodatniego lub
ujemnego odczynu musi być uzupełniona przez ocenę morfologiczną, wykonanie odpowiednich prób kontrolnych i interpretowana przez
doświadczonego patologa w kontekście historii choroby pacjenta i innych badań .
Streszczenie i informacje ogólne
Podoplanina jest sialoglikoproteiną przezbłonową o masie ~38 kDa usieciowaną wiązaniami O-glikozydowymi, ulegającą ekspresji w
śródbłonku naczyń limfatycznych, ale nie w naczyniach krwionośnych (3). Poza ekspresją w śródbłonku naczyń limfatycznych podoplanina
występuje takŜe w wielu innych tkankach: komórkach międzybłonka, komórkach retikularnych, komórkach dendrycznych grudek chłonnych,
guzach zarodkowych jajników i jąder (4). Wykazano równieŜ, Ŝe przeciwciało przeciwko podoplaninie reaguje ze śródbłonkiem naczyń
limfatycznych, a nie reaguje ze śródbłonkiem naczyń krwionośnych (1, 2). Ponadto wykazano, Ŝe w tkance nowotworowej odczyn
immunologiczny śródbłonka limfatycznego z zastosowaniem przeciwciała przeciw podoplaninie jest przydatny w diagnostyce nacieku
limfatycznego guzów pierwotnych (1, 2). Dodatkowo udowodniono, Ŝe zastosowanie markerów kalretyniny i podoplaniny pomaga w
odróŜnieniu międzybłoniaka od przerzutowego gruczolakoraka (5). Wykazano równieŜ, Ŝe podoplanina jest przydatnym markerem do
diagnostyki róŜnicowej nasieniaków i mięsaków komórek dendrytycznych (6).
Zobacz dokument Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako lub następujące części instrukcji do
systemu detekcji IHC: 1) Zasady procedury, 2) Niezbędne materiały niedostarczone z zestawem, 3) Przechowywanie, 4) Przygotowanie
preparatu, 5) Wykonanie odczynu, 6) Kontrola jakości, 7) Rozwiązywanie problemów, 8) Interpretacja wyniku odczynu, 9) Ograniczenia
metody.
Dostarczany odczynnik
Mysie przeciwciała monoklonalne są dostarczane w postaci nadsączu hodowli tkankowej w buforze Tris-HCl o stęŜeniu 0,05 mol/l i pH 7,2,
zawierającym azydek sodu o stęŜeniu 0,015 mol/l. Produkt zawiera białko stabilizujące.
Izotyp: IgG1, kappa
Klon: D2-407
StęŜenie mysich lgG [mg/l]: zobacz etykietę na fiolce.
Preparat M3619 moŜe być stosowany w rozcieńczeniu 1:100–1:200 w IHC z zastosowaniem systemu detekcji EnVision+™. Podane
wartości mają charakter wyłącznie orientacyjny. Optymalne stęŜenie przeciwciał moŜe się zmieniać w zaleŜności od rodzaju materiału i
sposobu jego przygotowania. Optymalne stęŜenie powinno być określone indywidualnie w kaŜdej pracowni.
Immunogen
tkanka rozrodczaka (7)
Swoistość
Klon D2-40 badano metodą Western blotting na lizatach róŜnych linii komórek nowotworowych. W badaniach komórek HEY raka
nabłonkowego jajnika metodą immunoblotting D2-40 przeciwciała tworzą prąŜek 40 kD, a w badaniach komórek MGH-U3 — związek o
nieco większej masie cząsteczkowej. Reaktywność immunologiczną D2-40 obserwowano takŜe w testach Western blot komórek SK-OV-3 i
Caov-3 raka nabłonkowego jajnika, komórek PA-1PA-1 potworniaka złośliwego jajnika, komórek Tera-1 i Tera-2 potworniaka złośliwego
jądra, komórek 833 raka zarodkowego, komórek RT-4 raka z nabłonka dróg moczowych pęcherza oraz komórek U-2 OS kostniakomięsaka.
Nie zaobserwowano reaktywności w testach Western blot innych linii komórek nowotworowych, pochodzących z róŜnych nowotworów (7).
Wpływ trawienia enzymatycznego na reaktywność immunologiczną D2-40 badano przy uŜyciu niezmienionych komórek HEY oraz antygenu
z komórek HEY oczyszczonego pod względem powinowactwa. Reaktywność immunologiczna D2-40 w testach Western blot oczyszczonego
antygenu oraz w komórkach badanych metodą cytometrii przepływowej nie uległa zmianie po usunięciu pozostałości kwasu sialowego przez
obróbkę komórek lub białek z zastosowaniem neuraminidazy. Stwierdzono, Ŝe obróbka białek lub komórek z zastosowaniem Osialoglikoproteazy upośledza reaktywność immunologiczną D2-40 zarówno w badaniach Western blot, jak i w cytometrii przepływowej, co
świadczy o tym, Ŝe antygen rozpoznawany przez D2-40 jest glikoproteiną z wiązaniem O-glikozydowym (7).
Materiały wymagane, ale niedostarczane
Zobacz Ogólne instrukcje wykonywania odczynów immunohistochemicznych firmy Dako i/lub instrukcje do systemu detekcji. Sugerowany
rozcieńczalnik do proceder IHC:
Antibody Diluent (rocieńczalnik do przeciwciał) (nr kodu S0809)
Zalecana ujemna kontrola odczynów IHC:
Przeciwciała Mouse IgG1 (mysie IgG1) (nr kodu X0931)
Środki ostroŜności
1. Odczynniki są przeznaczone dla przeszkolonych UŜytkowników.
2. Opisywany produkt zawiera silnie toksyczny związek — azydek sodu (NaN3), w czystej postaci. StęŜenie NaN3 występujące w
produkcie nie jest klasyfikowane jako niebezpieczne. Jednak w wyniku reakcji NaN3 z ołowiem lub miedzią, wchodzącymi w skład
(109242-004)
305832PL_002 s. 1/4
3.
4.
5.
instalacji kanalizacyjnych, mogą powstawać silnie wybuchowe azydki metali. Przy usuwaniu resztek odczynnika uŜywać duŜych ilości
wody do przepłukiwania, aby uniknąć gromadzenia się azydków w instalacji kanalizacyjnej.
Podobnie jak w przypadku kaŜdego produktu otrzymywanego z materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury
postępowania.
NaleŜy stosować właściwe wyposaŜenie ochronne, zabezpieczające przed kontaktem odczynnika ze skórą bądź oczami.
Niewykorzystane odczynniki naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i ogólnokrajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2–8 °C. Nie nale Ŝy uŜywać odczynników po upływie terminu waŜności podanego na fiolce. JeŜeli odczynniki
są przechowywane w warunkach innych niŜ podane na ulotce dołączanej do opakowania, UŜytkownik powinien je zweryfikować. Nie ma
jednoznacznych oznak świadczących o niestabilności tego produktu. Dlatego równolegle z odczynami na materiale pochodzącym od
pacjentów naleŜy wykonywać dodatnie i ujemne próby kontrolne. W wypadku nieoczekiwanego wyniku odczynu, którego nie moŜna wyjaśnić
róŜnicami w procedurach laboratoryjnych, gdy podejrzewa się problem z przeciwciałem, naleŜy się skontaktować z działem wsparcia
technicznego firmy Dako.
Przygotowanie materiału
Skrawki parafinowe
Przeciwciała przeciwko podoplaninie moŜna stosować do skrawków utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie. Nie zaleca się
trawienia tkanki enzymami proteolitycznymi.
Po odparafinowaniu, przed wykonaniem odczynu IHC skrawki powinny być poddane obróbce cieplnej (odmaskowaniu antygenu). Cieplne
odmaskowanie antygenu (Heat-induced epitope retrieval — HIER) polega na umieszczeniu skrawków w ogrzanym uprzednio roztworze
buforu i utrzymaniu temperatury w kąpieli wodnej lub parowej (95–99 °C). Zaleca si ę stosowanie protokołu ogrzewania HIER przez 20 minut
w temperaturze 95–99 °C. Po zako ńczeniu ogrzewania naleŜy odstawić pojemnik z buforem zawierającym preparaty do ostygnięcia w
temperaturze pokojowej przez 20 minut. Po zakończeniu HIER dokładnie przepłukać roztworem buforu lub wodą dejonizowaną. W celu
uzyskania lepszego przylegania skrawków do szkiełek podstawowych, zaleca się stosowanie szkiełek typu Silanized Slides
(sylanizowanych) (nr kodu S3003). Zaleca się stosowanie preparatu Target Retrieval Solution (roztworu do odzyskiwania antygenu) (nr kodu
S1700) lub 10x Concentrate (10x koncentrat) (nr kodu S1699).
Skrawki mroŜakowe i rozmazy cytologiczne
Przeciwciała przeciwko podoplaninie mogą być stosowane do odczynów na skrawkach mroŜakowych utrwalonych w acetonie lub
utrwalonych rozmazach cytologicznych.
Wykonanie odczynu
Postępować według stosownej procedury dla wybranego systemu detekcji.
Interpretacja odczynu
Przeciwciała przeciwko podoplaninie dają odczyn cytoplazmatyczny i, niekiedy, błonowy.
Charakterystyka wydajnościowa
Prawidłowe tkanki 8
Przeciwciała przeciwko podoplaninie charakteryzują się silną reaktywnością immunologiczną wobec komórek śródbłonka naczyń
limfatycznych, komórek zwojów nerwowych i nerwów w wielu rodzajach prawidłowych tkanek. W Ŝadnych tkankach nie zaobserwowano
reaktywności wobec komórek śródbłonka naczyń krwionośnych. (8).
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków)
Nadnercza (3)
Szpik kostny (3)
Mózg, móŜdŜek (3)
Mózg, mózgowie (3)
Gruczoły sutkowe (3)
Szyjka macicy (3)
Jelito grube (3)
Przełyk (3)
Serce (3)
Nerki (3)
Wątroba (3)
Płuca (3)
Komórki międzybłonka (3)
Jajniki (3)
Trzustka (3)
Przytarczyce (3)
Nerwy obwodowe (3)
Przysadka mózgowa (3)
Gruczoł krokowy (3)
(109242-004)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
2/3 cytoplazma fibroblastów torebki; 1/3 cytoplazma fibroblastów śródmiąŜszowych; 1/3
cytoplazma limfocytów części przytorebkowej
3/3 ujemne
3/3 cytoplazma włókien sieci nerwowych
3/3 jądra nielicznych astrocytów
3/3 cytoplazma komórek mięśniowo-nabłonkowych
3/3 błona komórkowa i (lub) cytoplazma komórek podstawnych nabłonka; 3/3 cytoplazma
fibroblastów podścieliska
2/3 limfocyty
1/3 cytoplazma komórek zwojów nerwowych w mięśniach; 1/3 cytoplazma komórek
podstawnych nabłonka
2/3 cytoplazma miocytów
1/3 cytoplazma fibroblastów części przytorebkowej
3/3 ujemne
2/3 cytoplazma komórek nabłonka oskrzeli; 3/3 obrzeŜe cytoplazmy komórek pęcherzyków
płuc
1/3 cytoplazma komórek międzybłonka
3/3 cytoplazma komórek podścieliska jajnika; 1/3 cytoplazma komórek nabłonka
powierzchniowego torbieli inkluzyjnych
2/3 cytoplazma fibroblastów okołoprzewodowych; 1/3 cytoplazma komórek mięśniowonabłonkowych przewodów
3/3 ujemne
2/3 cytoplazma komórek onerwia
1/3 cytoplazma fibroblastów części przytorebkowej przedniego płata przysadki; 1/3 cytoplazma
włókien nerwowych przedniego płata przysadki
3/3 cytoplazma komórek podstawnych przewodzików; 3/3 cytoplazma fibroblastów
podścieliska
305832PL_002 s. 2/4
Ślinianki (3)
3/3 cytoplazma komórek przewodzików i komórek zrazikowych mięśniowo-nabłonkowych
Prawidłowe tkanki 6
Rodzaj tkanki (liczba testowanych
przypadków)
Mięśnie szkieletowe (3)
Skóra (3)
Jelito cienkie (3)
Śledziona (3)
śołądek (3)
Jądra (3/3)
Grasica (3)
Tarczyca (3)
Migdałki (3)
Macica (3)
Składniki komórkowe dające dodatni odczyn
3/3 cytoplazma omięsnej
3/3 cytoplazma komórek mięśniowo-nabłonkowych struktur przydatków
3/3 cytoplazma śródściennego splotu nerwowego jelit
3/3 ujemne
3/3 cytoplazma fibroblastów okołogruczołowych; 1/3 cytoplazma splotu błony mięśniowej; 1/3
cytoplazma i błona komórkowa limfocytów ośrodków rozmnaŜania
3/3 cytoplazma fibroblastów okołokanalikowych
3/3 cytoplazma i błona komórkowa limfocytów rdzenia
3/3 ujemne
3/3 cytoplazma i błona komórkowa komórek podstawnych nabłonka i limfocytów ośrodków
rozmnaŜania
3/3 cytoplazma komórek mięśniówki macicy; 1/3 cytoplazma komórek gruczołów endometrium
Nieprawidłowe tkanki 2,7
Rodzaj tkanki (liczba testowanych przypadków)
Mięsak Kaposiego (24):
Stadium plamy, płytki i guzka
Naczyniak chłonny (10)
Mięsak naczyniowy (7)
Mięsak gładkokomórkowy (10)
Włókniak skóry (6)
Złośliwy guz włóknisty z histiocytów (2)
Naczyniak (10)
Kłębczak (3)
Tłuszczak z tkanki naczyniowej (2)
Ziarniniak ropotwórczy (2)
Wada rozwojowa naczyń (2)
Naczyniak pericytarny (1)
Naczyniak z komórek śródbłonkowych (1)
Guzowaty włókniakomięsak skóry (4)
Włókniakonerwiaki (6)
Czyste guzy zarodkowe
Nasieniaki (35)
Raki zarodkowe (5)
Potworniaki niedojrzałe i dojrzałe (1)
Mieszane guzy zarodkowe
Nasieniaki (12)
Raki zarodkowe (21)
Potworniaki niedojrzałe i dojrzałe (16)
Rak z pęcherzyka Ŝółtkowego (4)
Nabłoniak kosmówkowy złośliwy (2)
Tkanki dające dodatni odczyn
24/24
10/10 śródbłonek wyściełający przestrzenie zatok naczyniowych
3/7
3/10
2/6
1/2
0/10
0/3
0/2
0/2
0/2
0/1
0/1
0/4
0/6
34/35
1/5
0/1
12/12
17/21
5/16
1/4
0/2
Piśmiennictwo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Kahn HJ, Marks A. A new monoclonal antibody, D2-40, for detection of lymphatic invasion in primary tumors. Lab Invest 2002;82:
1255-7.
Kahn HJ, Bailey D, Marks A. Monoclonal antibody D2-40, a new marker of lymphatic endothelium, reacts with Kaposi's sarcoma and a
subset of angiosarcomas. Mod Pathol 2002; 15:434-40.
Breiteneder-Geleff S, Soleiman A, Kowalski H, Horvat R, Amann G, Kriehuber E, et al. Angiosarcomas express mixed endothelial
phenotypes of blood and lymphatic capillaries: podoplanin as a specific marker for lymphatic endothelium. Am J Pathol 1999;
154:385-94.
Kalof AN and Cooper K. D2-40 Immunohistochemistry – So Far! Adv Anat Pathol 2009; 16:62-4.
Chu AY, Litzky LA, Pasha TL, Acs G, Zhang PJ. Utility of D2-40, a novel mesothelial marker, in the diagnosis of malignant
mesothelioma, Mod Pathol 2005, 18:105-110.
Yu H, Gibson JA, Pinkus GS, Hornick JL. Podoplanin (D2-40) is a novel marker for follicular dendritic cell tumors. Am J Clin Pathol
2007; 128:776-82.
Marks A, Sutherland DR, Bailey D, Iglesias J, Law J, Lei M, et al. Characterization and distribution of an oncofetal antigen (M2A antigen)
expressed on testicular germ cell tumours. Br J Cancer 1999; 80:569-78.Marks A, Sutherland DR, Bailey D, Iglesias J, Law J, Lei M,
Yeger H, Banerjee D, Baumal R. Characterization and distribution of an oncofetal antigen (M2A antigen) expressed on testicular germ
cell tumours. Br J Cancer 1999 May;80(3-4):569-78
IHC003 Report On File
(109242-004)
305832PL_002 s. 3/4
Edition 07/12
(109242-004)
305832PL_002 s. 4/4