ependyma i subependyma mózgu doros£ych ssaków źród£em

advertisement
POSTÊPY BIOLOGII KOMÓRKI
TOM 38 2011 NR 3 (379–393)
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
379
EPENDYMA I SUBEPENDYMA MÓZGU DOROS£YCH
SSAKÓW RÓD£EM NEURALNYCH KOMÓREK
MACIERZYSTYCH
EPENDYMA AND SUBEPENDYMA OF ADULT MAMMALIAN BRAIN
AS A SOURCE OF NEURAL STEM CELLS
Katarzyna ROSZEK, Joanna CZARNECKA, Micha³ KOMOSZYÑSKI
Zak³ad Biochemii, Instytut Biologii Ogólnej i Molekularnej,
Uniwersytet Miko³aja Kopernika w Toruniu
Streszczenie: Mózg doros³ych ssaków, w tym cz³owieka, zachowuje zdolnoœæ wytwarzania zarówno
komórek glejowych, jak i neuronów w procesie neurogenezy. Jest on mo¿liwy dziêki obecnoœci neuralnych komórek macierzystych w tzw. strefach neurogennych. Intensywnoœæ procesu neurogenezy jest
zdecydowanie najwy¿sza w obrêbie warstwy subependymalnej, bêd¹cej czêœci¹ strefy oko³okomorowej
komór bocznych mózgu. Tak¿e komórki ependymalne, tworz¹ce zewnêtrzn¹ wyœció³kê komór bocznych, mog¹ ró¿nicowaæ siê w komórki uk³adu nerwowego. Komórki ependymalne (ependymocyty)
powstaj¹ z gleju promienistego w okresie zarodkowym i wczesnym okresie postnatalnym. Ependymocyty doros³ych ssaków daj¹ pocz¹tek migruj¹cym komórkom, które ró¿nicuj¹ siê zarówno w astrocyty,
jak i w neurony. Ponadto komórki ependymalne cechuje ekspresja markerów komórek neuroprogenitorowych, takich jak: Sox2 czy nestyna oraz CD133 – markera komórek macierzystych tkanek doros³ych
organizmów. Subependyma jest zró¿nicowan¹ stref¹ zbudowan¹ z kilku rodzajów komórek zlokalizowanych pod jednorodn¹ warstw¹ komórek ependymalnych. Liczne badania wskazuj¹, ¿e subependymalne
astrocyty, wykazuj¹ce ekspresjê glejowego kwaœnego bia³ka w³ókienkowego (GFAP), stanowi¹ populacjê komórek proliferuj¹cych i maj¹ cechy neuralnych komórek macierzystych. Strefa subependymalna
stanowi niszê dla neuralnych komórek macierzystych, komórek prekursorowych (progenitorowych)
neuronów i gleju oraz neuroblastów i glioblastów, czyli niedojrza³ych neuronów i komórek glejowych.
Ependyma wraz z warstw¹ subependymaln¹ mog¹ wiêc byæ bogatym Ÿród³em neuralnych komórek
macierzystych. Neuralne komórki macierzyste – NSCs (neural stem cells) to pierwotne komórki cechuj¹ce siê nieograniczon¹ zdolnoœci¹ do samoodnawiania, a tak¿e ró¿nicowania w jedn¹ z trzech linii komórek uk³adu nerwowego, tj. neurony, oligodendrocyty i astrocyty. Hodowla in vitro neuralnych komórek
macierzystych wyizolowanych z obszarów neurogenicznych mózgu ssaków mo¿liwa jest w dwóch
systemach: w postaci hodowli jednowarstwowych (ang. monolayer system) oraz hodowli neurosfer.
Neurosfery w hodowli in vitro s¹ sferycznymi lub elipsoidalnymi strukturami z³o¿onymi z kilkuset
komórek w otoczce bogatej w sk³adniki macierzy zewn¹trzkomórkowej. Komórki neurosfer ró¿ni¹ siê
wielkoœci¹, obecnoœci¹ ziarnistoœci w cytosolu, liczb¹ mitochondriów i mog¹ znajdowaæ siê w ró¿nych
fazach cyklu komórkowego. Neurosfery to wysoce z³o¿one struktury biologiczne, w których w tym
samym czasie zachodz¹ procesy fagocytozy, mitozy, apoptozy, a nawet nekrozy. Szacunki dotycz¹ce
380
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
odsetka NSCs w neurosferach wskazuj¹, ¿e jest ich zaledwie 0,16%. W warunkach fizjologicznych
procesy proliferacji i ró¿nicowania neuralnych komórek macierzystych s¹ precyzyjnie regulowane przez
ró¿norodne oddzia³ywania i systemy sygnalizacji w obrêbie niszy. W artykule omówiono jedynie najlepiej poznane cz¹steczki i szlaki sygna³owe. Odtworzenie zawi³ych zale¿noœci i pe³na charakterystyka
czynników i szlaków sygna³owych tworz¹cych nisze dla NSCs jest ci¹gle wyzwaniem dla badaczy.
Dopiero kompleksowe poznanie i zrozumienie tych z³o¿onych mechanizmów pozwoli na pe³n¹ kontrolê
wzrostu i ró¿nicowania neuralnych komórek macierzystych w hodowlach in vitro. To z kolei umo¿liwi
wykorzystanie NSCs do leczenia chorób neurodegeneracyjnych, m.in. choroby Alzheimera, choroby
Parkinsona oraz urazów i udarów mózgu.
S³owa kluczowe: ependyma, subependyma, neuralne komórki macierzyste, neurosfery, kontrola ró¿nicowania.
Summary: The brain of adult animals, including humans, sustained the ability to create new glial cells and
neurons. This process is called postnatal neurogenesis. It is possible owing to the presence of neuronal
stem cells in the neurogenic zones. The subependymal layer, a part of periventricular zone, demonstrates
the highest intensity of neurogenesis. Ependymal cells, forming the external lining of the lateral ventricles,
can also effectively differentiate into cells of the nervous system. Ependymal cells (ependymocytes)
originate from radial glia and are created during embrional and early postnatal development. Ependymocytes of adult mammalian brain form migrating cells differentiating into astrocytes and neurones. Ependymal
cells express neuroprogenitor markers like Sox2 or nestin and adult stem cells marker – CD133. Subependyma is layered below the uniform ependyma lining. It is formed of a few diverse types of cells. There are
numerous data indicating that subependymal, GFAP-positive astrocytes proliferate intensively and they
have the characteristics of neural stem cells. The subependymal zone is a niche for neural stem cells,
neuronal and glial precursor (progenitor) cells, neuroblasts and glioblasts that are immature neurons and
glia, respectively. Ependymal and subependymal zone emerges to be a rich source of neural stem cells.
Neural stem cells (NSCs) are primary cells with the ability of self-renewal or differentiation into one of
three types of nervous system cells: neurons, oligodendrocytes or astrocytes. NSCs isolated from neurogenic zones of adult mammalian brain can be cultured in vitro in two systems: as monolayer system or as
culture of neurospheres. Neurospheres cultured in vitro are spherical or elipsoidal structures formed of
hundreds of cells surrounded by an envelope rich in extracellular matrix components. The cells forming
neurosphere differ in their size, presence of cytosolic granules, number of mitochondria, the phase of cell
cycle. Neurospheres appear as complex biological structures in which events such as phagocytosis,
mitosis, apoptosis and even necrosis occur at the same time. The amount of NSCs in neurospheres is
estimated as about 0.16%. In physiological conditions proliferation and differentiation of neural stem cells
are precisely regulated through different interactions and signalization systems within the niche. The
attempt to recognize these complex interactions and to fully characterize all the factors and signaling
systems is still a challenge for the researchers. In this article we describe only these molecules and
pathways of signalization that are quite well characterized. Our understanding of the mechanisms regulating proliferation and differentiation of NSCs will allow to precisely control these processes in in vitro
cultures. These findings will help to applicate NSCs in the therapy of neurodegenerative diseases like
Alzheimer or Parkinson disease, brain injury and stroke.
Keywords: ependyma, subependyma, neural stem cells, neurospheres, differentiation control.
Wykaz skrótów: BDNF (brain-derived neurotrophic factor) – czynnik neurotroficzny pochodzenia mózgowego, bFGF (basic fibroblast growth factor) – zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów, EGF
(epidermal growth factor) – naskórkowy czynnik wzrostu, GFAP – glejowe kwaœne bia³ko w³ókienkowe, NGF
(nerve growth factor) – czynnik wzrostu nerwów, NSCs (neural stem cells) – neuralne komórki macierzyste,
PDGF – (ang. platelet-derived growth factor) – p³ytkopochodny czynnik wzrostu, PMR – p³yn mózgowo-rdzeniowy, PVZ (periventricular zone) – strefa oko³okomorowa, SEZ (subependymal zone) – strefa
subependymalna, SGZ (subgranular zone) – strefa podziarnista.
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
381
1. WPROWADZENIE
Odkrycie obecnoœci neuralnych komórek macierzystych – NSCs (ang. neural
stem cells) w oœrodkowym uk³adzie nerwowym doros³ych ssaków, w tym cz³owieka
[31, 32], radykalnie zmieni³o spojrzenie na zdolnoœci regeneracyjne tkanki nerwowej.
Mózg doros³ego osobnika zachowuje zdolnoœæ wytwarzania zarówno komórek
glejowych, jak i neuronów w procesie neurogenezy. Proces ten jest mo¿liwy dziêki
obecnoœci neuralnych komórek macierzystych w tzw. strefach neurogennych mózgu.
Podstawowym miejscem neurogenezy w ¿yciu doros³ym s¹ dwie strefy: strefa
oko³okomorowa – PVZ (ang. periventricular zone) komór bocznych mózgu oraz
strefa podziarnista – SGZ (ang. subgranular zone) zawoju zêbatego hipokampa
[5, 19, 22]. W wyniku ró¿nicowania NSCs powstaj¹ dojrza³e neurony lub komórki
gleju, które bior¹ udzia³ w uzupe³nianiu i zastêpowaniu uszkodzonych komórek.
Intensywnoœæ procesu neurogenezy jest zdecydowanie najwy¿sza w obrêbie
warstwy subependymalnej – SEZ (ang. subependymal zone) bêd¹cej czêœci¹
strefy oko³okomorowej komór bocznych [6, 20]. Liczne badania wskazuj¹, ¿e
subependymalne astrocyty, wykazuj¹ce ekspresjê glejowego kwaœnego bia³ka
w³ókienkowego (GFAP), stanowi¹ populacjê komórek proliferuj¹cych i maj¹ cechy
neuralnych komórek macierzystych [13, 20, 41]. W mózgu doros³ych gryzoni
aktywnoœæ mitotyczn¹ zachowuj¹ zarówno komórki strefy subependymalnej, jak i
ependymalnej. Komórki strefy ependymalnej, tworz¹ce zewnêtrzn¹ wyœció³kê komory
bocznej mózgu, mog¹ ró¿nicowaæ siê w komórki glejowe lub neurony [16, 31, 39].
Powy¿sze dane wskazuj¹, ¿e ependyma wraz z warstw¹ subependymaln¹ otaczaj¹ce
przestrzenie komór bocznych uk³adu komorowego mózgu, odgrywaj¹ istotn¹ rolê w
doros³ym organizmie i mog¹ byæ bogatym Ÿród³em neuralnych komórek macierzystych.
2. UK£AD KOMOROWY MÓZGU
Uk³ad komorowy mózgu ssaków jest miejscem produkcji i kr¹¿enia p³ynu mózgowordzeniowego (PMR). Stanowi zbiór czterech przestrzeni zwanych komorami zlokalizowanych
wewn¹trz mózgowia. Wyró¿nia siê dwie komory boczne, komorê trzeci¹ i komorê czwart¹.
Œciany komór, podobnie jak œciany wodoci¹gu mózgu i kana³u œrodkowego rdzenia krêgowego,
s¹ wyœcielone warstw¹ komórek nab³onkowych – ependym¹ [42].
Ependyma i znajduj¹ca siê pod ni¹ warstwa subependymalna stanowi¹ barierê,
zapewniaj¹c¹ selektywn¹ wymianê substancji pomiêdzy tkank¹ nerwow¹ a p³ynem
mózgowo-rdzeniowym. Ponadto, ependyma wraz z subependym¹ tworz¹ strefê
neurogenn¹ mózgu, aktywn¹ zarówno podczas rozwoju zarodkowego, jak i u doros³ych
osobników, przy czym intensywnoœæ neurogenezy maleje wraz z wiekiem [5].
Charakterystyka i funkcje komórek ependymy
Wyœció³ka uk³adu komorowego i œrodkowego kana³u rdzenia krêgowego jest
rodzajem tkanki glejowej w formie nab³onka. Komórki ependymalne (ependymocyty)
wystêpuj¹ g³ównie w postaci jednej warstwy, o zró¿nicowanej wysokoœci. Kontury
382
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
komórek zarysowane s¹ przez wyraŸne b³ony komórkowe [17]. W sk³ad nab³onka
wchodz¹ dwa morfologicznie ró¿ne typy komórek:
1) Komórki szeœcienne o centralnie po³o¿onym, kulistym j¹drze, które stanowi¹ „typow¹”
ependymê. Od strony œwiat³a komór komórki ependymy pokryte s¹ wydatnymi rzêskami,
zas³aniaj¹cymi obecne na powierzchni komórek mikrokosmki [17, 30].
2) Wyd³u¿one komórki – tanycyty, które maj¹ u podstawy wypustki kieruj¹ce
siê ku warstwie subependymalnej. Cia³o tanycytów jest wyd³u¿one, j¹dra komórkowe
s¹ owalne. W obszarach oko³okomorowych mózgu tanycyty s¹ wyspecjalizowanymi
komórkami ependymy, kontaktuj¹cymi siê z komórkami nerwowymi i naczyniami
w³osowatymi [30].
Ependymocyty uczestnicz¹ w transporcie substancji z p³ynu mózgowo-rdzeniowego do mózgu oraz produktów metabolizmu tkankowego w przeciwnym kierunku,
a tak¿e bior¹ udzia³ w kszta³towaniu bariery PMR – mózg [17]. Rzêski obecne na
powierzchni komórek wymuszaj¹ kr¹¿enie p³ynu mózgowo-rdzeniowego.
Komórki ependymy powstaj¹ z gleju promienistego w okresie zarodkowym i
wczesnym okresie postnatalnym. W póŸniejszym okresie rozwoju, jako komórki
zró¿nicowane s¹ ju¿ mitotycznie nieaktywne [51]. Ta ich cecha sugeruje, ¿e nie
mog¹ funkcjonowaæ jako neuralne komórki macierzyste w doros³ym organizmie.
Jednak¿e istniej¹ te¿ wyniki badañ wskazuj¹ce na udzia³ ependymocytów w
neurogenezie doros³ych organizmów. Wyniki badañ Johanssona i wsp. [31] dowodz¹,
¿e ependymocyty doros³ych ssaków daj¹ pocz¹tek migruj¹cym komórkom, które
ró¿nicuj¹ siê w astrocyty i neurony. Ponadto, komórki ependymy cechuje ekspresja
markerów komórek neuroprogenitorowych, takich jak: Sox2 czy nestyna oraz CD133
– markera komórek macierzystych tkanek doros³ych organizmów [16, 39]. Aby
potwierdziæ zdolnoœæ ependymocytów CD133+ do ró¿nicowania in vivo, Coskun i
wsp. dokonali transplantacji komórek CD133+ do mózgu myszy. W wyniku tych
doœwiadczeñ komórki ependymalne CD133+ tworzy³y komórki progenitorowe, daj¹ce
pocz¹tek neuronom [16]. Przypuszczalnie, komórki ependymalne lub ich prekursory
wykazuj¹ potencja³ neurogeniczny w okreœlonych warunkach, np. szoku spowodowanego uszkodzeniem lub izolacj¹ komórek do hodowli in vitro [6]. U gryzoni
poddanych ogniskowemu niedotlenieniu zarówno komórki ependymy, jak i komórki
splotu naczyniówkowego bior¹ aktywny udzia³ w tworzeniu nowych neuronów i
astrocytów. Nastêpuje proliferacja pojedynczej warstwy komórek do kilku warstw.
Ependymocyty splotu naczyniówkowego, mimo funkcjonalnej specjalizacji, proliferuj¹
w odpowiedzi na uszkodzenie warstwy ependymy, co sugeruje, ¿e mog¹ wykazywaæ
cechy komórek macierzystych [12]. Nie jest jasne, czy za proliferacjê i regeneracjê
odpowiadaj¹ wszystkie komórki strefy ependymalnej. Czêsto wysuwana jest hipoteza,
¿e komórki ependymalne i neuralne komórki macierzyste s¹ zlokalizowane w obrêbie
tej samej niszy i ich funkcje s¹ powi¹zane [24].
Charakterystyka i funkcje komórek subependymy
Subependyma stanowi zró¿nicowan¹ warstwê kilku rodzajów komórek zlokalizowanych pod jednorodn¹ warstw¹ komórek ependymalnych. Badania ultrastrukturalne
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
383
Quinones-Hinojosa i wsp. [42] wykaza³y obecnoœæ czterech odrêbnych stref w œcianie
komory bocznej mózgu cz³owieka: najbardziej zewnêtrzna monowarstwa komórek
ependymalnych oddzielona jest przestrzeni¹ ubogokomórkow¹ (ang. hypocellular gap)
od warstwy astrocytów i po³o¿onej poni¿ej strefy przejœciowej. Obecnoœæ ubogokomórkowej przestrzeni zosta³a dotychczas stwierdzona jedynie w mózgu cz³owieka i
byd³a domowego [6]. Przestrzeñ ta zawiera nieliczne neurony i astrocyty. Tu¿ pod
ni¹ znajduje siê warstwa GFAP-pozytywnych astrocytów, które dziêki wypustkom mog¹
kontaktowaæ siê z komórkami ependymy [46]. Strefa subependymalna, a w
szczególnoœci warstwa astrocytów, stanowi niszê dla neuralnych komórek
macierzystych, komórek prekursorowych (progenitorowych) neuronów i gleju oraz
neuroblastów i glioblastów, czyli niedojrza³ych neuronów i komórek glejowych [41].
Neuroblasty powstaj¹ce w wyniku ró¿nicowania NSCs migruj¹ do opuszek wêchowych, gdzie zostaj¹ w³¹czone w pulê istniej¹cych ju¿ interneuronów. Migracja
neuroblastów modulowana jest przez przep³yw bia³kowych czynników, kr¹¿¹cych w
p³ynie mózgowo-rdzeniowym dziêki ruchom rzêsek ependymocytów [47].
3. NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
Identyfikacja neuralnych komórek macierzystych
Neuralne komórki macierzyste – NSCs (neural stem cells) to pierwotne komórki
cechuj¹ce siê nieograniczon¹ zdolnoœci¹ do samoodnawiania, a tak¿e ró¿nicowania
w jedn¹ z trzech linii komórek uk³adu nerwowego, tj. neurony, oligodendrocyty i
astrocyty [3, 6, 12].
Identyfikacja neuralnych komórek macierzystych jest trudnym zadaniem z kilku
przyczyn. NSCs stanowi¹ niewielk¹ populacjê w mózgu doros³ych osobników i ¿adne
markery molekularne, w³¹czaj¹c CD133 i GFAP, nie mog¹ jednoznacznie zidentyfikowaæ NSCs, szczególnie w warunkach in situ. Ponadto komórki macierzyste
powinny mieæ zdolnoœæ do samoodnowy i pluripotencjalnoœæ, co ogranicza ich
identyfikacjê do badañ w hodowli in vitro [3, 53]. Heterogennoœæ populacji NSCs
wyra¿a siê miêdzy innymi w ró¿norodnych profilach ekspresji bia³ek, a to powoduje,
¿e nie ma jednego uniwersalnego antygenu powierzchniowego dla precyzyjnej
identyfikacji tych komórek [4, 53]. Tym niemniej, istnieje pewien zestaw markerów
stosowanych do identyfikacji, izolacji i oczyszczania neuralnych komórek macierzystych czy komórek progenitorowych. Dostêpne dane literaturowe dotycz¹ce bia³ek
markerowych zebrano w tabeli 1.
Izolacja i hodowla NSCs in vitro
Hodowla in vitro neuralnych komórek macierzystych wyizolowanych z obszarów
neurogennych mózgu ssaków mo¿liwa jest w dwóch systemach: w postaci hodowli
jednowarstwowych (ang. monolayer system) oraz hodowli neurosfer (ang.
neurosphere system).
384
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
TABELA 1. Markery N SC s i komórek progenitorowych [wg 6, 52, 53, zmodyfikowane]
TABLE 1. Markers of N SC s and progenitor cells [modified from 6, 52, 53]
Marker
W ³aœciwoœci
Literatura
GFAP
Ulega ekspresji w astrocytach SEZ i SGZ gryzoni, naczelnych i cz³owieka
[20]
CD133
Jest to modyfikowane glikolitycznie bia³ko prominina- 1. W ependymocytach [16]
umiejscawia siê w wypustkach ich b³ony komórkowej. Wystêpuje w licznych
komórkach progenitorowych, a tak¿e nowotworowych
N estyna
Marker komórek neuroprogenitorowych oraz neuroepitelialnych komórek
macierzystych (ependymy)
[26]
Sox- 1, Sox- 2 C zynniki transkrypcyjne zaanga¿owane w neurogenezê, utrzymuj¹ komórki
neuroprogenitorowe w stanie niezró¿nicowanym
[9]
N otch- 1
Bia³ko receptorowe, ulega ekspresji w astrocytach SEZ, ependymocytach
i neurob lastach
[27]
Gli- 1
C zynnik transkrypcyjny, niezb êdny w funkcjonowaniu szlaku Shh, ulega
ekspresji w astrocytach i komórkach neuroprogenitorowych
[40]
Musashi- 1
Bia³ko wi¹¿¹ce siê z mRN A, zaanga¿owane w regulacjê sygnalizacji
na szlaku N otch, ob ecne w komórkach neuroprogenitorowych
[48]
PDGF - R
Receptory czynników wzrostowych promuj¹cych proliferacjê N SC s,
ob ecnoœæ receptorów wykazano w wielu wczesnych komórkach
neuroprogenitorowych
[36]
F GF - R
Dotychczas w literaturze opisane zosta³y procedury jednowarstwowych hodowli
neuralnych komórek macierzystych izolowanych z tkanek embrionalnych. Hodowle
jednowarstwowe s¹ zak³adane z zawiesiny komórek b¹dŸ z eksplantu tkanki
nerwowej, które umieszcza siê na pod³o¿u pokrytym substratem. Substratami
skutecznie zwiêkszaj¹cymi stopieñ adhezji komórek do pod³o¿a s¹ przyk³adowo
fibronektyna, poliornityna, kolagen, ¿elatyna, laminina [15]. W porównaniu z hodowl¹
neurosfer, hodowle jednowarstwowe s¹ bardziej homogenne. Zalet¹ adherentnych
hodowli w postaci monowarstwy jest te¿ lepsza ekspozycja komórek na sygna³y
œrodowiska hodowlanego. Byæ mo¿e dlatego wydajnoœæ ró¿nicowania NSCs w
kierunku komórek nerwowych w warunkach in vitro zwiêksza siê z 5% w przypadku
hodowli neurosfer do ponad 40% w hodowli jednowarstwowej [15].
Historycznie starszym systemem hodowli NSCs jest hodowla neurosfer. Metoda opisana
po raz pierwszy przez Reynoldsa i Weissa [44] polega³a na hodowli fragmentu tkanki
mózgowej doros³ej myszy w naczyniu hodowlanym niepokrytym substratem. Po¿ywka
hodowlana bez dodatku surowicy zawiera³a wysokie stê¿enie, 20 ng/ml, naskórkowego
czynnika wzrostu (EGF), który pobudza³ proliferacjê wy³¹cznie komórek prezentuj¹cych
na powierzchni receptor EGF. Po kilku dniach hodowli wiêkszoœæ komórek obumiera³a,
natomiast pozosta³e ¿ywe komórki tworzy³y swobodnie unosz¹ce siê kuliste agregaty, tzw.
neurosfery. Proliferuj¹ce niezró¿ni-cowane komórki neurosfer cechowa³a ekspresja nestyny.
Neurosfery te indukowano do ró¿nicowania, co skutkowa³o tworzeniem komórek
morfologicznie i antygenowo odpowiadaj¹cych neuronom i astrocytom [44]. Tworzenie
neurosfer zaobserwowano w przypadku zak³adania hodowli zarówno z mózgu doros³ych
zwierz¹t, jak i z tkanek embrionalnych [3].
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
385
Neurosfery w hodowli in vitro s¹ sferycznymi lub elipsoidalnymi strukturami
z³o¿onymi z kilkuset komórek w otoczce bogatej w sk³adniki macierzy zewn¹trzkomórkowej. Komórki neurosfer ró¿ni¹ siê wielkoœci¹, obecnoœci¹ lub brakiem
ziarnistoœci w cytosolu, liczb¹ mitochondriów, mog¹ znajdowaæ siê w ró¿nych fazach
cyklu komórkowego [8]. Komórki te wykazuj¹ ekspresjê receptorów EGF, FGF,
TGF-a, TGF-b, nestyny, GFAP, b-III tubuliny i specyficznego dla neuronów bia³ka
NeuN [3]. Tak szerokie spektrum antygenów dowodzi wysokiej heterogennoœci
neurosfer. Struktury te stanowi¹ agregaty w³aœciwych NSCs, komórek neuroprogenitorowych na ró¿nym etapie ró¿nicowania oraz dojrza³ych neuronów i komórek
gleju. Neurosfery to wysoce z³o¿one struktury biologiczne, w których w tym samym
czasie zachodz¹ procesy fagocytozy, mitozy, apoptozy, a nawet nekrozy [8]. Szacunki
dotycz¹ce odsetka NSCs w neurosferach wskazuj¹, ¿e jest ich zaledwie 0,16% [43].
Równie¿ same neurosfery ró¿ni¹ siê miêdzy sob¹ wielkoœci¹ i morfologi¹ (ryc. 1).
Mog¹ byæ nieregularnego kszta³tu z wystaj¹cymi drobnymi wyrostkami przypominaj¹cymi rzêski lub regularnie kuliste. Niektóre neurosfery wykszta³caj¹ wyraŸne
pseudopodia, dziêki którym mog¹ czasowo ulegaæ adhezji do pod³o¿a, a nastêpnie
spontanicznie odrywaj¹ siê od dna [8].
RYCINA 1. Neurosfery z mózgu doros³ej œwini w hodowli in vitro (badania w³asne)
FIGURE 1. Neurospheres from adult pig brain cultured in vitro
Metoda hodowli neurosfer, mimo swoich ograniczeñ, stanowi cenne narzêdzie w
badaniach nad biologi¹ komórek macierzystych uk³adu nerwowego. Uzyskane ze
skrawka tkanki nerwowej i rozproszone komórki umieszcza siê w po¿ywce
pozbawionej surowicy, z dodatkiem czynników wzrostu: EGF w stê¿eniu 20 ng/ml i
bFGF w stê¿eniu 10 ng/ml. W tych warunkach prze¿ywaj¹ jedynie komórki wra¿liwe
na mitogeny, po 6–8 dniach hodowli komórki te tworz¹ neurosfery [18]. Pierwotne
neurosfery mo¿na pasa¿owaæ, kiedy osi¹gn¹ œrednicê oko³o 100–150 mm. Komórki
neurosfer pierwotnych, rozproszone enzymatycznie (za pomoc¹ 0,05% trypsyny), po
oko³o 7 dobach od pasa¿u tworz¹ neurosfery wtórne. Zdolnoœæ tworzenia wielu
kolejnych pokoleñ neurosfer jest dowodem na obecnoœæ NSCs zdolnych do ci¹g³ego
samoodnawiania [18, 43].
386
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
Chiasson i wsp. potwierdzili obecnoœæ neuralnych komórek macierzystych w
warstwie ependymy, jak i subependymy [13]. Jednak zdolnoœæ tych komórek do
tworzenia in vitro neurosfer pierwotnych i wtórnych jest ró¿na. Komórki pochodzenia
ependymalnego z ³atwoœci¹ proliferuj¹ i tworz¹ neurosfery pierwotne niezale¿nie od
obecnoœci w po¿ywce hodowlanej EGF i bFGF, natomiast po enzymatycznej
dysocjacji nie tworz¹ neurosfer wtórnych. Neurosfery pierwotne s¹ niewielkie –
poni¿ej 0,1 mm œrednicy. Umieszczone w warunkach ró¿nicuj¹cych daj¹ pocz¹tek
wy³¹cznie komórkom GFAP-pozytywnym. Natomiast populacja NSCs pochodzenia
subependymalnego wykazuje wiêksz¹ zdolnoœæ do samoodnawiania, tworzenia
neurosfer pierwotnych i wtórnych, jednak warunkiem niezbêdnym jest obecnoœæ w
œrodowisku hodowlanym mitogenów EGF lub bFGF. Neurosfery pierwotne pochodzenia subependymalnego maj¹ co najmniej kilkakrotnie wiêksz¹ œrednicê (od 0,5 do 1
mm) w porównaniu z neurosferami pierwotnymi z komórek ependymalnych. W
warunkach ró¿nicuj¹cych z NSCs pochodzenia subependymalnego tworz¹ siê
zarówno komórki GFAP+, jak i neurony [13].
Kontrola proliferacji i ró¿nicowania NSCs
W tkankach doros³ego organizmu komórki macierzyste s¹ umiejscowione w tzw.
niszach, czyli regionach macierzy zewn¹trzkomórkowej. Znacz¹c¹ rolê w kontroli
proliferacji i ró¿nicowania komórek macierzystych odgrywa obecnoœæ w obrêbie
niszy zarówno dojrza³ych komórek i wydzielanych przez nie czynników wzrostu, jak
i bia³ek macierzy zewn¹trzkomórkowej. W kontrolê proliferacji i ró¿nicowania
neuralnych komórek macierzystych in vivo zaanga¿owane s¹ liczne szlaki sygna³owe.
Ich wspó³dzia³anie determinuje losy NSCs, reguluj¹c tempo proliferacji i samoodnawiania lub kierunek ró¿nicowania [6] (ryc. 2). Próba odtworzenia zawi³ych zale¿noœci
i pe³nego scharakteryzowania czynników i szlaków sygna³owych tworz¹cych nisze
dla NSCs jest ci¹gle wyzwaniem dla badaczy. Najlepiej poznane cz¹steczki i szlaki
sygna³owe opisano poni¿ej.
EGF – naskórkowy czynnik wzrostu (ang. epidermal growth factor) to klasyczny
mitogen stosowany w hodowli NSCs [43, 44]. Zwiêksza tempo proliferacji
niezró¿nicowanych komórek zarówno in vitro, jak i in vivo. Jego dzia³anie in vivo
jest jednak szersze – EGF znacz¹co indukuje powstawanie GFAP-pozytywnych
komórek astrogleju i ich migracjê z SEZ do s¹siaduj¹cych stref mózgu. Odbywa
siê to kosztem ograniczenia ró¿nicowania w kierunku neuronów i zmniejszenia
ruchliwoœci neuroblastów [33].
bFGF – zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (ang. basic fibroblast growth factor) w
warunkach in vitro zwiêksza tempo proliferacji niezró¿nicowanych komórek, podczas gdy
usuniêcie tego czynnika indukuje neurogenezê [3, 43]. Infuzja bFGF do komór bocznych mózgu
gryzoni powoduje natomiast zwiêkszenie intensywnoœci neurogenezy w SEZ [6]. Odmienna
reakcja komórek na ten sam czynnik dowodzi, ¿e hodowle in vitro nie zawsze stanowi¹ idealne
odzwierciedlenie warunków panuj¹cych in vivo. W tym przypadku kontrola tempa proliferacji
i ró¿nicowania przez bFGF mo¿e dodatkowo zale¿eæ od wspó³dzia³ania z innymi czynnikami
wzrostowymi oraz od zmian w profilu ekspresji aktywnych receptorów [25].
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
387
RYCINA 2. Kontrola proliferacji i ró¿nicowania neuralnych komórek macierzystych (kompilacja danych
literaturowych): (+) oznacza stymulacjê, (–) hamowanie, * wp³yw stwierdzony tylko w warunkach in
vivo
FIGURE 2. The control of proliferation and differentiation of neural stem cells (compilation of literature
data): (+) stimulation, (–) inhibition, * influence observed in vivo only
PDGF – p³ytkopochodny czynnik wzrostu (ang. platelet-derived growth factor)
jest równie¿ skutecznym mitogenem dla NSCs izolowanych z mózgu doros³ych
myszy, jednak zwiêkszenie tempa proliferacji komórek obserwowano jedynie w
przypadku zastosowania PDGF wraz z bFGF [28]. Infuzja PDGF do komór
bocznych mózgu gryzoni powoduje, podobnie jak w przypadku EGF, aktywacjê
astrocytów SEZ kosztem ograniczenia neurogenezy [28].
388
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
Sygnalizacja z udzia³em BMP (ang. bone morphogenetic protein) wzmaga
tworzenie astrocytów in vitro i in vivo. Nadekspresja BMP7 w mózgu doros³ych
osobników powoduje zmniejszenie tempa proliferacji i neurogenezy, zwiêksza natomiast ró¿nicowanie w kierunku astrocytów. Przeciwstawny efekt wywo³uje noggina,
bia³ko bêd¹ce rozpuszczalnym antagonist¹ szlaku sygnalizacyjnego, w którym
uczestniczy BMP [14].
Szlak sygnalizacyjny Notch jest uniwersalnym systemem sygnalizacji, zapewniaj¹cym utrzymanie zdolnoœci komórek macierzystych do samoodnawiania przez
zahamowanie procesów ich ró¿nicowania [45]. W przypadku neuralnych komórek
macierzystych, aktywacja szlaku Notch powoduje zwiêkszenie tempa proliferacji
NSCs kosztem zahamowania neurogenezy [2, 5, 10]. Bia³ko b³onowe receptora
Notch, podobnie jak bia³ko Musashi – jeden z elementów szlaku sygna³owego Notch,
stanowi¹ markery proliferuj¹cych komórek uk³adu nerwowego (tab. 1). Oprócz
szlaku Notch, wa¿n¹ rolê w utrzymaniu puli niezró¿nicowanych NSCs odgrywa tak¿e
szlak sygnalizacyjny Shh (ang. sonic hedgehog homolog) [5]. Jednym z elementów
tego szlaku jest czynnik transkrypcyjny z rodziny bia³ek Gli (ang. glioma-associated
oncogene homolog), który tak¿e proponowany jest jako jeden z markerów komórek
neuroprogenitorowych.
Neurotransmitery wydzielane przez dojrza³e komórki neuronów s¹ kolejnymi
czynnikami dzia³aj¹cymi w obrêbie nisz dla neuralnych komórek macierzystych,
niepozostaj¹cymi bez wp³ywu na zdolnoœæ NSCs do proliferacji b¹dŸ ró¿nicowania.
Astrocyty strefy subependymalnej maj¹ na swojej powierzchni aktywne receptory
kwasu g-aminomas³owego (GABA) i reaguj¹ obni¿eniem tempa proliferacji oraz
tworzeniem neuroblastów na obecnoœæ GABA w œrodowisku. Powstaj¹ce neuroblasty wydzielaj¹ kolejne cz¹steczki GABA, co stanowi mechanizm sprzê¿enia
zwrotnego kontroluj¹cego proliferacjê i ró¿nicowanie astrocytów [38].
Serotonina (5-hydroksytryptamina, 5-HT) i uk³ad serotoninergiczny równie¿
moduluj¹ tempo neurogenezy w mózgu doros³ych zwierz¹t, szczególnie w obszarze
hipokampa [19]. Podwy¿szony poziom serotoniny zwiêksza intensywnoœæ neurogenezy in vivo, podobny efekt obserwowano tak¿e w hodowlach neuralnych
komórek macierzystych in vitro [7]. W regulacjê procesu neurogenezy za
poœrednictwem serotoniny bezpoœrednio zaanga¿owane s¹ receptory 5-HT1A, co
wykazano w kilku eksperymentach in vitro [7, 19].
Dopamina ogranicza proliferacjê i samoodnawianie neuralnych komórek macierzystych. Jak dot¹d jednak nie wykazano bezsprzecznie ekspresji receptorów
dopaminy na powierzchni komórek NSCs doros³ych ssaków, dlatego niezbêdne s¹
dalsze precyzyjne badania [34].
Melatonina jest hormonem produkowanym przez szyszynkê – jego g³ówna
funkcja to kontrola rytmu snu i czuwania, ale tak¿e chroni komórki nerwowe przed
œmierci¹ wywo³an¹, np. dzia³aniem substancji neurotoksycznych. Wyniki najnowszych
badañ wykaza³y, ¿e melatonina zwiêksza tempo proliferacji neuralnych komórek
macierzystych i komórek neuroprogenitorowych wyizolowanych ze strefy subependymalnej mózgu doros³ych myszy. Komórki te cechuje wysoki poziom ekspresji
receptora melatoniny [50].
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
389
Neurotrofiny, takie jak: czynnik wzrostu nerwów – NGF (nerve growth factor),
czynnik neurotroficzny pochodzenia mózgowego – BDNF (brain-derived neurotrophic factor) oraz neurotrofina3 (NT3) kontroluj¹ w warunkach fizjologicznych
proliferacjê oraz ró¿nicowanie NSCs. Aktywowane receptory tych czynników
charakteryzuj¹ siê aktywnoœci¹ kinazy tyrozynowej i fosforyluj¹ bia³ka z domen¹
SH2 lub PH, zapocz¹tkowuj¹c w ten sposób odpowiedŸ komórkow¹ [1]. Stany
patologiczne, np. niedokrwienie mózgu, wywo³uj¹ wzrost stê¿enia wymienionych
neurotrofin, co przyspiesza ró¿nicowanie komórek macierzystych w neurony.
Macierz zewn¹trzkomórkowa jest kolejnym istotnym elementem niszy, a jej sk³adniki mog¹
byæ zaanga¿owane w regulacjê samoodnowy lub ró¿nicowania NSCs. Heparyna, kolagen,
LewisX i Tenascyna-C to najlepiej poznane sk³adniki macierzy zewn¹trzkomórkowej komórek
uk³adu nerwowego [6]. Ich wp³yw na tempo proliferacji lub ró¿nicowania NSCs jest poœredni
poprzez interakcjê z mitogenami i innymi czynnikami [11].
Hodowla neurosfer in vitro w po¿ywce pozbawionej surowicy, zawieraj¹cej EGF
i/lub bFGF pozwala na nieograniczon¹ proliferacjê komórek, natomiast pasa¿owanie
neurosfer umo¿liwia uzyskanie praktycznie nieskoñczonej liczby kolejnych pokoleñ
neurosfer [18]. Po¿ywki hodowlane z surowic¹, pozbawione dodatku mitogenów EGF
i bFGF, aktywuj¹ spontaniczne ró¿nicowanie neuralnych komórek macierzystych w
obrêbie neurosfery g³ównie w kierunku astrocytów, a w mniejszym stopniu w kierunku
neuronów i oligodendrocytów. Dodanie do po¿ywki hodowlanej czynnika neurotroficznego, np. NGF lub BDNF znacz¹co zwiêksza liczebnoœæ neuronów w populacji
zró¿nicowanych komórek [3].
Mo¿liwe jest ró¿nicowanie ca³ych neurosfer lub komórek uzyskanych w wyniku
ich enzymatycznej dyspersji [18]. Ró¿nicowanie komórek rozproszonych enzymatycznie i hodowanych w postaci monowarstwy pozwala na precyzyjne ukierunkowanie ró¿nicowania i uzyskanie znacznej liczby komórek wyspecjalizowanych.
4. PERSPEKTYWY WYKORZYSTANIA NEURALNYCH
KOMÓREK MACIERZYSTYCH W LECZENIU CHORÓB
UK£ADU NERWOWEGO
Zdolnoœæ neuralnych komórek macierzystych do d³ugotrwa³ej proliferacji i
regenerowania dojrza³ych komórek uk³adu nerwowego daje nadziejê na wykorzystanie NSCs do leczenia chorób neurodegeneracyjnych, m.in. choroby Alzheimera,
choroby Parkinsona, stwardnienia rozsianego oraz udarów mózgu, które wi¹¿¹ siê
z utrat¹ wielu milionów neuronów. Wykorzystanie NSCs w terapii schorzeñ uk³adu
nerwowego mo¿e odbywaæ siê w dwojaki sposób:
1) poprzez przeszczep egzogennych NSCs – W dotychczasowych badaniach
na mysich modelach chorób uk³adu nerwowego przeszczepiano ró¿norodne komórki,
zarówno NSCs, jak i komórki neuroprogenitorowe oraz niedojrza³e neurony [53].
Celem przeszczepiania NSCs lub komórek progenitorowych jest nie tylko ich
ró¿nicowanie siê w dojrza³e komórki uk³adu nerwowego, ale te¿ zapewnienie
390
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
wsparcia dla procesów regeneracyjnych in vivo poprzez wydzielanie odpowiednich
iloœci czynników neurotroficznych i przeciwzapalnych. Pozwala to na czêœciowe
z³agodzenie skutków uszkodzenia, niezale¿nie od jego przyczyny [3]. Istniej¹
doniesienia wskazuj¹ce, ¿e wprowadzone do¿ylnie, wstêpnie zró¿nicowane NSCs,
pokonuj¹ barierê krew-mózg i s¹ zdolne do integracji strukturalnej oraz funkcjonalnej
z tkank¹ nerwow¹ organizmu biorcy [35]. Dodatkowo NSCs wykazuj¹ tropizm w
kierunku uszkodzonej tkanki b¹dŸ zmian nowotworowych [35, 53]. Mechanizm tego
zjawiska polega prawdopodobnie na interakcjach ligand-receptor, przy czym czynników
wywo³uj¹cych dodatni¹ chemotaksjê komórek macierzystych lub progenitorowych
mo¿e byæ nawet kilkanaœcie. Nieliczne zidentyfikowane czynniki to EGF i jego
receptor, SCF/c-Kit i HGF/c-Met [54]. Istnienie dodatniego tropizmu ukierunkowanego w stronê komórek nowotworowych stwarza mo¿liwoœæ wykorzystania NSCs
tak¿e jako transporterów leków skierowanych przeciwko nowotworom mózgu [35].
2) poprzez stymulacjê endogennych NSCs – W warunkach fizjologicznych
procesy proliferacji i ró¿nicowania komórek macierzystych s¹ precyzyjnie regulowane
poprzez ró¿norodne oddzia³ywania i systemy sygnalizacji w obrêbie niszy. Dopiero
poznanie i zrozumienie tych z³o¿onych mechanizmów pozwoli na pe³n¹ kontrolê
neurogenezy in vivo. Ograniczeniem dla stosowania czynników neurotroficznych
pobudzaj¹cych neurogenezê by³o dotychczas pokonanie przez nie bariery krew-mózg
i precyzyjne dostarczenie tych bia³ek do miejsca uszkodzenia [23]. Obecnie jest to
mo¿liwe dziêki zastosowaniu terapii genowej i wektorów wirusowych [37].
Aktualne badania dotycz¹ wykorzystania NSCs w terapii zaburzeñ neurologicznych
– depresji i schizofrenii [53]. Depresjê bardzo czêsto wyzwala d³ugotrwa³y stres,
co wi¹¿e siê ze zwiêkszon¹ produkcj¹ kortyzolu. Hormon ten oddzia³uje neurotoksycznie na komórki uk³adu nerwowego oraz powoduje os³abienie procesów
neurogenezy [5]. Wykazano, ¿e leki przeciwdepresyjne z grupy agonistów receptorów serotoninowych, znacz¹co zwiêkszaj¹ neurogenezê u osób doros³ych [21, 29].
Skuteczne okaza³o siê tak¿e leczenie depresji w modelach zwierzêcych za pomoc¹
czynników neurotroficznych, takich jak BDNF, zwiêkszaj¹cych neurogenezê nawet
po zastosowaniu pojedynczej dawki leku [49]. Argumentem na poparcie tych tez
mo¿e byæ 4–6-tygodniowy okres up³ywaj¹cy od podania leku przeciwdepresyjnego
do wyst¹pienia widocznego efektu terapeutycznego. Odpowiada to czasowi, w jakim
neurony dziel¹ siê, ró¿nicuj¹, a nastêpnie w³¹czaj¹ siê funkcjonalnie w tkankê [53].
Nieprawid³owoœci w neurogenezie mog¹ przyczyniaæ siê tak¿e do rozwoju
schizofrenii. W tym przypadku patogenezê choroby wi¹¿e siê ze zmniejszeniem tempa
proliferacji NSCs w zawoju zêbatym hipokampa, co potwierdzono doœwiadczalnie
u pacjentów chorych na schizofreniê [5]. Istotn¹ rolê przypisuje siê genowi DISC1
(Disrupted in Schizophrenia 1), który kontroluje proces funkcjonalnej integracji
neuronów powstaj¹cych u doros³ych osobników. Uszkodzenie tego genu nie jest
jedyn¹ przyczyn¹, ale jednym z czynników sprzyjaj¹cych rozwojowi schizofrenii [21].
Tak wiêc, zastosowanie terapii z u¿yciem egzogennych neuralnych komórek
macierzystych pozwoli³oby na przywrócenie w³aœciwego poziomu neurogenezy.
Wykorzystanie NSCs w terapii chorób uk³adu nerwowego budzi jednak pewne
zastrze¿enia zwi¹zane z wydajnoœci¹ izolacji neuralnych komórek macierzystych z
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
391
tkanki mózgu lub innych Ÿróde³ ich pozyskiwania. Równie wa¿na jest precyzyjna
kontrola ró¿nicowania przeszczepionych NSCs oraz funkcjonalna integracja komórek
w warunkach in vivo. Liczne badania wskazuj¹, ¿e przeszczepione NSCs wywieraj¹
g³ównie efekt pobudzenia procesów regeneracyjnych oraz przywrócenia homeostazy
w miejscu uszkodzenia [3]. Ponadto NSCs hodowane in vitro mog¹ staæ siê
narzêdziem do zrozumienia mechanizmów powstawania chorób uk³adu nerwowego
oraz do testowania nowych leków. Niezale¿nie od zastosowanej strategii terapeutycznej, leczenie chorób uk³adu nerwowego z udzia³em neuralnych komórek
macierzystych wymaga jeszcze wielu dalszych badañ.
LITERATURA
[1] ABE K. Therapeutic potential of neurotrophic factors and neural stem cells against ischemic brain injury.
J Cereb Blood Flow Metab 2000; 20: 1393–1408.
[2] ABLES JL, DECAROLIS NA, JOHNSON MA, RIVERA PD, GAO Z, COOPER DC, RADTKE F, HSIEH
J, EISCH AJ. Notch1 is required for maintenance of the reservoir of adult hippocampal stem cells.
J Neurosci 2010; 30: 10484–10492.
[3] AHMED S. The culture of neural stem cells. J Cell Biochem 2009; 106: 1–6.
[4] ALVAREZ-BUYLLA A, KOHWI M, NGUYEN TM, MERKLE FT. The heterogeneity of adult neural
stem cells and the emerging complexity of their niche. Cold Spring Harb Symp Quant Biol 2008; 73:
357–365.
[5] BALU DT, LUCKI I. Adult hippocampal neurogenesis: regulation, functional implications, and contribution to disease pathology. Neurosci Biobehav Rev 2009; 33: 232–252.
[6] BASAK O, TAYLOR V. Stem cells of the adult mammalian brain and their niche. Cell Mol Life Sci 2009;
66: 1057–1072.
[7] BENNINGHOFF J, GRITTI A, RIZZI M, LAMORTE G, SCHLOESSER RJ, SCHMITT A, ROBEL S,
GENIUS J, MOESSNER R, RIEDERER P, MANJI HK, GRUNZE H, RUJESCU D, MOELLER HJ, LESCH
KP, VESCOVI AL. Serotonin depletion hampers survival and proliferation in neurospheres derived from
adult neural stem cells. Neuropsychopharmacology 2010; 35: 893–903.
[8] BEZ A, CORSINI E, CURTI D, BIGGIOGERA M, COLOMBO A, NICOSIA RF, PAGANO SF, PARATI
EA. Neurosphere and neurosphere-forming cells: morphological and ultrastructural characterization.
Brain Res 2003; 993: 18–29.
[9] BRAZEL CY, LIMKE TL, OSBORNE JK, MIURA T, CAI J, PEVNY L, RAO MS. Sox2 expression defines a
heterogenous population of neurosphere-forming cells in the adult murine brain. Aging Cell 2005; 4: 197–207.
[10] CAMPOS LS, DECKER L, TAYLOR V, SKARNES W. Notch, epidermal growth factor receptor, and
beta1-integrin pathways are coordinated in neural stem cells. J Biol Chem 2006; 281: 5300–5309.
[11] CAPELA A, TEMPLE S. LeX is expressed by principle progenitor cells in the embryonic nervous system,
is secreted into their environment and binds Wnt-1. Dev Biol 2006; 291: 300–313.
[12] CARLÉN M, MELETIS K, GÖRITZ C, DARSALIA V, EVERGREN E, TANIGAKI K, AMENDOLA M,
BARNABÉ-HEIDER F, YEUNG MS, NALDINI L, HONJO T, KOKAIA Z, SHUPLIAKOV O, CASSIDY
RM, LINDVALL O, FRISÉN J. Forebrain ependymal cells are Notch-dependent and generate neuroblasts
and astrocytes after stroke. Nat Neurosci 2009; 12: 259–267.
[13] CHIASSON BJ, TROPEPE V, MORSHEAD CM, VAN DER KOOY D. Adult mammalian forebrain
ependymal and subependymal cells demonstrate proliferative potential, but only subependymal cells
have neural stem cell characteristics. J Neurosci 1999; 19: 4462–4471.
[14] CHO SR, BENRAISS A, CHMIELNICKI E, SAMDANI A, ECONOMIDES A, GOLDMAN SA. Induction
of neostriatal neurogenesis slows disease progression in a transgenic murine model of Huntington disease.
J Clin Invest 2007; 117: 2889–2902.
[15] CONTI L, POLLARD SM, GORBA T, REITANO E, TOSELLI M, BIELLA G, SUN Y, SANZONE S,
YING QL, CATTANEO E, SMITH A. Niche-independent symmetrical self-renewal of a mammalian
tissue stem cell. PLoS Biol 2005; 3: e283.
392
K. ROSZEK, J. CZARNECKA, M. KOMOSZYÑSKI
[16] COSKUN V, WU H, BLANCHI B, TSAO S, KIM K, ZHAO J, BIANCOTTI JC, HUTNICK L, KRUEGER
RC Jr, FAN G, de VELLIS J, SUN YE. CD133+ neural stem cells in the ependyma of mammalian postnatal
forebrain. Proc Natl Acad Sci USA 2008; 105: 1026–1031.
[17] Del BIGIO MR. The ependyma: a protective barrier between brain and cerebrospinal fluid. Glia 1995; 14: 1–13.
[18] DELEYROLLE LP, REYNOLDS BA. Isolation, expansion, and differentiation of adult mammalian
neural stem and progenitor cells using the neurosphere assay. Methods Mol Biol 2009; 549: 91–101.
[19] DJAVADIAN RL. Serotonin and neurogenesis in the hippocampal dentate gyrus of adult mammals. Acta
Neurobiol Exp 2004; 64: 189–200.
[20] DOETSCH F, CAILLE I, LIM DA, GARCIA-VERDUGO JM, ALVAREZ-BUYLLA A. Subventricular
zone astrocytes are neural stem cells in the adult mammalian brain. Cell 1999; 97: 703–716.
[21] EISCH AJ, CAMERON HA, ENCINAS JM, MELTZER LA, MING GL, OVERSTREET-WADICHE L S. Adult
neurogenesis, mental health, and mental illness: hope or hype? J Neurosci 2008; 28: 11785–11791.
[22] ERIKSSON PS, PERFILIEVA E, BJÖRK-ERIKSSON T, ALBORN AM, NORDBORG C, PETERSON DA,
GAGE FH. Neurogenesis in the adult human hippocampus. Nat Med 1998; 4: 1313–1317.
[23] FUMAGALLI F, MOLTENI R, CALABRESE F, MAJ PF, RACAGNI G, RIVA MA. Neurotrophic factors
in neurodegenerative disorders: potential for therapy. CNS Drugs 2008; 22: 1005–1019.
[24] GARCIA-VERDUGO JM, FERRÓN S, FLAMES N, COLLADO L, DESFILIS E, FONT E. The proliferative ventricular zone in adult vertebrates: a comparative study using reptiles, birds, and mammals. Brain
Res Bull 2002; 57: 765–775.
[25] GRITTI A, FRÖLICHSTHAL-SCHOELLER P, GALLI R, PARATI EA, COVA L, PAGANO SF, BJORNSON CR, VESCOVI AL. Epidermal and fibroblast growth factors behave as mitogenic regulators for a
single multipotent stem cell-like population from the subventricular region of the adult mouse forebrain.
J Neurosci 1999; 19: 3287–3297.
[26] HOMBACH-KLONISCH S, PANIGRAHI S, RASHEDI I, SEIFERT A, ALBERTI E, POCAR P, KURPISZ
M, SCHULZE-OSTHOFF K, MACKIEWICZ A, LOS M. Adult stem cells and their trans-differentiation
potential-perspectives and therapeutic applications. J Mol Med 2008; 86: 1301–1314.
[27] IRVIN DK, NAKANO I, PAUCAR A, KORNBLUM HI. Patterns of Jagged1, Jagged2, Delta-like 1 and
Delta-like 3 expression during late embryonic and postnatal brain development suggest multiple functional roles in progenitors and differentiated cells. J Neurosci Res 2004; 75: 330–343.
[28] JACKSON EL, GARCIA-VERDUGO JM, GIL-PEROTIN S, ROY M, QUINONES-HINOJOSA A, VANDENBERG S, ALVAREZ-BUYLLA A. PDGFR alpha-positive B cells are neural stem cells in the adult
SVZ that form glioma-like growths in response to increased PDGF signaling. Neuron 2006; 51: 187–199.
[29] JACOBS B, van PRAAG H, GAGE F. Adult brain neurogenesis and psychiatry: a novel theory of
depression. Mol Psychiatry 2000; 5: 262–269.
[30] JARVISA C, ANDREW D. Correlated electrophysiology and morphology of the ependyma in rat hypothalamus. J Neurosci 1988; 8: 3691–3702.
[31] JOHANSSON CB, MOMMA S, CLARKE DL, RISLING M, LENDAHL U, FRISEN J. Identification of a
neural stem cell in the adult mammalian central nervous system. Cell 1999a; 96: 25–34.
[32] JOHANSSON CB, SVENSSON M, WALLSTEDT L, JANSON AM, FRISEN J. Neural stem cells In the
adult human brain. Exp Cell Res 1999; 253: 733–736.
[33] KIM Y, COMTE I, SZABO G, HOCKBERGER P, SZELE FG. Adult mouse subventricular zone stem and
progenitor cells are sessile and epidermal growth factor receptor negatively regulates neuroblast migration. PLoS One 2009; 4: e8122.
[34] KIPPIN TE, KAPUR S, van der KOOY D. Dopamine specifically inhibits forebrain neural stem cell
proliferation, suggesting a novel effect of antipsychotic drugs. J Neurosci 2005; 25: 5815–5823.
[35] KOSZTOWSKI T, ZAIDI HA, QUINONES-HINOJOSA A. Applications of neural and mesenchymal stem
cells in the treatment of gliomas. Expert Rev Anticancer Ther 2009; 9: 597–612.
[36] LACHAPELLE F, AVELLANA-ADALID V, NAIT-OUMESMAR B, BARON-VAN EVERCOOREN A.
Fibroblast growth factor-2 (FGF-2) and platelet-derived growth factor AB (PDGF AB) promote adult
SVZ-derived oligodendrogenesis in vivo. Mol Cell Neurosci 2002; 20: 390–403.
[37] LIM ST, AIRAVAARA M, HARVEY BK. Viral vectors for neurotrophic factor delivery: a gene therapy
approach for neurodegenerative diseases of the CNS. Pharmacol Res 2010; 61: 14–26.
[38] LIU X, WANG Q, HAYDAR TF, BORDEY A. Nonsynaptic GABA signaling in postnatal subventricular
zone controls proliferation of GFAP-expressing progenitors. Nat Neurosci 2005; 8: 1179–1187.
[39] MELETIS K, BARNABÉ-HEIDER F, CARLÉN M, EVERGREN E, TOMILIN N, SHUPLIAKOV O, FRISÉN
J. Spinal cord injury reveals multilineage differentiation of ependymal cells. PLoS Biol 2008; 6: e182.
NEURALNE KOMÓRKI MACIERZYSTE
393
[40] PALMA V, LIM DA, DAHMANE N, SÁNCHEZ P, BRIONNE TC, HERZBERG CD, GITTON Y,
CARLETON A, ALVAREZ-BUYLLA A, RUIZ ALTABA A. Sonic hedgehog controls stem cell behavior
in the postnatal and adult brain. Development 2005; 132: 335–344.
[41] QUINONES-HINOJOSAA, SANAI N, GONZALEZ-PEREZ O, GARCIA-VERDUGO JM. The human brain
subventricular zone: stem cells in this niche and its organization. Neurosurg Clin N Am 2007; 18: 15–20.
[42] QUINONES-HINOJOSA A, SANAI N, SORIANO-NAVARRO M, GONZALEZ-PEREZ O, MIRZADECH
Z, GIL-PEROTIN S, ROMERO-RODRIGUEZ R, BERGER M, GARCIA-VERDUGO JM, ALVAREZBUYLLA A. Cellular composition and cytoarchitecture of the adult human subventricular zone: a niche
of neural stem cells. J Comp Neurol 2006; 494: 415–434.
[43] REYNOLDS BA, RIETZE RL. Neural stem cells and neurospheres- re-evaluating the relationship. Nat
Methods 2005; 2: 333–336.
[44] REYNOLDS BA, WEISS S. Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult
mammalian central nervous system. Science 1992; 255: 1707–1710.
[45] ROSZEK K, KOMOSZYÑSKI M. Kontrola i kierunki ró¿nicowania komórek macierzystych krwi pêpowinowej oraz ich zastosowanie terapeutyczne. Post Hig Med Dosw 2008; 62: 660–667.
[46] SANAI N, TRAMONTIN AD, QUINONES-HINOJOSA A, BARBARO NM, GUPTA N, KUNWAR S,
LAWTON MT, MCDERMOTT MW, PARSA AT, GARCIA-VERDUGO JM, BERGER MS, ALVAREZBUYLLA A. Unique astrocyte ribbon in adult human brain contains neural stem cells but lacks chain
migration. Nature 2004; 427: 740–744.
[47] SAWAMOTO K, WICHTERLE H, GONZALEZ-PEREZ O, CHOLFIN JA, YAMADA M, SPASSKY N,
MURCIA NS, GARCIA-VERDUGO JM, MARIN O, RUBENSTEIN JL, TESSIER-LAVIGNE M, OKANO
H, ALVAREZ-BUYLLA A. New neurons follow the flow of cerebrospinal fluid in the adult brain. Science
2006; 311: 629–632.
[48] SCHWARTZ PH, BRYANT PJ, FUJA TJ, SU H, O'DOWD DK, KLASSEN H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res 2003; 74: 838–851.
[49] SHIRAYAMA Y, CHEN A, NAKAGAWA S, RUSSELL D, DUMAN R. Brain-derived neurotrophic factor
produces antidepressant effects in behavioural models of depression. J Neurosci 2002; 22: 3251–3261.
[50] SOTTHIBUNDHU A, PHANSUWAN-PUJITO P, GOVITRAPONG P. Melatonin increases proliferation of
cultured neural stem cells obtained from adult mouse subventricular zone. J Pineal Res 2010; 49: 291–300.
[51] SPASSKY N, MERKLE FT, FLAMES N, TRAMONTIN AD, GARCIA-VERDUGO JM, ALVAREZBUYLLA A. Adult ependymal cells are postmitotic and are derived from radial glial cells during embryogenesis. J Neurosci 2005; 25: 10–18.
[52] TÁRNOK A, ULRICH H, BOCSI J. Phenotypes of stem cells from diverse origin. Cytometry A 2010; 77:
6–10.
[53] VALENZUELA M, SIDHU K, DEAN S, SACHDEV P. Neural stem cell therapy for neuropsychiatric
disorders. Acta Neuropsychiatrica 2007; 19: 11–26.
[54] YIP S, SABETRASEKH R, SIDMAN RL, SNYDER EY. Neural stem cells as novel cancer therapeutic
vehicles. Eur J Cancer 2006; 42: 1298–1308.
Redaktor prowadz¹cy – Bo¿ena Kamiñska-Kaczmarek
Otrzymano: 28.02. 2011 r.
Przyjêto: 21.03.2011 r.
Katarzyna Roszek,
Zak³ad Biochemii, Instytut Biologii Ogólnej i Molekularnej,
Uniwersytet Miko³aja Kopernika,
ul. Gagarina 7, 87-100 Toruñ,
e-mail: [email protected]
Download