WPŁYW SUBSTANCJI CZYNNYCH WYSTĘPUJĄCYCH W
advertisement
Bioaktywne składniki żywności funkcjonalnej Ćwiczenie 2 część praktyczna ___________________________________________________________________________ WPŁYW SUBSTANCJI CZYNNYCH WYSTĘPUJĄCYCH W ŻYWNOŚCI NA WZROST BAKTERII PROBIOTYCZNYCH LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS LA-5 Cel ćwiczenia Zbadanie wpływu substancji bioaktywnych zawartych w ekstraktach z roślin o znanym działaniu prozdrowotnym (cytryniec chiński, sok z noni, pestki grejpfruta (Citrosept), jagody goji, żurawina) na wzrost bakterii probiotycznych Lactobacillus acidophilus LA-5. Zbadanie wpływu etanolu na wzrost bakterii probiotycznych. 1. Wpływ ekstraktów roślinnych na L. acidophilus LA-5 1. Przygotować gęstwę bakterii w MRS o gęstości ok. 0,5 MF (standard McFarlanda 0,5 odpowiada 1,5 x 108 cfu/ml). 2. Do 15 kolejnych probówek odmierzyć po 9,4 ml jałowego podłoża MRS, a do 5 probówek odmierzyć po 9,9 ml MRS. 3. 2 probówki z 9,9 ml czystego MRS opisać jako kontrola negatywna – i odstawić do inkubacji. 4. Do pozostałych 3 probówek z 9,9 ml MRS dodać po 0,1 ml gęstwy bakterii, opisać jako kontrola pozytywna i odstawić do inkubacji. 5. Do 3 probówek z 9,4 ml MRS dodać po 0,5 ml etanolowych ekstraktów z cytryńca chińskiego (5% stężenie końcowe), do następnych 3 probówek – po 0,5 ml ekstraktu z pestek grejpfruta (Citroseptu – ostrożnie pipetować, gęste), dalej z jagód goji, żurawiny i do ostatniej trójki soku z noni. 6. Do każdej probówki z ekstraktem jałowo dodać po 100l gęstwy. 7. Odebrać po 1 probówce z każdego oznaczenia i zmierzyć pH roztworu. Zapisać. 8. Zmierzyć liczebność komórek w pozostałych probówkach (pomiar gęstości optycznej za pomocą densytometru) zapisać wyniki jako czas 0h. 9. Probówki umieścić w cieplarce (37°C) na 24 h (potem przełożyć do chłodni). 10. Po inkubacji wykonać pomiar gęstości optycznej za pomocą densytometru DEN-1B, a potem zmierzyć pH. 2. Wpływ różnych stężeń etanolu na L. acidophilus LA-5 1. Przygotować gęstwę bakterii w MRS o gęstości ok. 0,5 MF (standard McFarlanda 0,5 odpowiada 1,5 x 108 cfu/ml). . 2. Do kolejnych probówek odmierzyć jałowego MRS w ilości podanej w tabeli poniżej. 3. Następnie do kolejnych probówek odmierzyć odpowiednie objętości etanolu. __________________________________________________________________________________________ KATEDRA TECHNOLOGII FERMENTACJI I MIKROBIOLOGII TECHNICZNEJ http://www.ar.krakow.pl/tz/ktfimt/ 1 Bioaktywne składniki żywności funkcjonalnej Ćwiczenie 2 część praktyczna ___________________________________________________________________________ 4. Do wszystkich probówek (za wyjątkiem kontroli negatywnych) dodać po 100l gęstwy. 5. Zmierzyć liczebność komórek w probówkach (pomiar gęstości optycznej za pomocą densytometru) zapisać jako czas 0h. 6. Probówki umieścić w cieplarce (37°C) na 24 h (potem wstawić do chłodni). 7. Po inkubacji wykonać pomiar gęstości optycznej za pomocą densytometru DEN-1B. Oznaczenie probówki Medium Objętość EtOH [µL] 1a 1b 1c 1Ø 4900 4900 4900 4900 - 2a 2b 2c 2Ø 4900 4900 4900 4900 5 5 5 5 3a 3b 3c 3Ø 4875 4875 4875 4875 25 25 25 20 4a 4b 4c 4Ø 4850 4850 4850 4850 50 50 50 50 5a 5b 5c 5Ø 4775 4775 4775 4775 125 125 125 125 6a 6b 6c 6Ø 4650 4650 4650 4650 250 250 250 250 Stężenie końcowe EtOH MF przed dodaniem bakterii MF Po dodaniu bakterii t=0 h MF t=24 h K poz K poz K poz Kontrola poz bez bakterii 0,1% 0,1% 0,1% Kontrola 0,1% bez bakterii 0,5% 0,5% 0,5% Kontrola 0,5% bez bakterii 1% 1% 1% Kontrola 1% bez bakterii 2,5% 2,5% 2,5% Kontrola 2% bez bakterii 5% 5% 5% Kontrola 5% bez bakterii Piśmiennictwo 1. Gibson G.R., Roberfroid M.B. Handbook of prebiotics, CRC Press, Taylor & Francis Group, Boca Raton, 2008 __________________________________________________________________________________________ KATEDRA TECHNOLOGII FERMENTACJI I MIKROBIOLOGII TECHNICZNEJ http://www.ar.krakow.pl/tz/ktfimt/ 2 Bioaktywne składniki żywności funkcjonalnej Ćwiczenie 2 część praktyczna ___________________________________________________________________________ 2. Probiotyki w żywności. Właściwości zdrowotne i żywieniowe oraz wytyczne do ich oceny, Polskie Towarzystwo Probiotyczne i Probiotyczne, Kraków, 2007. 3. Salminen S., von Wright A., Ouwehand A. Lactic Acid Bacteria: Microbiological and Functional Aspects, Marcel Dekker, Inc., New York, U.S.A, 2004. __________________________________________________________________________________________ KATEDRA TECHNOLOGII FERMENTACJI I MIKROBIOLOGII TECHNICZNEJ http://www.ar.krakow.pl/tz/ktfimt/ 3