Dako Dual Endogenous Enzyme Block Nr kat. S2003

Dako
Dual Endogenous
Enzyme Block
Nr kat. S2003
Gotowy do uŜycia
Przeznaczenie
Do stosowania w diagnostyce in vitro.
Opisywany produkt jest przeznaczony do stosowania w odczynach immunohistochemicznych z
wykorzystaniem peroksydazy oraz fosfatazy alkalicznej w preparatach cytologicznych, zamroŜonych
skrawkach tkankowych oraz skrawkach utrwalanych w formalinie i zatapianych w parafinie.
Dostarczane
odczynniki
Nr kat. S2003
Dual Endogenous Enzyme Block jest dostępny w następujących ilościach:
15 mL
10x11 mL
Do barwienia metodą ręczną
Przystosowany do stosowania z aparatem Dako Autostainer.
Środki ostroŜności
1. Do stosowania przez wyszkolony personel.
2. Jak w przypadku kaŜdego materiału biologicznego, naleŜy stosować odpowiednie procedury obchodzenia
się z nim.
3. W celu uniknięcia kontaktu z oczami i skórą, naleŜy nosić odpowiednie osobiste wyposaŜenie ochronne.
4. Niewykorzystany odczynnik naleŜy usuwać zgodnie ze stosownymi przepisami lokalnymi i krajowymi.
Przechowywanie
Przechowywać w temperaturze 2-8 °C.
Przygotowanie
odczynników
Gotowy do uŜycia Przed uŜyciem naleŜy pozostawić preparaty, w celu ogrzania do temperatury pokojowej.
Procedura
Próbki są inkubowane z Dual Endogenous Enzyme Block przez 10 minut w temperaturze pokojowej i
następnie przed naniesieniem pierwotnego przeciwciała odpłukiwane odpowiednim buforem przemywającym,
takim jak bufor Tris, PBS lub TBS.
Wyniki
W odczynach IHC często stwierdza się obecność endogennej peroksydazy, aktywność o typie peroksydazy
lub obecność fosfatazy alkalicznej. Niektóre związki mogą równieŜ dawać odczyn tła niezwiązany ze swoistą
reakcją immunologiczną.
Peroksydazy najczęściej wykazują aktywność wobec hemoprotein, np. hemoglobiny krwinek czerwonych, mioglobiny
komórek mięśniowych, cytochromów w granulocytach i monocytach oraz katalazy w wątrobie i nerkach.1
Silna endogenna aktywność fosfatazy alkalicznej jest wyraźnie widoczna w róŜnorodnych rodzajach komórek i
tkanek, w tym nabłonku pęcherza moczowego, blaszki właściwej jajnika, nerkach i śliniankach.2 Izoforma
jelitowa fosfatazy alkalicznej najczęściej występuje w rąbku szczoteczkowym komórek nabłonkowych jelita
cienkiego.3 Izoforma łoŜyskowa fosfatazy alkalicznej w warunkach prawidłowych jest wytwarzana w
mikrokosmkach syncytiotrofoblastu łoŜyska.4 W preparatach cytologicznych obecność fosfatazy alkalicznej
stwierdza się w granulocytach obojętnochłonnych segmentowanych, pałeczkowatych i metamielocytach.
Fosfataza alkaliczna występuje równieŜ w komórkach białaczkowych przewlekłej i ostrej białaczki
granulocytarnej oraz w niektórych rzekomobiałaczkowych odczynach neutrofilowych.
Podczas oceny preparatów tkankowych przy uŜyciu IHC z zastosowaniem HRP i AP, występowanie
endogennej peroksydazy i fosfatazy alkalicznej moŜe niejednokrotnie zaburzać swoisty odczyn antygenu
docelowego. Aktywność endogennej peroksydazy i fosfatazy alkalicznej moŜe być tłumiona przez
zastosowanie preparatu Dual Endogenous Enzyme Block, powodującego hamowanie endogennej
peroksydazy, enzymów o typie peroksydazy oraz fosfatazy alkalicznej w preparatach cytologicznych,
zamroŜonych skrawkach tkankowych i zatapianych w parafinie.
Próbki
(122053-001)
Do badania moŜna wykorzystywać zamroŜone skrawki tkankowe oraz preparaty cytologiczne, np. rozmazy
krwi obwodowej, szpiku kostnego i innych płynów ustrojowych zawierających znaczną liczbę komórek
hematopoetycznych. W przypadku zamroŜonych skrawków tkankowych zaleca się utrwalanie w acetonie.
W przypadku rozmazów krwi i szpiku kostnego, zalecane jest utrwalanie w acetonie/metanolu.
304869PL_002 str. 1/2
Aplikacje
Opisywany produkt powoduje tłumienie nieswoistego odczynu wywołanego obecnością endogennej
peroksydazy lub aktywnością o typie peroksydazy, w odczynach IHC wykorzystujących peroksydazę.
Produkt powoduje równieŜ tłumienie nieswoistego odczynu wywołanego obecnością endogennej
peroksydazy alkalicznej w odczynach IHC z zastosowaniem fosfatazy alkalicznej.
Ograniczenia metody
Wybarwienie preparatów jest uzaleŜnione od obróbki i przeprowadzenia tkanki przed wykonaniem odczynu.
Nieprawidłowe utrwalanie, zamraŜanie, rozmraŜanie, przemywanie, suszenie, ogrzewanie lub wykonywanie
skrawków moŜe powodować artefakty, ukrycie przeciwciał lub prowadzić do uzyskania wyników fałszywie
dodatnich. Wyniki fałszywie dodatnie mogą być równieŜ wywołane przez reaktywność krzyŜową lub nieswoiste
reakcje z komórkami zmienionymi martwiczo lub uszkodzonymi. Podczas stosowania opisywanego produktu
z preparatami rozmazów krwi lub szpiku kostnego moŜe dojść do lizy krwinek czerwonych.
Piśmiennictwo
1. Boenisch T. In: Naish SJ, ed. Handbook immunochemical staining methods. Carpinteria: Dako 1989
2. Ponder BA and Wilkinson MM. Inhibition of endogenous tissue alkaline phosphatase with the use of
alkaline phosphatase conjugates in immunohistochemistry. J Histochem Cytochem 1981; 29(8):981
3. Uchida T, et al. Immunohistochemical localization of placental and intestinal alkaline phosphatases.
In DeLellis RA (ed.) Advances in immunohistochemistry. New York: Masson Publishing 198;185
4. Groote GD, et al. Use of monoclonal antibodies to detect human placental alkaline phosphatase.
Clin Chem 1983; 29(1):115
Wydanie 06/10
(122053-001)
304869PL_002 str. 2/2