Biochemia Genetyczna

1976 Powstaje Genentech (R. Swanson, H. Boyer)
1977 Synteza somatostatyny w bakteriach
1978 Sklonowano ludzką insulinę
1979 Sklonowano ludzki hormon wzrostu
1980 Firma Genentech wchodzi na rynek z kapitałem 35 milionów dolarów
1982 Pierwszy produkt firmy - ludzka insulina
1984 Produkcja laboratoryjna czynnika VIII (w terapii pacjentów z hemofilią)
1985 Firma wchodzi z produkcją protropiny (ludzki czynnik wzrostowy) preparat dla
upośledzonych dzieci
1987 Firma produkuje Activase (aktywator plazminogenu) rozpuszcza zakrzepy krwi u
pacjentów zawałowych
1990 Firma produkuje Actimmune (interferon 1)
1990 Fuzja z Roche (kapitał 2.1 miliarda dolarów)
5mg somatostatyny=0.5miliona mózgów owczych=kilka litrów hodowli bakteryjnej
najmniejszą ilość EGF z 150 000 litrów ludzkiego moczu
Największy sukces finansowy odniosły firmy produkujące białka terapeutyczne:
Czynniki krzepnięcia
Antykoagulanty
Insuliny
Hormon wzrostowy
Hormon stymulujacy jajeczkowanie
Czynnik hematopoezy
Interferony interlekiny
Wartość sprzedaży tych białek wyniosła 34 biliony $ w 2004
Przewidywana wartość sprzedaży w 2010 – 52.2 biliona $
Aktualne prace nad wydłużeniem czasu półtrwania (protease resistance technology,
PEGYlation) i technologiami lokowania białek w odpowiednich organach lub tkankach
Klonowanie
DNA jest monitorowany
w elektroferezie agarozowej
Przegląd metod hybrydyzacji i transferu kwasów nukleinowych
Hybrydyzacja kwasów nukleinowych
Immobilizacja KN
•
southern
•
northern
•
dot blot
•
kolonie
Prehybrydyzacja
Siarczan dekstranu i inne polimery
Hybrydyzacja
Mleko sproszkowane, heparyna, SDS,
roztwór Denhardta (ficol,PVP,BSA)
Odmywanie
Mocznik, formamid
Heterologiczny DNA
Detekcja
Tm=81.5o+16.6logM+o.41(%G+C), >100bp
Tm=4x(#GCbp)+2x(#ATbp), wash temp.
Tm-25o for long DNA, 1oC/1% divergence
Typowa metoda transferu kwasów nukleinowych
Hybrydyzacja kwasów nukleinowych
Hybrydyzacja cDNA z mikromacierzą
RT PCR array
Oligo array
RT PCR array wysoce czuły